Антигрибковый состав для стен: Средство противогрибковое Ceresit СТ 99, 1 кг

Содержание

Антигрибковое средство для стен: полный обзор, состав, выбор

Плесень на стенах – распространенное явление в домах и квартирах. Размножение споровых образований происходит быстро, и если не устранять их, то грибок может перейти на другие поверхности. Искоренить проблему позволит антигрибковое средство для стен. О популярных препаратах рассказано в статье.

Признаки

Возникновение грибка – неприятное явление, которое способно повредить дорогостоящий ремонт. Плесень не только способна испортить внешний вид, но и ухудшить микроклимат помещения, и навредить здоровью людей. При своевременном выявлении «врага» получится упростить борьбу.

Споры плесневого грибка являются токсичными. После проникновения в организм они приводят к:

  • аллергии;
  • бронхиту;
  • мигрени;
  • туберкулезу;
  • астме.

Особенно восприимчивыми являются пожилые люди и дети. О возникновении грибка свидетельствуют серые, черные, темно-зеленые точки и пятна на стенах и потолке. Еще образуется сырой, неприятный запах, отслаивается краска, обои, осыпается штукатурка и темнеют межплиточные швы.

Некоторые отмечают ухудшение самочувствия – снижение внимания, учащение головных болей, быстрая утомляемость. Устранять плесень надо комплексно.

Причины

Главными причинами образования грибка считается влажность воздуха свыше 70 % и температура от 20 градусов. «Плачущие» окна являются тревожным признаком. Но это не одни факторы появления вредных микроорганизмов. Грибок появляется при:

  1. Отсутствии или недостаточной вентиляции. Обычно грибок развивается в углах помещений – в участках, где возникает застой воздуха. Если «продув» достаточный, появляются завихрения. В итоге воздухом задуваются споры, а избыток влаги устранятся в вентканал.
  2. Некачественной гидроизоляции фундамента. Из-за этого будет капиллярный подсос влаги от фундамента – стены в помещении сыреют.
  3. Неудовлетворительном состоянии водопровода и протечки канализации. При периодическом намокании стен обеспечивается положительная среда для развития грибка.
  4. Тонких промерзающих стенах. По причине недостаточной теплоизоляции наблюдается сдвиг точки росы, внутри помещения на стенах скапливается конденсат.
  5. Холодном чердаке или протекающей крыше. Это распространенная причина образования плесени на верхних этажах.
  6. Неправильном использовании увлажнителей воздуха. С созданием благоприятных условий для экзотических растений иногда возникает плесневой грибок.

Многие отделочные и строительные материалы поражаются грибком. Темные пятна возникают на обоях, плитке, деревянной отделке и штукатурке.

Виды фунгицидных средств

Обычно средства против плесени фунгицидные. Это биологические или химические вещества, которые подавляют развитие грибков. Активные ингредиенты есть в составе строительных смесей для защиты от плесени. В зависимости от назначения есть 2 вида средств:

  • грунтовки, выполняющие функцию профилактики;
  • концентрированные смеси.

Эмульсии для профилактики используют при осуществлении ремонта – для отделки стен завершающим покрытием. Противогрибковые грунтовки способны укрепить основание, повысить адгезию, снизить пористость материала, избавиться от плесени и защититься от развития грибка.

При покупке грунтовки следует обращать внимание на состав. В эмульсии не должно быть карбендазима – токсичного фунгицида, который запрещен на территории Европы. Важным фактором при выборе является вид обрабатывающего покрытия:

  • укрепляющую грунтовку выбирают для шпаклеванных и оштукатуренных стен под покраску или обои;
  • грунт глубокого проникновения – лучший выбор для малопористых оснований;
  • универсальным составом обрабатывают разные типы поверхностей.

Есть и другие антигрибковые средства для стен – концентраты. Ими обрабатывают участки, которые поражены грибком. Средства проникают в структуру материала и избавляют от плесени, лишайников, мхов. Многие концентрированные препараты имеют длительный эффект и не допускают вторичного заражения. Для профилактики и устранения грибков применяют составы на основе следующих компонентов:

  • латексные – состав обогащен солями тяжелых металлов, поэтому средством обрабатывают стены в жилых комнатах;
  • акриловые – антисептические средства используются внутри и снаружи помещения;
  • алкидные – эмульсии часто применяют для обработки деревянных поверхностей.

Грунтовки и концентраты сразу готовы к использованию. Для профилактики концентрированная эмульсия разводится водой.

Milkill

Это эффективное антигрибковое средство для стен. В латексной эмульсии действующим компонентом является биоцид, который уничтожает споры грибков и плесени. Средство используют в качестве профилактики мелкопористых и маловпитывающих поверхностей перед отделкой. Эмульсия идеальна для фундаментов, бассейнов, кирпичных и бетонных стен, гипсокартонных и фанерных покрытий.

На 1 слой расходуется 250 г/ кв. м. Желательно обрабатывать в 2-3 слоя. Глубина проникновения средства составляет 1-5 мм. Высыхает эмульсия за сутки. Ее выбирают для обработки внутри и снаружи дома. Смесь неоднородная, поэтому перед использованием надо перемешать. Работы выполняются при температуре 5-30 градусов.

Acryl Grundierung

Это антигрибковое средство для стен глубокого проникновения, имеющее антибактериальное действие. Акриловая грунтовка прекрасно подходит для бетонных, кирпичных стен, фасадную или интерьерную покраску. Связующим компонентом является акриловый сополимер, основной цвет – полупрозрачный белый с фиолетовым тоном.

Данное средство является экологически чистым без запаха. Высыхает состав за сутки. Наверх грунтовки можно наносить разные краски на водной основе. Использование состава уменьшает расход краски, уменьшая впитывающее действие поверхности.

Schimmelstopp Dufa

Данная добавка является фунгицидной. Она используется с синтетическими штукатурками и фасадными, водоразбавляемыми дисперсионными красками. Концентрат имеет длительный защитный эффект от появления плесени, грибка и водорослей. Средство выбирают для покрытия стен внутри и снаружи.

Одной емкости достаточно для 25 кг штукатурки или 10 л краски. Средство не стоит использовать при температуре меньше +5 градусов, при дожде или на сильно разогретых поверхностях. После добавления грунтовки в краску или штукатурку смесь перемешивают. Средство против плесени наносится на чистое и сухое основание.

Mixonit GR43

Универсальный грунт добавляют в сухие строительные смеси. Средство наносят на минеральные покрытия с высокой поглощающей способностью. Им обрабатывают бетон, кирпич, гипс, цемент, стекломагнезитовые листы, гипсокартон, пеноблок и керамзитоблок.

Эмульсия не имеет неприятного запаха. Еще она обладает паропроницаемостью – возникает «дышащий» защитный слой. Средство проникает до 10 см. Главной функцией является защита от образования плесени, грибков, бактерий.

Ceresit

Противогрибковый раствор Ceresit CT 99 является одним из популярных для устранения плесени, грибков, лишайников. Средство экологически безопасно, может применяться внутри помещения и снаружи. Концентратом обрабатывают минеральные поверхности: кирпич, бетон, штукатурку. На металлических основаниях не применяется.

Средство Ceresit CT 99 включает органические биоциды. В составе отсутствуют тяжелые металлы. После процедуры нет следов. Препарат является паропроницаемым. Для полного высыхания нужно 4-5 часов. Перед применением препарат разводится водой в количестве 1:2 до 1:5 – все зависит от уровня поражения стены. Наносить раствор надо кисточкой.

«Фунгифлуд Альпа»

Fongifluid Alpa – фунгицидный раствор, который уничтожает биоразрушения стены и защищает от вторичного заражения. Длительность действия – около 2 лет. После нанесения раствора покрытие «дышит», поэтому не будет ухудшения микроклимата в помещении.

Этот состав предназначен для обработки древесины, черепицы, кирпича, цементной штукатурки, гипсокартона и керамической плитки. Поверхность высыхает за 6 часов. Раствор эффективен от множества микроорганизмов. Препарат не изменяет цвет, блеск и фактурность поверхности.

«Олимп»

«Олимп стоп-плесень» – средство, предназначенное для ванн, подвалов, погребов, парников и квартир. В нем отсутствуют хлорные соединения и летучие токсические компоненты. Состав бесцветный и безопасный для людей и животных.

Препарат «Олимп стоп-плесень» идеален для обработки бетона, кирпича, окрашенных и оштукатуренных поверхностей. Еще его используют, если стены деревянные, керамические, каменные, гипсокартоновые.

«Нортекс»

«Нортекс-дезинфектор» — средство, обеззараживающее бетон от образования биоразрушителей. Состав позволяет избавиться от плесени, защитить от ее повторного появления. Еще он имеет функцию антисептика. «Нортекс-дезинфектор» повышает срок эксплуатации бетонных стен.

Средство имеет длительный защитный эффект. Оно способно контактировать со многими лакокрасочными материалами. После обработки создается прочная защита от вымывания. Дезинфектор наносят на камень, бетон, кирпич.

Правила обработки

Как убрать плесень со стен? Процедура выполняется следующим образом:

  • Сначала надо устранить покрытие.
  • Затем определяется глубина поражения поверхности.
  • Потом смачивают стену водой. Это защищает от попадания спор в воздух.
  • Применяя шпатель, надо убрать часть штукатурки с грибком и плесенью.
  • Пораженные участки зачищаются наждачной бумагой.
  • Надо тщательно высушить поверхность. Можно использовать тепловентилятор.
  • Можно наносить противогрибковое средство в 1 слой.
  • Примерно через 5 часов обработка выполняется вторично.
  • Для обеспечения максимального действия нужно 4-5 слоев.
  • Стены покрывают грунтовкой-антисептиком.
  • Выполняется штукатурка раствором, в котором присутствует антисептическое средство.
  • Если стена снова оклеивается обоями, то в клей добавляется антисептик.

Это вся процедура, как убрать плесень со стен. Качественная обработка будет служить защитой от повторного появления грибков. Остается лишь поддерживать в помещении благоприятный микроклимат.

инструкция по применению, видео и фото

Грибки и плесени являются нашими врагами, которые не только разрушают наше жилище, но и наносят серьезный вред здоровью. Для борьбы с ними были разработаны специальные вещества, в том числе противогрибковая грунтовка для стен, которая продается на строительном рынке и в любом специализированном магазине.

Грунтовка против плесени и грибка для обработки стен, потолков и полов

Хорошо, когда грибок и плесень видны на поверхностях. Однако чаще всего они скрываются в теплоизоляционном слое и многие даже не понимают, почему у них начинает развиваться аллергия, астма и происходят другие расстройства здоровья. Поэтому не стоит пренебрегать противогрибковыми препаратами для стен, потолков и полов, проводя ними профилактику при проведении отделочных и ремонтных работ.

Опасность от грибков и плесени

Эти микроорганизмы во время своей жизнедеятельности выделяют в атмосферу помещения ядовитые токсины. Последние, накапливаясь в нашем организме, являются катализатором развития ряда опасных заболеваний, включая снижение  иммунитета и онкологию.

Кроме того, данные микроорганизмы вызывают следующие болезни:

  • бронхиальную астму;
  • аллергию;
  • детский диатез;
  • насморк;
  • бронхит;
  • мигрень;
  • отит;
  • нарушения работы сердца и сосудов;
  • микотоксикоз;
  • поражение внутренних органов.

На фото – зараженные грибками стены

Споры плесени начинают быстро размножатся при попадании в благоприятную среду.

Какие нужно принимать меры

  1. Используйте противогрибковые грунтовочные смеси, которые позволяют дать отпор плесени, а также предупреждают ее появление.

Однако основной причиной ее появления является:

  • повышенная влажность;
  • промерзание поверхности;
  • плохая вентиляция в помещениях.

Поэтому необходимо не только бороться с уже появившейся плесенью, но и с причинами, которые могут способствовать этому.

  1. Требуется соблюдать технологию при создании тепло- и гидроизоляции.
  1. Проведите обследование помещений перед проведением ремонтных работ, чтобы выяснить возможные причины возникновения гнилостных микроорганизмов.

Например:

  • если будет обнаружен запах плесени на первом этаже, значит, у вас не в порядке гидроизоляция. Возможно, придется убрать деревянный пол и переделать стяжку;
  • появившиеся белые или серые пятна на поверхностях в помещении говорят о плохо заделанных стыках плит.

Правильно настройте вентиляцию

  1. Важно обеспечить нормальную работу вентиляции в помещениях с повышенной влажностью.
  1. Не следует устанавливать мебель вплотную к наружным холодным стенам.
  1. Проверяйте периодически состояние канализации. Нередко грибки и плесень возникают на подтекающих трубопроводах.

Виды антигрибковых грунтовок

Цена продукта зависит от состава, он может быть на акриловой, алкидной или минеральной основе. Основными компонентами являются фунгициды, уничтожающие и предотвращающие появление вредных микроорганизмов. Часто такие грунтовочные смеси называют также антибактериальными или антисептическими.

Универсальная грунтовка от плесени и грибка

Антигрибковая грунтовка для стен, потолков и полов выбирается исходя от типа поверхности. Есть, конечно, и универсальные продукты, однако самого лучшего эффекта вы сможете добиться тогда, когда грунтовка будет соответствовать основанию.

С их помощью можно обрабатывать:

Антигрибковая грунтовка для стен на латексной основе

 Более подробно:

  1. Milkill является грунтовкой глубокого проникания, она предлагается в виде латексной эмульсии. В ее составе присутствует антимикробное вещество. Используется для обрабатывания мелкопористых и слабовпитывающих поверхностей. Инструкция рекомендует наносить состав в 2-3 слоя на кирпич и бетон в помещениях с высокой степенью влажности.
  1. «Acryl Grundierung» OLYMPIC – антигрибковая грунтовка глубокого проникновения на акриловой основе. Состав позволяет значительно уменьшить параметры впитываемости поверхности.

Традиционные антисептические грунтовки необходимы для профилактики возникновения вредных микроорганизмов. Если же необходимо обработать уже зараженные поверхности, необходимо использовать концентрированные средства – «Концентрат для уничтожения плесени и грибков».

Концентрированный антисептический раствор

Одним из них является Ceresit CT 99.

Данный состав позволяет бороться с:

  • грибками;
  • плесенью;
  • мхами;
  • лишайниками.

Продукт экологически безопасен, способен глубоко проникать в обрабатываемую поверхность и обладает длительным действием. Используется для внутренних и наружных работ.

Рекомендуется для бетонных, кирпичных и оштукатуренных поверхностей. Форма выпуска – пластиковая бутылка объемом 1 л. Необходимо перед применением развести концентрат водой.

Правила применения

  1. Очистите поверхность перед использованием антибактериальной грунтовки и просушите ее. Смойте плесень теплой водой, в которую добавьте «Белизну».

Совет: если грибок проник внутрь штукатурки, то недостаточно убрать с поверхности черные пятна. Для лучшего эффекта обработайте оштукатуренные и кирпичные стены строительным феном или паяльной лампой.

  1. Используйте для просушки стен и потолков вентиляторы и теплоконвекторы, так же не забывайте и про проветривание.

Совет: не используйте обычные грунтовочные смеси для укрепления рыхлых поверхностей перед нанесением антигрибковых грунтовок. При высыхании они образуют пленку, поэтому это не даст ожидаемых результатов.

  1. Проводите работы в сухом помещении, лучше – летом. Помещение в это время можно без труда проветривать, стены теплые и здоровье не пострадает.

Акриловый грунт

  1. Наносите грунтовку своими руками кистью, валиком или методом напыления. Лучший эффект дает кисть с натуральной щетиной, так как вы сможете ней дотянуться до труднодоступных мест.

Совет: не забывайте при обработке помещения соблюдать меры безопасности, в том числе, применяйте респиратор, плотную одежду и резиновые перчатки.

Вывод

Применение антисептических грунтовочных составов дает возможность защитить поверхность от гнилостных микроорганизмов, а также поставить надежный заслон для их повторного появления.

Однако не следует забывать и про мероприятия, которые необходимо проводить параллельно с этими действиями, в частности, обеспечить нормальный уровень вентиляции помещений.

Видео в этой статье поможет вам найти дополнительную информацию по данной тематике.

Понравилась статья? Подписывайтесь на наш канал Яндекс.Дзен

Добавить в избранное
Версия для печати

Как вывести грибок и плесень на балконе?

Если вы заметили на потолке или несущих конструкциях своего балкона темные точки, которые с течением времени превращаются в неэстетичные грязные разводы, это может свидетельствовать о наличии на балконе грибка. Такое явление не слишком приятно, ведь избавиться от него не так-то просто. Если вы решите устранить плесень механическим путем, через некоторое время она просто появится снова. Для того чтобы решить проблему радикально, нужно изменить или улучшить вентиляционную систему, а также рассмотреть возможность обогрева помещения.

Причины появления грибка

Основная причина распространения грибка – неправильная вентиляция помещения. Проветривание балкона с раскрытыми окнами в этом случае практически бесполезно. Помещение не должно быть полностью закрытым, в нем постоянно должны перемещаться потоки воздуха, которые будут препятствовать скоплению влаги. Данный процесс осуществляется совершенно естественно, особенно если в помещении имеются рамы из дерева. Древесина хорошо пропускает воздух через микроскопические поры, поэтому на балконе всегда будет благоприятный микроклимат. Если в помещении остекление выполнено из металлопластика, вентиляция там практически отсутствует.

Высокий уровень влажности – это еще один фактор появления грибка. Плохая вентиляция и влажность создают благоприятную почву для появления обильной плесени. Грибок на балконе может появиться и по другим причинам, например:

  1. промерзание наружных конструкций;
  2. пустотелые швы панельного типа;
  3. трещины в кладке из кирпичей;
  4. неправильно проведенное оштукатуривание.

Меры профилактики

Для того чтобы бороться с грибком, нужно выяснить причину его появления. Если балкон имеет пластиковое остекление, посмотрите, нормально ли функционируют клапаны вентиляционного типа. В некоторых случаях необходима установка дополнительного клапана, который имеет повышенную чувствительность к влаге. В режиме автоматики такая деталь будет регулировать проникновение свежих потоков воздуха. Среди преимуществ вентиляционных клапанов для пластиковых окон помимо удобной автоматической системы проветривания помещения, стоит отметить отсутствие сквозняков и уличного шума.

Если несущие конструкции промерзают, проведите работы по их утеплению. Для этого можно использовать пеноплекс или обычный пенопласт. Тем не менее, если вы живете высоко, рекомендуется выполнять утепление внутреннего типа (при этом не стоит забывать о пароизоляции). Все трещины в несущих конструкциях необходимо заделать. То же самое касается и швов, которые нередко присутствуют между отдельными плитами.

Изучите также плиту балкона на верхнем этаже. Вероятно, в месте ее контакта со стеной присутствует течь, которую требуется устранить. Проверьте все зоны, которые могут выступать в качестве источников сырости. Такие участки нужно заделать раствором цемента, а также гидроизоляционными материалами.

Еще один метод – обогрев помещения при наступлении холодного времени года. Для этого используются обогреватели электрического типа, которые имеют регулятор температуры. Поддерживая оптимальный температурный режим на своем балконе, вы избежите появления неприятного грибка.

Как устранить грибок

Целесообразнее всего устранять это явление только после исключения всех факторов его возникновения. Все меры лучше принимать в сухих погодных условиях. В этом случае несущие конструкции будут полностью сухими. На первой стадии работ нужно удалить сам грибок и верхний слой отделочного материала. Для этого можно использовать обычный шпатель. Если на несущих конструкциях имеются обои, снимите их, а если на стене присутствует побелка, она снимается непосредственно до слоя штукатурки.

При удалении грибкового налета рекомендуется использовать специальную марлевую повязку или же респиратор, предназначенный для строительных работ. В этом случае вы не будете вдыхать ядовитые споры, которые могут спровоцировать аллергическую реакцию.

Обработка с помощью химических препаратов

Очищенная поверхность просушивается с помощью специального строительного фена, паяльной лампы или вентилятора с теплым воздухом. После этого на нее наносится химический состав противогрибкового типа. Таким составом нужно обработать все стены, а не только место, которое поражено грибком.

В качестве самых известных средств можно выделить такие, как Хомеенпойсте, С-Гидротекс-П и другие. Через несколько часов такую обработку необходимо повторить. После того, как средство полностью высохнет, стены покрываются грунтовкой и отделочным материалом. При оклейке обоями рекомендуется применять клей, в состав которого входят добавки антигрибкового характера.

Народные методики

Если грибок выражен не слишком сильно, используются народные методики борьбы. Так, можно взять пищевую соду, которая наносится на несущие конструкции с помощью влажной ткани. После того, как состав высохнет, он удаляется с поверхности с помощью сухой щетки.

Еще один препарат – натуральная бура, которая совершенно безвредна для человека. Половина стакана этого порошка растворяется в воде (достаточно взять один литр). Смывать такой состав не требуется.

После того, как грибок устранен, старайтесь держать это помещение сухим и теплым. Не держите на балконе мокрое белье (тщательно отжимайте его), а также растения, которые предпочитают влагу. Не стоит высушивать в этом помещении овощи.

Калькулятор остекления балконов и лоджий

Антигрибковое средство для стен: антисептики против плесени

Антигрибковое средство для стен: сравнительный обзор лучших вариантов

Плесень на стенах – нередкое явление в современных домах и квартирах. Споровые образования размножаются очень быстро и если не предпринять решительных мер по их удалению, то грибок перекочует на потолок, пол, мебель и одежду.

Для оперативного решения проблемы необходимо выбрать эффективное антигрибковое средство для стен и устранить первопричину появления плесневых микроорганизмов.

Мы предлагаем вам ознакомиться с наиболее действенными средствами противостояния крайне опасному биологическому воздействию. У нас подробно описаны способы использования эффективных видов бытовой химии, приведены варианты изготовления и применения народных составов. Материал дополняют наглядные иллюстрации и видео-руководства.

Содержание статьи:

  • Признаки и причины образования грибка
  • Разновидности фунгицидных средств
  • Грунтовки для проведения профилактики
    • #1: Milkill – обработка кирпича и бетона
    • #2: Acryl Grundierung – состав глубокого проникновения
    • #3: Schimmelstopp Dufa — фунгицидная добавка
    • #4: Mixonit GR43 – широкий спектр действия
  • Противогрибковые средства по дереву
    • #1: Dufa-Holzlasur – лазурь для дерева
    • #2: Барамон С30 – устойчивая пропитка
    • #3: Pinotex Base – обработка наружных стен
  • Эмульсии для борьбы с плесенью
    • #1: Ceresit CT 99 – длительное действие
    • #2: АБЕДИС 06 – удаление органического налета
    • #3: Dali – универсальный антисептик
    • #4: Fongifluid Alpa – «лечение» и профилактика
  • Народные методы против плесневого грибка
  • Выводы и полезное видео по теме

Признаки и причины образования грибка

Появление грибка на стенах – крайне неприятное явление, способное свести на нет дорогостоящий ремонт в квартире.

Плесень не только портит внешний вид, она ухудшает микроклимат в помещении и вредит здоровью человека. Своевременное выявление «врага» существенно облегчает борьбу с грибком. Подробно о методах борьбы с опасным биологическим явлением рассказано в одной из статей нашего сайта.

Споры плесневого грибка токсичны. Попадая в организм человека, они способны вызывать ряд заболеваний: аллергию, бронхит, мигрень, туберкулез и астму. Особенно восприимчивы пожилые люди и дети

О появлении грибка в доме свидетельствуют следующие признаки:

  • наличие серых, черных, темно-зеленых точек и пятен на стенах или потолке;
  • появление сырого, неприятного запаха в помещении;
  • отслаивание краски, обоев, осыпание штукатурки и потемнение межплиточных швов.

Некоторые могут отмечать ухудшение самочувствия – концентрация внимания снижается, учащаются головные боли, возникает быстрая утомляемость.

Выводить плесень необходимо комплексно. Окончательного и бесповоротного избавления от грибка можно достичь, устранив причины его появления.

Главные причины образования грибка: влажность воздуха более 70% и температурный режим от 20°С. «Плачущие» окна – первый тревожный сигнал

Однако влажность и температурные показатели далеко не единственные факторы развития вредных микроорганизмов. К числу значимых причин относятся:

  • Отсутствие или недостаточная вентиляция. Как правило, грибок начинает развиваться в углах комнаты – в месте, где образуется застой воздуха. При достаточном «продуве» образуются завихрения – воздух задувает споры, а излишки влаги выводятся в вентканал.
  • Некачественная гидроизоляция фундамента. В результате некачественной постройки происходит капиллярный подсос влаги от сырого фундамента – стены в доме сыреют.
  • Неудовлетворительное состояние водопровода и протечки канализации. Периодическое намокание пола, потолка, стен и инженерных каналов создает благоприятную среду для развития грибка.
  • Тонкие промерзающие стены. Из-за плохой теплоизоляции происходит сдвиг точки росы, изнутри помещения на стенах оседает конденсат.
  • Холодный чердак или протекающая крыша. Это частая причина появления плесени на верхних этажах и мансардах.
  • Неправильное использование увлажнителя воздуха. При создании тропических условий для экзотических растений в оранжереях иногда поселяется плесневый грибок.
  • Большинство отделочных и строительных материалов могут поражаться грибком. Темные пятна появляются на обоях, плитке, деревянной отделке и штукатурке.

    Галерея изображений

    Фото из

    Самые благоприятные условия для появления и расселения грибка — ванные комнаты, душевые и туалеты, т.е. помещения с высоким уровнем влажности
    Плесень всегда сопутствует нарушениям строительных правил. Если пластиковый плинтус уложен без вентиляционного зазора, под ним обязательно расплодится грибок
    С невероятной скоростью плесневый грибок распространяется в швах между элементами плиточной облицовки. Поэтому для обустройства ванных рекомендуют использовать плиточный клей с антисептиком
    Грибок на оконных откосах часто вызван несоблюдением техники монтажа: недостаточная гидроизоляция откосов или негерметичный монтажный шов. Ненадлежащее утепление стен тоже провоцирует появление плесени
    Если помещение не обустроено вентиляцией, обеспечивающей нормативный воздухообмен, плесень может появиться даже под бумажными обоями
    Плесень практически всегда появляется под «не дышащей» отделкой, не пропускающей воздух, особенно, если нарушена технология применения
    Плесень способна поражать практически все стройматериалы, из которых сооружают несущие конструкции. Она разрушает бетон, кирпич, древесину
    Для того чтобы предотвратить разрушение и предупредить появление плесени применяются средства, позволяющие избавиться от грибка и провести профилактику

    Плесневый грибок в ванной комнате
    Очаг плесени под пластиковым плинтусом
    Распространение плесени в швах плиточной облицовки
    Грибковые колонии на оконных откосах
    Плесень на бетоне под бумажными обоями
    Колонии грибка под виниловыми обоями
    Синяя плесень на древесине
    Средства борьбы с разрушающим явлением

    Кроме того, плесневый грибок способен расселяться в бытовой технике, чаще всего от его появления страдают стиральные машинки, посудомойки и микроволновки.

    Разновидности фунгицидных средств

    Большинство противогрибковых средств для стен содержат фунгициды – вещества биологического или химического происхождения, подавляющие развитие грибков. Активные компоненты добавляются в разные строительные составы и смеси для защиты конструктивных элементов от плесени.

    Исходя из назначения выделяют две группы препаратов:

    • грунтовки для профилактики;
    • концентрированные составы для борьбы.

    Эмульсии для профилактики. Первая группа антисептиков применяется при выполнении ремонтных работ – до отделки стен финишным покрытием. Антигрибковые грунтовки укрепляют основание, повышают адгезию, снижают пористость материала, убирают плесень и препятствуют дальнейшему развитию грибка.

    При выборе противогрибковой грунтовки надо обратить внимание на состав. Эмульсия не должна содержать карбендазим – токсичный фунгицид, запрещенный в Европе

    Определяющим фактором выбора грунтовки с антисептиком против грибков и плесени служит тип обрабатывающего покрытия:

    • укрепляющая грунтовка – подходит для шпаклеванных и оштукатуренных стен под покраску или обои;
    • грунт глубокого проникновения – оптимален для малопористых оснований (гипсокартон, кирпич и бетон), а также под отделку «тяжелым» покрытием, например, плиткой;
    • универсальный состав – обработка разных типов поверхностей.

    Концентраты для удаления плесени. Средства для обработки поверхностей, пораженных грибком. Составы проникают в структуру материала и уничтожают плесневые грибки, лишайники и мхи. Многие концентрированные препараты обладают длительным действием и предупреждают повторное заражение.

    На рынке представлены фунгицидные эмульсии универсального применения и специализированные – под конкретное основание (дерево, камень, бетон). Более эффективны препараты узкой направленности

    Эмульсии для профилактики и удаления грибковых образований разрабатываются на основе разных связующих компонентов:

  • Латексные – в составе отсутствуют соли тяжелых металлов, поэтому средство рекомендовано для обработки стен в жилых комнатах. Дополнительный плюс – пропускание воздуха.
  • Акриловые – антисептические препараты применимы как внутри, так и снаружи помещения.
  • Алкидные – эмульсии часто используются для обработки деревянных оснований.
  • Форма выпуска грунтовок и концентратов – готовая к применению жидкость. В целях профилактики грибковых образований концентрированную эмульсию можно развести водой.

    Грунтовки для проведения профилактики

    Для предупреждения появления плесени во влажных помещениях на этапе ремонтно-строительных работ желательно использовать грунтовки с антисептическим свойством.

    #1: Milkill – обработка кирпича и бетона

    Milkill – латексная эмульсия, действующее вещество – биоцид, уничтожающий споры грибков и плесени. Предназначена для профилактической обработки мелкопористых и маловпитывающих поверхностей после выполнения гидроизоляции перед отделочными работами.

    Грунтовка глубокого проникновения подходит для обработки фундаментов, бассейнов, кирпичных и бетонных стен, гипсокартонных и фанерных покрытий, в том числе уже пораженных плесневым грибком

    Характеристики и особенности применения состава Milkill:

    • расход на слой – порядка 250 г/кв.м;
    • рекомендовано наносить 2-3 слоя;
    • глубина проникновения препарата – 1-5 мм;
    • время полного высыхания – 24 часа;
    • эмульсия белого цвета с резким запахом;
    • подходит для работ внутри и снаружи дома.

    Состав грунтовки неоднородный, поэтому перед применением ее надо хорошо перемешать. Работы выполняются в условиях плюсовой температуры (5-30°С).

    #2: Acryl Grundierung – состав глубокого проникновения

    Acryl Grundierung (Olimpic) – акриловая грунтовка глубокого проникновения, обладающая антигрибковыми и антибактериальными свойствами. Средство отлично подходит для обработки бетонных, кирпичных стен под шпатлевку, фасадную или интерьерную покраску, а также нанесение декоративной штукатурки.

    Связующее вещество грунта – акриловый сополимер, базовый цвет – полупрозрачный белый с незначительным фиолетовым оттенком. Состав экологически чистый, без запаха

    Технико-эксплуатационные характеристики Acryl Grundierung:

    • практический расход материала на один слой – 1 л/15 кв.м;
    • период высыхания – 1 день;
    • сверху грунтовки допустимо наносить любые виды красок на водной основе;
    • «рабочая» температура – 5-35°С.

    Применение состава существенно сокращает расход краски, снижая впитывающую способность поверхности. Антибактериальную грунтовку нельзя выливать в канализацию.

    #3: Schimmelstopp Dufa — фунгицидная добавка

    Высококонцентрированный грунт Schimmelstopp Dufa используется как добавка к синтетическим штукатуркам и фасадным, водоразбавляемым дисперсионным краскам. Концентрат оказывает длительное защитное действие от возникновения плесени, грибка и водорослей.

    Антиплесневый раствор Schimmelstopp Dufa применим для обработки стен внутри и снаружи помещения. Плотность эмульсии – 1 г/куб. см, фасовка – флакон на 250 мл

    Техническая информация:

    • содержимого емкости достаточно для 25 кг штукатурки или 10 л краски;
    • средство нельзя использовать при температуре воздуха, объекта ниже +5°С, в преддверии заморозков, во время дождя и на сильно разогретых поверхностях;
    • при температуре +20°С и влажности воздуха 65% высыхает в течении 4-х часов.

    После добавления грунтовки в краску или штукатурку смесь надо тщательно перемешать. Подготовленный состав наносится на вычищенное и высушенное основание.

    #4: Mixonit GR43 – широкий спектр действия

    Универсальный грунт Mixonit GR43 глубокого проникновения применяется как добавка в сухие строительные смеси (штукатурку, шпатлевки и затирки). Средство наносится на минеральные покрытия с высокой поглощающей способностью.

    Рекомендуемые основания: бетон, кирпич, гипс, цемент, стекломагнезитовые листы, гипсокартон, пеноблок и керамзитоблок. Грунтовка укрепляет рыхлые поверхности и придает им огнеупорность

    Достоинства использования антигрибковой эмульсии Mixonit GR43:

    • отсутствие неприятного запаха;
    • парапроницаемость – образуется «дышащий» защитный слой;
    • глубокое проникновение – до 10 см;
    • предотвращение появления плесени, грибков, бактерий и водорослей;
    • снижение расхода ЛКМ;
    • скорость высыхания – 3-4 часа;
    • устойчивость к многократным замораживаниям.

    К числу недостатков грунта относится невозможность его использования на основаниях, не впитывающих влагу.

    Рекомендовано нанесение 1-2 слоев. На рыхлых поверхностях надо придерживаться «мокрого» метода – последующий слой эмульсии наносится на невысохший предыдущий.

    Противогрибковые средства по дереву

    Древесина – наиболее восприимчивый к плесени материал. Ее следует в обязательном порядке обработать инсектицидами. Дерево, поврежденное грибком, очень быстро разрушается. Поэтому обработку поверхности надо проводить ежегодно в плановом порядке.

    #1: Dufa-Holzlasur – лазурь для дерева

    Dufa-Holzlasur – тонкослойная, декоративная глазурь для реставрации старых и защиты новых деревянных поверхностей. Влагорегулирующее и водоотталкивающее покрытие предохраняет дерево от негативного воздействия атмосферных осадков.

    Dufa-Holzlasur уничтожает появившиеся споры плесени и предупреждает образование грибка, синевы и гниения. Состав проникает вглубь дерева, придавая текстуре выбранный оттенок

    Характеристики Dufa-Holzlasur:

    • связующее вещество – алкидная смола;
    • сфера применения – наружная обработка деревянных поверхностей;
    • расход и количество слоев зависят от желаемого результата окрашивания;
    • широкая палитра тонировочных оттенков;
    • время высыхания – 4 часа.

    Антисептик Holzveredlung – это аналог грунтовки Holzlasur. Единственное отличие – глазурь Dufa-Holzveredlung образует глянцевое покрытие.

    #2: Барамон С30 – устойчивая пропитка

    Барамон С30 – фунгицид для обработки дерева. После нанесения на поверхность препарат в течение двух дней кристаллизуется и впоследствии не вымывается. Средство защищает дерево от грибков, плесени, бактерий, водорослей и мелких насекомых.

    Пропитка подходит для уничтожения уже появившейся грибковой плесени. Биоцид нового поколения, содержащийся в Барамон С30, повышает биологическую стойкость древесины

    Рекомендации по использованию фунгицида:

    • концентрат разводится водой в соотношении 1:6 соответственно;
    • расход эмульсии: 0,2 л/кв.м при обработке дерева внутри дома, 0,3 л/кв.м – для уличных конструкций;
    • в течение двух-трех дней после нанесения средства поверхность материала необходимо защищать от попадания воды;
    • Барамон С30 не подходит для пород деревьев, которые не поддаются пропитке, например, дуба.

    Недопустим контакт обработанных фунгицидом элементов с продуктами питания. Концентрат не повышает степень возгораемости древесины.

    #3: Pinotex Base – обработка наружных стен

    Pinotex Base – грунтовка-антисептик на алкидной основе. Применяется при наружных работах для обработки деревянных фасадов, ограждений, окон и дверей перед покраской. Активные вещества создают «барьер» от плесени, гнили и синевы.

    Сфера использования: очищенные до чистоты и новые деревянные поверхности. Pinotex Base применим для строганной и пиленой древесины. Однако средство не эффективно на покрытиях, уже зараженных грибками и вредителями

    Свойства и особенности нанесения Pinotex Base:

    • средство проникает глубоко в структуру древесины;
    • повышает адгезию финишной отделки с поверхностью;
    • препятствует грибковым заражениям;
    • во время обработки древесина должна быть высушенной – максимально допустимая влажность 20%;
    • пропитка не требует разбавления с водой;
    • расход раствора для пиленого дерева – 4-8 л/кв. м, для строганного – 6-10 л/кв.м;
    • время высыхания – 12-24 часа.

    Работы нежелательно выполнять в ветряную или жаркую погоду – активное испарение растворителя препятствует нормальному впитыванию грунтовки. Pinotex Base – огнеопасен, поэтому вблизи проведения обработки запрещено пользоваться открытым огнем и курить.

    Эмульсии для борьбы с плесенью

    Бороться с надоедливой плесенью можно с помощью специальных средств или народными методами. Первый вариант более эффективен, а второй – доступен по цене и безвреден для человека. В сложных ситуациях следует совмещать оба способа.

    #1: Ceresit CT 99 – длительное действие

    Противогрибковый раствор Ceresit CT 99 один из наиболее популярных препаратов по борьбе с плесенью, грибков, лишайников и уничтожения микроорганизмов. Средство экологически безопасно, может применяться для внутренних работ и для обработки конструкций на улице.

    Ceresit CT 99 – эмульсия глубокого проникновения. Концентрат подходит для минеральных поверхностей: кирпича, бетона и штукатурки. На металлических основаниях не используется

    Технические характеристики Ceresit CT 99:

    • активные антисептики – органические биоциды;
    • в состав не входят тяжелые металлы;
    • после обработки на поверхности не остаются следы;
    • препарат паропроницаем;
    • температура применения – до +40°С, но не ниже +5°С;
    • время полного высыхания – 4-5 часов.

    Перед использованием препарат надо развести водой, придерживаясь пропорции от 1:2 до 1:5 – соотношение зависит от степени поражения стены. Раствор наносится только кистью, распыление недопустимо.

    #2: АБЕДИС 06 – удаление органического налета

    Антигрибок Абедис 06 справляется с органическим налетом на стенах, борется с грибком и плесенью в ванной комнате, на кухне и в смежных помещениях. Важное преимущество препарата – универсальность применения. Абедис 06 эффективен на кирпичных стенах, глазурованной и керамической плитке, каменной облицовке, штукатурке, террасах и бетонных тропинках.

    Противогрибковое средство может использоваться и в качестве профилактики появления плесени – эмульсия наносится не только на поврежденный участок, а на всю стену

    Особенности действия и использования препарата:

    • после использования риск повторного появления плесени сокращается;
    • перед нанесением концентрат разбавляется водой в пропорции 1:2;
    • обработанную стену через сутки надо промыть водой и высушить;
    • при сильном поражении стен грибком рекомендуется повторить процедуру через 36 часов.

    Потребители отмечают длительный положительный эффект после очищения поверхности антигрибковым составом.

    #3: Dali – универсальный антисептик

    Dali – универсальное средство, высокоэффективное против разных биопаражений. Активно применяется в качестве профилактической обработки стен перед окрашиванием ЛКМ, а также для удаления появившегося грибка, синевы и плесени.

    Противогрибковый раствор Dali рекомендован для пористых оснований: кирпич, штукатурка, бетон. Средство не содержит хлор и не меняет поверхностные характеристики материалов

    Тактика проведения обеззараживания и расход концентрата зависит от цели обработки:

  • Профилактика. Поверхность очищается от грязи и покрывается слоем антисептика из расчета 50-100 мл/кв.м.
  • Удаление биологических поражений. Убрать видимые колонии грибов и плесени, стену протереть и высушить. Обработать препаратом Dali, расходуя 50-250 мл/кв.м. Через 6 часов повторить процедуру.
  • Во время работы надо соблюдать технику безопасности. Использовать спецодежду, респиратор, защитные очки и перчатки. Помещение должно хорошо проветриваться.

    #4: Fongifluid Alpa – «лечение» и профилактика

    Fongifluid Alpa – фунгицидный раствор, уничтожающий источник биоразрушения стены и предупреждающий повторное заражение.

    Продолжительность действия – около двух лет. После нанесения концентрата покрытие сохраняет способность «дышать», поэтому микроклимат в помещении не ухудшается.

    Фунгицидный состав допустимо наносить на древесину, черепицу, кирпич, цементную штукатурку, гипоскартон и керамическую плитку. Возможно применение снаружи и внутри помещения

    Характеристики Fongifluid Alpa:

    • раствор готов к применению;
    • расход препарата – 1 л на 4-5 кв.м;
    • высыхание поверхности через 6 часов, возможность покраски основания – через 6 дней.

    Антигрибковый раствор высокоэффективен против большого количества микроорганизмов. Средство не меняет цвет, степень блеска и фактурность поверхности.

    Народные методы против плесневого грибка

    Если масштабы повреждения стен незначительны, то предотвратить дальнейшее распространение грибка удастся с помощью подручных средств.

    Ролик представляет тест-эксперимент на эффективность разных народных методов по удалению плесени со стен:

    Способ 1. Отбеливатель. В состав «белизны» и ей подобных препаратов, входит гипохлорит натрия. Компонент губительно действует на многие виды грибков и споры плесени. Недостатки метода:

    • хлор разъедает поверхность и может испортить отделку стен;
    • действующее вещество работает поверхностно – внутри материала остается грибок;

    Следует помнить, что работа с отбеливателем небезопасна для здоровья человека.

    Способ 2. Отбеливатель в паре с пищевой содой. Кроме указанных основных компонентов потребуется еще жидкое мыло и несколько капель приятного лично для вас эфирного масла. В целом, с приготовлением и применением справиться несложно:

    Галерея изображений

    Фото из

    Для того чтобы подготовить стену к глубокому удалению плесени, сначала сделаем подготавливающий состав. В чашку соды введем чайную ложку жидкого мыла и пару-тройку капель масла цитруса, лаванды или розмарина. У смеси должна получиться пастообразная консистенция, если она несколько гуще, добавляем немного воды
    Пастой тщательно счищаем плесень со стенок, стараясь убрать по возможности все. Затем готовим раствор из 2 порций воды и 1 порции отбеливателя, заливаем ее в пульверизатор
    Распыляем растворенный отбеливатель на стены, ждем высыхания состава, снова распыляем и ждем высыхания
    Убираем остатки средства щеткой, пока окончательно не избавимся от плесени. Если грибок все же остался в затирке, ее придется поменять

    Шаг 1: Приготовление подготовительного растворяющего средства
    Шаг 2: Подготовка отбеливателя к нанесению
    Шаг 3: Нанесение раствора отбеливателя на стены
    Шаг 4: Удаление остатков средства щеткой

    Желающие отмыть непосредственно ванну добела и привести в порядок сантехнику у нас найдут массу весьма полезной информации.

    Способ 3.  Уксус. Кислая среда губительна для многих бактерий. Столовый уксус нетоксичен, но выделяет резкий запах. Этот недостаток легко устранить, обеспечив достаточное проветривание.

    Уксус распыляется на поврежденную поверхность или наноситься мягко губкой. Через один час стена промывается, а помещение проветривается

    Способ 4. Перекись водорода. Раствор обладает антисептическими, противогрибковыми свойствами. Обработка 3%-ым составом эффективна, но чревата появлением пятен на стене – перекись отбеливает покрытие.

    Для нанесения средства желательно запастись пульверизатором:

    Галерея изображений

    Фото из

    Перекись водорода переливаем в подходящий по объему пульверизатор. Для усиления эффекта введем в препарат половину чайной ложки уксуса
    Нанесем перекись на небольшой участок, пораженный плесенью, подождем 20 мин, если подействовало, покрываем препаратом всю занятую плесенью площадь
    Оставим перекись на стенах на 2 — 3 часа. На этот период откроем дверь в ванную, для обеспечения притока воздуха. Если нет штатного вентилятора, желательно его принести, чтобы усилить воздухообмен
    По завершению технологического перерыва удаляем остатки средства со стен салфеткой, затем смываем сильной струей, чтобы убрать мельчайшие частички и протираем стены насухо

    Шаг 1: Заправка пульверизатора перекисью водорода
    Шаг 2: Нанесение раствора на поверхность с плесенью
    Шаг 3: Технологический перерыв для действия средства
    Шаг 4: Удаление остатков средства салфеткой

    Способ 5. Пищевая сода. Наиболее простой и безопасный метод – достаточно обрызгать стену раствором соды (1 чайная ложка карбоната натрия на литр воды). Спустя 1 час поверхность протереть сухой тряпкой. Остатки раствора не обязательно убирать – сода предупредит повторное образование грибка.

    Способ 6. Бура (она же тетраборат натрия). Применение натурального чистящего средства в приоритете с точке зрения поддержания чистоты экологической обстановки.

    Галерея изображений

    Фото из

    Растворим 1 чашку буры в 3х литрах чистой воды. Препарат нужно полностью растворить, чтобы не было осадка
    Если у вас есть пылесос с фильтром класса НЕРА, пропылесосм стены, чтобы пресечь распространение грибковых спор в замкнутом помещении
    Окунув губку в раствор буры интенсивно наносим препарат на стены и стараемся быстро смыть, чтобы грибок не перетек в другое место
    Быстро насухо вытираем обработанную раствором поверхность, чтобы не дать грибку возможности получить условия для нового расселения

    Шаг 1: Приготовление раствора буры для обработки
    Шаг 2: Чистка стен пылесосом с НЕРА фильтром
    Шаг 3: Нанесение раствора буры на стенки
    Шаг 4: Высушивание поверхности ветошью

    Буру без проблем и рецептов можно приобрести в любой аптеке по весьма доступной цене.

    Способ 7. Аммиак. В этом случае никаких дополнительных средств и препаратов не потребуется, хоть стоимость аммиака и нельзя назвать самой бюджетной.

    Галерея изображений

    Фото из

    Для реализации этого метода потребуется чистый аммиак. Его нужно приобрести в требующемся объеме, смешивать ни с чем не надо
    Заполняем емкость пульверизатора запасенным аммиаком. Не надо его смешивать с водой, желательно, чтобы емкость была сухой по возможности
    Распыляем по стенкам чистый аммиак, Хорошенько протрем их с помощью жесткой щетки и оставим в таком состоянии на 2 часа, обеспечив приток воздуха в помещение
    Выждав положенный срок, протрем обработанные стены, при необходимости помоем, затем вытрем насухо

    Шаг 1: Приобретение чистого аммиака
    Заливка аммиака в пульверизатор
    Шаг 3: Чистка обработанных аммиаком стен щеткой
    Шаг 4: Удаление остатков с поверхности стенок

    Аммиак категорически запрещено смешивать с отбеливателем, чтобы не отравиться крайне токсичным газом, образующимся при соединении этих химических веществ. Недопустимо добавлять также к бытовым чистящим средствам, выполненным на основе хлора или нашатыря, к примеру, к жидкостям для мытья окон.

    Выводы и полезное видео по теме

    С причинами появления плесневого грибка, предпосылками к его появлению, а также методами борьбы и профилактики указанного негативного явления ознакомит видео:

    Для достижения положительного результата в борьбе с плесневым грибком надо устранить первопричину его образования и подобрать оптимальное антисептическое средство. Чтобы избежать повторного развития микроорганизмов важно восстановить циркуляцию воздуха в помещении и обеспечить сухость стен.

    Хотите поделиться собственным эффективным методом борьбы с черной плесенью или появились вопросы в ходе чтения? Пожалуйста, оставьте комментарий в блоке, расположенном под текстом.

    Источник

    границ | Клеточная стенка грибов: новые противогрибковые препараты и лекарственная устойчивость

    Введение

    Клеточная стенка является важным компонентом гомеостаза грибковых клеток (Latgé, 2007; Gow et al. , 2017). Он также имеет двойной процесс взаимодействия с окружающей средой, который либо отрицательно, либо положительно влияет на выживаемость грибковых клеток. Антигены клеточной стенки индуцируют иммунное распознавание инфицированным хозяином и способствуют фагоцитозу (Roy and Klein, 2012). Некоторые антигены, называемые патоген-ассоциированными молекулярными паттернами (PAMP), распознаются широким спектром рецепторов распознавания паттернов (PRR) на поверхности клетки-хозяина (Roy and Klein, 2012).Наоборот, экологические стрессы приводят к модификациям клеточных стенок, которые препятствуют иммунному распознаванию (Gow et al., 2017).

    Составляя примерно 40% от общего объема грибковой клетки, клеточная стенка гриба образует прочную и прочную сердцевинную основу, к которой различные белки и поверхностные компоненты с волокнистыми и гелеобразными углеводами образуют полимеры, образуя прочную, но гибкую структуру (Munro , 2013; Гоу и др., 2017). Большинство клеточных стенок имеют два слоя: (1) внутренний слой, включающий относительно консервативный структурный скелет, и (2) внешний слой, который более гетерогенен и имеет видоспецифические особенности (Gow et al. , 2017). Внутренняя клеточная стенка представляет собой несущий структурный компонент стенки, который сопротивляется существенному внутреннему гидростатическому давлению, оказываемому на стенку цитоплазмой и мембраной (Latgé, 2007). Этот слой включает хитин и глюкан, в которых 50–60% сухой массы клеточной стенки составляет β-(1–3)-глюкан. Структура внешнего слоя состоит из сильно маннозилированных гликопротеинов с модифицированными N- и O-связанными олигосахаридами. Структура этих боковых цепей олигосахаридов различается у разных видов грибов (Shibata et al., 1995; Хобсон и др., 2004).

    Поскольку клетки человека не имеют покрывающей стенки, противогрибковые препараты, нацеленные на выработку компонентов клеточной стенки, более селективны и менее токсичны по сравнению с производными азола и амфотерицином В (Patil and Majumdar, 2017). Эхинокандины были первыми системными противогрибковыми средствами, нацеленными на клеточную стенку, нарушая выработку глюканов (Patil and Majumdar, 2017). В отношении инвазивного кандидоза эхинокандины стали важным шагом вперед, позволившим снизить смертность, связанную с этими инфекциями, с низкой токсичностью и малым взаимодействием с другими препаратами (Mora-Duarte et al., 2002; Паппас и др., 2016). Однако внутренняя и приобретенная устойчивость к эхинокандинам ограничивает его полезность, что приводит к исследованиям других мишеней в клеточной стенке грибов для противогрибковой терапии (Hasim and Coleman, 2019).

    Динамика клеточной стенки может играть важную роль в развитии резистентности к противогрибковым препаратам, и в связи с этим появляются интересные концепции. Модификации структуры и состава клеточных стенок были исследованы в изолятах Candida и Aspergillus , обладающих устойчивостью к противогрибковым препаратам (Seo et al., 1999; Меса-Аранго и др., 2016). В устойчивых к эхинокандину изолятах Candida описаны модификации поперечных связей β-1,3- и β-1,6-глюканов и более высокое содержание хитина (Perlin, 2015), в то время как более высокий состав β-D-глюкана был обнаружен в устойчивые к амфотерицину В изоляты Aspergillus flavus (Seo et al. , 1999).

    В этой рукописи мы рассматриваем клеточную стенку грибка как мишень для противогрибковой терапии и, в связи с этим, посещаем модификации клеточной стенки, которые могут быть связаны с устойчивостью к противомикробным препаратам.

    Противогрибковые препараты против клеточной стенки грибов

    Противогрибковые препараты, нацеленные на клеточную стенку, были разработаны в последние годы (Walker et al., 2011; Chaudhary et al., 2013; Mutz and Roemer, 2016; Hasim and Coleman, 2019). Большинство этих препаратов действуют путем ингибирования β-D-глюкансинтазы, но также разрабатываются ингибиторы якорного пути хитинсинтазы и гликозилфосфатидилинозитол (GPI) (рис. 1А).

    Рисунок 1 . (A) Грибковая клеточная стенка и мишени, которые были исследованы для противогрибкового развития: β-D-глюкансинтаза, хитинсинтаза и фермент Gwt1 из пути якоря GPI; (B) Воздействие эхинокандина вызывает стресс клеточной стенки за счет ингибирования β-D-глюкансинтазы. Протеинкиназа C (PKC), высокоосмолярный глицериновый ответ (HOG) и пути Ca +2 -кальциневрина участвуют в ответе на повреждение клеточной стенки и гиперстимуляцию хитинсинтазы. Кальциневрин является белком-клиентом для шаперона Hsp90, а генетический компромисс гена HSP90 снижает механизм толерантности.

    Ингибиторы 1,3-β-D-глюкансинтазы

    Эхинокандины

    Эхинокандины были впервые описаны в 1970-х годах как антибиотические полипептиды, полученные из Aspergillus nidulans (Nyfeler and Keller-Schierlein, 1974).Эти молекулы в основном представляют собой гексапептидные антибиотики с N-связанными цепями ацильных жирных кислот, которые интеркалируют с фосфолипидным слоем клеточной мембраны (Denning, 2003). Этот противогрибковый класс ингибирует β-D-глюкансинтазу, что приводит к уменьшению β-D-глюканов в клеточной стенке после неконкурентного связывания с Fksp-субъединицей фермента (Hector, 1993; Denning, 2003; Aguilar-Zapata). и др., 2015; Перлин, 2015; Патил и Маджумдар, 2017).

    Комплекс β-D-глюкансинтазы клеточной стенки грибов состоит из двух основных субъединиц: Fks1p и Rho1p (Mazur and Baginsky, 1996; Aguilar-Zapata et al., 2015). Fks1p представляет собой каталитическую субъединицу, ответственную за образование гликозидных связей (Schimoler-O’Rourke et al., 2003), тогда как Rho1p представляет собой Ras-подобный GTP-связывающий белок, который регулирует активность β-D-глюкансинтазы (Qadota et al. ., 1996).

    Ингибирование β-D-глюкансинтазы приводит к гибели клеток видов Candida , в то время как эхинокандины модифицируют морфогенез гиф и оказывают фунгистатическое действие против видов Aspergillus (Bowman et al., 2002).И наоборот, виды, принадлежащие к порядку Mucorales и базидиомицетам, по своей природе устойчивы к этому классу противогрибковых средств (Espinel-Ingroff, 2003; Aguilar-Zapata et al., 2015).

    В настоящее время FDA одобрило три эхинокандина для лечения инвазивных грибковых инфекций: каспофунгин, анидулафунгин и микафунгин (Johnson and Perfect, 2003; Rüping et al. , 2008; Pappas et al., 2016). По сравнению с другими противогрибковыми классами эхинокандины проявляют меньшую токсичность для почек или печени, меньшее лекарственное взаимодействие и выведение преимущественно печенью, не требуя коррекции дозы при почечной недостаточности или диализе (Aguilar-Zapata et al., 2015). Однако эхинокандины имеют фармакокинетические ограничения, такие как низкая биодоступность при пероральном введении, высокое связывание с белками и низкое проникновение в центральную нервную систему (ЦНС) (Wiederhold and Lewis, 2003). Новые ингибиторы глюкансинтазы с лучшими фармакокинеическими профилями, в том числе пероральные формы с высокой биодоступностью, находятся в стадии изучения (Davis et al., 2019).

    Резафунгин (CD101, ранее SP3025, Cidara Therapeutics, Сан-Диего, Калифорния, США), эхинокандин нового поколения, в настоящее время проходит Фазу 3 клинических испытаний для лечения кандидемии и инвазивного кандидоза.Это противогрибковое средство является структурным аналогом анидулафунгина, но с холиновой частью, заменяющей полуаминальную группу в положении орнитина C5, что приводит к образованию стабильного соединения с длительным периодом полувыведения (Sandison et al. , 2017). Он хорошо растворим в водных системах и имеет период полувыведения более 130 часов у человека по сравнению с 24, 9–11, 10–17 часами периодов полувыведения анидулафунгина, каспофунгина и микафунгина соответственно (Kofla and Ruhnke, 2011). ; Сэндисон и др., 2017). Длительный период полувыведения резафунгина позволяет применять еженедельный режим дозирования (Sandison et al., 2017; Софьян и др., 2018).

    Резафунгин обладает мощной активностью in vitro против распространенных видов Candida и Aspergillus (Wiederhold et al., 2018; Arendrup et al., 2018a,b). Кроме того, этот противогрибковый препарат обладает сильной противогрибковой активностью in vitro в отношении потенциально полирезистентных видов C. auris (Berkow and Lockhart, 2018). Более того, in vivo эффективность резафунгина в моделях диссеминированного кандидоза у мышей с нейтропенией была продемонстрирована против C.albicans, C. glabrata, C. parapsilosis (Lepak et al. , 2018) и C. auris (Hager et al., 2018a).

    Тритерпеноиды

    Класс тритерпеноидов представлен ибрексафунгерпом (SCY-078, ранее MK-3118), новым полусинтетическим производным полуацетального тритерпенового гликозида энфумафунгина (Synexis Inc., Джерси-Сити, штат Нью-Джерси, США) (Pfaller et al., 2017; Wring et al., 2017; и др., 2017; Дэвис и др., 2019). Это ингибитор β-D-глюкансинтазы с сходными, но не идентичными сайтами связывания с эхинокандинами в каталитических областях Fks1p и Fks2p фермента (Walker et al., 2011; Хименес-Ортигоса и др., 2017). Он имеет высокое связывание с белками и хорошее проникновение в ткани, хотя, как и эхинокандины, плохо проникает в ЦНС (Davis et al., 2019). Фармакокинетическое преимущество этого нового противогрибкового средства заключается в его хорошей пероральной биодоступности (Walker et al., 2011).

    Ibrexafungerp продемонстрировал хорошую активность in vitro в отношении соответствующих грибковых патогенов, таких как Candida spp. , включая мультирезистентный C. glabrata (Pfaller et al., 2013, 2017; Jiménez-Ortigosa et al., 2017), штаммы-продуценты биопленки (Marcos-Zambrano et al., 2017b) и C. auris (Larkin et al., 2017). Примечательно, что устойчивые к эхинокандину штаммы Candida , несущие мутации горячей точки в Fksp, могут сохранять чувствительность к ибрексафунгерпу (Pfaller et al., 2017). Более глубокое исследование, анализирующее штаммов C. glabrata с резистентностью к эхинокандину и чувствительностью к ибрексафунгерпу, показало, что ибрексафунгерп имеет лишь частичное перекрытие в местах связывания эхинокандинов Fksp в ферменте β-D-глюкансинтазы (Jiménez-Ortigosa et al., 2017). В отношении клинически значимых видов Aspergillus ибрексафунгерп также продемонстрировал высокую активность in vitro (Davis et al., 2019). Кроме того, комбинация ибрексафунгерпа с вориконазолом или амфотерицином В продемонстрировала синергизм против штаммов A. fumigatus дикого типа (Ghannoum et al. , 2018). Следует отметить, что ибрексафунгерп проявлял некоторую противогрибковую активность в отношении полирезистентной плесени Lomentospora prolificans (Lamoth and Alexander, 2015) и высокоактивен в отношении Paecilomyces variotii (Lamoth and Alexander, 2015).Однако ибрексафунгерп малоактивен в отношении Mucorales spp., Fusarium spp. и Purpureocillium lilacinum (Lamoth and Alexander, 2015). Активность ибрексафунгерпа in vitro представлена ​​в таблице 1.

    Таблица 1 . In vitro активность антагонистов основной клеточной стенки.

    В экспериментах по определению времени до уничтожения ибрексафунгерп продемонстрировал в основном фунгицидную активность в отношении изолятов Candida albicans и non-albicans (Scorneaux et al., 2017). Для in vivo мышиных моделей инвазивного кандидоза, вызванного C. albicans , C. glabrata и C. parapsilosis , этот препарат показал сходное зависимое от концентрации уничтожение трех видов Candida (Lepak et al. , 2015).

    Этот противогрибковый препарат в настоящее время проходит клинические испытания для лечения вульвовагинального кандидоза (фаза 3; https://clinicaltrials.gov/ct2/show/NCT03987620), инвазивного аспергиллеза в комбинации с вориконазолом (фаза 2; https://clinicaltrials.gov/ct2/show/NCT03672292), инвазивный кандидоз и кандидоз слизистых оболочек (фаза 3; https://clinicaltrials.gov/ct2/show/NCT03059992), а также инвазивный кандидоз, вызванный C. auris (фаза 3; https:/ /clinicaltrials.gov/ct2/show/NCT03363841).

    Ингибиторы хитинсинтазы

    Хитин является важным компонентом клеточной стенки грибов, и соединения, влияющие на его синтез, были исследованы в качестве противогрибковых средств, таких как никкомицины, полиоксины и плагиохин (Chaudhary et al., 2013).

    Никкомицины представляют собой пептидилнуклеозидные агенты, которые конкурентно ингибируют хитинсинтазу ( CHS ). Никкомицин Z имеет активность in vitro против C. parapsilosis, Coccidioides immitis и Blastomyces dermatitidis (Hector et al. , 1990), но его полезность зависит от синергизма с эхинокандинами для C. albicans, A. fumigatus, и C. immitis (Chiou et al., 2001; Cheung and Hui, 2017). Одно исследование с использованием мышиной модели инвазивного кандидоза показало, что никкомицин Z плюс эхинокандины были эффективны для лечения инфекций, вызванных резистентным к эхинокандину штаммом C.albicans (Cheung and Hui, 2017).

    Ингибиторы гликозилфосфатидил-инозитолового якоря

    Гликозилфосфатидилинозитол (GPI) является компонентом клеточной стенки эукариот и синтезируется в эндоплазматическом ретикулуме консервативным путем (Ikezawa, 2002). Гликолипиды GPI прикрепляют различные белки к клеточной стенке и необходимы для ее целостности (Yadav and Khan, 2018).

    Противогрибковые препараты, воздействующие на путь синтеза якоря GPI, были разработаны за последние 15 лет (Tsukahara et al., 2003; Мутц и Ремер, 2016). Одной из мишеней пути синтеза якоря GPI является белок Gwt1 (GPI-заякоренный белок переноса 1), инозитол-ацилтрансфераза, которая катализирует ацилирование инозитола (Tsukahara et al. , 2003; Hata et al., 2011). Ингибирование Gwt1 нарушает целостность клеточной стенки, продукцию биопленки, образование зародышевой трубки и вызывает серьезные дефекты роста грибов (Yadav and Khan, 2018). Было показано, что у C. albicans и Saccharomyces cerevisiae ингибирование Gwt1 ставит под угрозу созревание и стабилизацию GPI-заякоренных маннопротеинов (McLellan et al., 2012). Первым соединением, использованным для ингибирования фермента Gwt1, была молекула 1-(4-бутилбензил)изохинолина (BIQ), описанная Tsukahara et al. (2003).

    Исследовательскими лабораториями Tsukuba компании Eisai Co., Ltd. (Ибараки, Япония) из молекулы BIQ было создано новое соединение с более высокой противогрибковой активностью, APX001A или manogepix (ранее E1210) (Hata et al., 2011). Позже компания Amplix Pharmaceuticals Inc. (Сан-Диего, Калифорния, США) разработала N-фосфонооксиметилпролекарство фосманогепикс (APX001, ранее E1211) для перорального и внутривенного введения.Пролекарство метаболизируется фосфатазами и превращается в маногепикс (APX001A, ранее E1210), который ингибирует Gwt1, но не человеческий гомолог Pig-W (Watanabe et al. , 2012; Wiederhold et al., 2019). Пероральная форма фосманогепикса показала хорошую биодоступность в экспериментах на мышах (Zhao et al., 2018).

    Активность in vitro маногепикса исследовалась в отношении дрожжей и плесени (Miyazaki et al., 2011; Castanheira et al., 2012). Низкие минимальные ингибирующие концентрации (МИК) этого нового противогрибкового средства были обнаружены в отношении C.albicans, C. tropicalis, C. glabrata, C. parapsilosis, C. lusitaniae, C. kefyr, (Miyazaki et al., 2011; Pfaller et al., 2019), а также против полирезистентного C. auris (Hager et al., 2018a) и устойчивый к эхинокандину C. glabrata (Pfaller et al., 2019). Однако результаты in vitro по сравнению с C. krusei и C. norvegensis были описаны как плохие (Arendrup et al., 2018a). Сильная активность in vitro маногепикса также была отмечена против штаммов Cryptococcus neoformans и Cryptococcus gattii (Shaw et al., 2018; Пфаллер и др. , 2019). Относительно активности in vitro в отношении плесени, низкие МИК в отношении видов Aspergillus из секции Fumigati, Flavi, Terrei и Nigri (Miyazaki et al., 2011; Pfaller et al., 2019), Purpureocillium lilacinum, Cladosporium видов , Phialophora видов, Rhinocladiella aquaspersa, Fonsecaea pedrosoi (Miyazaki et al., 2011), Scedosporium apiospermum и Scedosporium aurantiacum (Castanheira et al., 2012), а также против видов с множественной лекарственной устойчивостью Fusarium solani и L. prolificans (Castanheira et al., 2012). Активность in vitro маногепикса представлена ​​в таблице 1.

    Активность in vivo маногепикса/фосманогепикса была также исследована на мышиных моделях диссеминированного кандидоза, аспергиллеза, фузариоза (Hata et al., 2011; Hager et al., 2018b) и пневмонии Coccidioides immitis (Viriyakosol et др., 2019). В мышиной модели диссеминированной инфекции C. albicans он показал эффективность, аналогичную каспофунгину, флуконазолу и липосомальному амфотерицину B (Hata et al., 2011). В другом исследовании сравнивалась эффективность маногепикса/фосманогепикса и анидулафунгина для лечения мышей с диссеминированной инфекцией C. auris и были обнаружены более высокие показатели выживаемости в группе, получавшей ингибитор Gwt1 (Hager et al., 2018b). В мышиной модели инвазивной инфекции Aspergillus flavus мыши, получавшие этот новый противогрибковый препарат, имели аналогичные показатели выживаемости по сравнению с группами, получавшими либо вориконазол, либо каспофунгин (Hata et al., 2011). В том же исследовании мыши, инфицированные F. solani , показали более высокую выживаемость при лечении фосманогепиксом в дозе 20 мг/кг по сравнению с контрольной группой без противогрибковой терапии (Hata et al., 2011).

    В настоящее время проводится фаза 2 открытого исследования фосманогепикса для лечения кандидемии первой линии.

    Модификации клеточной стенки грибов и резистентность к противогрибковым препаратам

    Изменения в строении клеточных стенок грибов появляются после стрессов, вызванных микроокружением хозяина и противогрибковым воздействием (Ene et al., 2012; Перлин, 2015; Меса-Аранго и др., 2016).

    Исследования in vitro показали, что в условиях, имитирующих микроокружение хозяина в очаге инфекции, у дрожжевых клеток могут развиться модификации стенок и устойчивость к противогрибковым препаратам (Ene et al., 2012; Brown et al., 2014). Клетки C. albicans , выращенные в сыворотке (<0,1% глюкозы), обнаруживают серьезные изменения в архитектуре клеточной стенки с уменьшением длины маннановых цепей, а также содержания хитина и β-глюкана (Ene et al., 2012). Более того, мешающие росту условия с альтернативными источниками углерода, такими как лактат, изменяют биосинтез клеточной стенки, что приводит к образованию более тонкой, но более жесткой внутренней клеточной стенки (Ene et al. , 2012). Эти реконструированные клеточные стенки клеток C. albicans становятся устойчивыми к амфотерицину B (AMB) и каспофунгину (Ene et al., 2012). Сходные результаты были продемонстрированы для штаммов C. glabrata , которые росли в альтернативной углеродной микросреде, показывали измененную архитектуру клеточной стенки с более низким содержанием хитина и β-глюкана и с увеличенным наружным слоем маннана (Chew et al., 2019). Эти клетки C. glabrata также были устойчивы к АТ-В при выращивании в лактате или олеате (Chew et al., 2019).

    Промежуточным этапом устойчивости к противогрибковым препаратам является развитие толерантности (Perlin, 2015). Клетки, пережившие воздействие лекарств, могут реагировать на отбор и развивать устойчивость (Perlin, 2015). Воздействие эхинокандина вызывает стресс клеточной стенки за счет ингибирования синтеза β-D-глюкана, который запускает адаптивные клеточные факторы, стимулирующие выработку хитина (Walker et al., 2008, 2010). Протеинкиназа C (PKC), высокоосмолярный глицериновый ответ (HOG) и пути Ca +2 -кальциневрина участвуют в ответе на повреждение клеточной стенки и синтезе хитина (рис. 1B; Lagorce et al., 2003; Bermejo et al.). al., 2008; Walker et al., 2008; Fortwendel et al., 2009). Шаперон Hsp90 является еще одним важным компонентом толерантности к эхинокандинам после стресса клеточной стенки (Singh et al., 2009; O’Meara et al., 2017). Кальциневрин является клиентским белком для шаперона Hsp90, и генетический компромисс гена HSP90 снижает механизм толерантности у C.albicans (Singh et al., 2009), C. glabrata (Singh-Babak et al., 2012) и Aspergillus fumigatus (Lamoth et al., 2014). Другое выражение грибковых адаптационных механизмов, вызванных противогрибковым стрессом, называется пародоксальным эффектом, который представляет собой восстановление роста грибов после воздействия противогрибковых препаратов при увеличении концентрации выше определенного порога (Aruanno et al. , 2019). Об этом явлении сообщалось в Candida spp. и Aspergillus spp.после воздействия эхинокандинов, преимущественно каспофунгина (Rueda et al., 2014; Marcos-Zambrano et al., 2017a; Aruanno et al., 2019). Подобно механизму толерантности, парадоксальный эффект связан с внутриклеточными сигнальными путями, которые приводят к ремоделированию клеточной стенки с увеличением количества хитина и потерей содержания β-D-глюкана (Aruanno et al., 2019). У A. fumigatus воздействие каспофунгина может также привести к увеличению продукции активных форм кислорода (АФК) и к модификации липидного микроокружения, окружающего β-D-глюкансинтазу, что приводит к резистентности к эхинокандинам (Satish et al., 2019).

    В C. albicans другие важные компоненты для толерантности к эхинокандину могут быть расположены на хромосоме 5 (Ch5), поскольку некоторые толерантные мутанты показали либо моносомию Ch5, либо комбинированную моносомию левого плеча и трисомию правого плеча Ch5 (Янг и др. , 2017). В конце концов, постоянное воздействие эхинокандина приводит к мутациям FKS , и появляются организмы с выраженной и стабильной устойчивостью с высоким содержанием хитина в клеточной стенке (Walker et al., 2013; Perlin, 2015).Мутации FKS у видов Candida и резистентность к эхинокандину широко изучались в других источниках (Walker et al., 2010; Perlin, 2015).

    Резистентность к AMB может быть объяснена несколькими механизмами, среди которых модификации архитектуры клеточной стенки (Seo et al., 1999; Mesa-Arango et al., 2016). Изоляты Aspergillus flavus с резистентностью к AMB были связаны с инвазивными грибковыми инфекциями с плохим прогнозом у пациентов с нейтропенией (Koss et al., 2002; Хадрич и др., 2012). Seo, Akiyoshi и Ohnishi продемонстрировали, что in vitro устойчивые к АМВ мутантные штаммы A. flavus имеют одинаковое содержание стеролов в клеточной мембране по сравнению с чувствительными штаммами (Seo et al., 1999). Наоборот, клеточная стенка устойчивых мутантов содержала больше 1,3-β-D-глюкана по сравнению с чувствительными штаммами (Seo et al., 1999). Авторы предполагают, что более высокое содержание глюканов, обнаруженное у резистентных мутантов, помогает адсорбировать АМВ, что затрудняет проникновение противогрибкового препарата на клеточную мембрану (Seo et al., 1999). Сравнение биопленочных (АТВ-устойчивых) и планктонных (АТВ-чувствительных) клеток C. albicans показало, что клеточная стенка выращенных в биопленке изолятов толще и содержит больше β-1,3-глюканов (Nett et al., 2007). У C. tropicalis резистентность к АТВ была связана с несколькими потенциальными механизмами, такими как повышение активности каталазы, изменения митохондриального потенциала, низкое накопление активных форм кислорода и дефицит эргостерола на клеточной мембране (Forastiero et al., 2013; Меса-Аранго и др., 2014). Совсем недавно модификации клеточных стенок также были обнаружены у устойчивых к АТВ изолятов C. tropicalis (Mesa-Arango et al., 2016). Устойчивые к АМВ изоляты показали более толстые клеточные стенки и больший объем по сравнению с восприимчивыми изолятами (Mesa-Arango et al., 2016). Кроме того, у этих устойчивых к АМВ организмов в 2–3 раза повышен уровень β-1,3-глюканов в клеточной стенке (Mesa-Arango et al., 2016).

    Выводы и перспективы

    Недавние достижения в изучении клеточной стенки грибов открыли двери для новых терапевтических методов лечения грибковых инфекций и помогли лучше понять механизмы резистентности к противогрибковым препаратам.Новые противогрибковые препараты, нацеленные на клеточную стенку, демонстрируют лучшую безопасность и фармакокинетические/фармакокинетические профили, чем доступные токсичные молекулы полиенов и производных азола. Новый ингибитор β-D-глюкансинтазы ибрексафунгерп обладает мощной активностью in vitro против полирезистентных патогенов, таких как резистентные к эхинокандину C. glabrata , C. auris, и виды Aspergillus .

    Ингибиторы глюкансинтазы

    , такие как никкомицин Z, обладают сильным синергизмом с эхинокандинами и могут быть полезны для лечения инфекций, устойчивых к эхинокандинам Candida , и рефрактерного аспергиллеза.

    Ингибиторы якорного пути GPI APX001/APX001A имеют хорошие фармакокинетические профили и высокую активность in vitro в отношении нескольких патогенных видов грибов, включая полирезистентные C. auris, F. solani, и L. prolificans . Это делает эти препараты наиболее многообещающими противогрибковыми препаратами, которые будут запущены в производство в будущем.

    Микроокружение в месте заражения приводит к модификации клеточной стенки грибка, что может привести к резистентности к противогрибковым препаратам.Стресс клеточной стенки, вызванный воздействием эхинокандина, приводит к появлению толерантных клеток с высоким содержанием хитина. Пути PKC, HOG и Ca +2 -кальциневрина, а также шаперон Hsp90 являются ключевыми компонентами феномена противогрибковой толерантности и должны быть изучены в качестве будущих мишеней для противогрибковой терапии. Несколько устойчивых к АМВ A. flavus и C. tropicalis показали более высокое содержание глюканов в клеточной стенке, но необходимы дальнейшие исследования, анализирующие модификации клеточной стенки и устойчивость к АМВ, чтобы усилить эту корреляцию.

    Вклад авторов

    SL, AC и JA задумали рукопись. SL и JA провели обзор литературы. SL, AC и JA написали рукопись. AC пересмотрел рукопись.

    Финансирование

    Работа SL поддерживается CAPES (Грант 88882.430766/2019-01). Работа JA поддерживается FAPESP (грант 2018/18347-4). AC получил гранты от CNPq (Грант 307510/2015-8) и FAPESP (Грант 2017/02203-7).

    Конфликт интересов

    Авторы заявляют, что исследование проводилось при отсутствии каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могли бы быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.

    Сноски

    Ссылки

    Агилар-Сапата, Д., Петрайтене, Р., и Петрайтис, В. (2015). Эхинокандины: расширяющийся противогрибковый арсенал. клин. Заразить. Дис. 61 (Прил. 6), S604–S611. doi: 10.1093/cid/civ814

    Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google

    Арендруп, М. К., Чоудхари, А., Аствад, К. М. Т., и Йоргенсен, К. М. (2018a). Активность APX001A in vitro в отношении современных изолятов крови и Candida auris определена эталонным методом EUCAST. Антимикроб. Агенты Чемотер. 62, номер: e01225-18. doi: 10.1128/AAC.01225-18

    Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google

    Arendrup, M.C., Meletiadis, J., Zaragoza, O., Jørgensen, K.M., Marcos-Zambrano, L.J., Kanioura, L., et al. (2018б). Многоцентровое определение чувствительности видов Candida к резафунгину (CD101) методом EUCAST. клин. микробиол. Заразить. 24, 12:00–12:04. doi: 10.1016/j.cmi.2018.02.021

    Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google

    Аруанно, М., Глампедакис, Э., и Ламот, Ф. (2019). Эхинокандины для лечения инвазивного аспергиллеза: от лаборатории к постели. Антимикроб. Агенты Чемотер. 63, фото: e00399-19. doi: 10.1128/AAC.00399-19

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Беркоу, Э. Л., и Локхарт, С. Р. (2018). Активность CD101, эхинокандина длительного действия, против клинических изолятов Candida auris. Диагн. микробиол. Заразить. Дис. 90, 196–197. дои: 10.1016/j.diagmicrobio.2017.10.021

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Бермехо, К., Родригес, Э., Гарсия, Р., Родригес-Пенья, Х.М., Родригес де ла Консепсьон, М.Л., Ривас, К., и др. (2008). Последовательная активация путей дрожжей HOG и SLT2 необходима для выживания клеток в условиях стресса клеточной стенки. Мол. биол. Мобильный 19, 1113–1124. doi: 10.1091/mbc.e07-08-0742

    Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google

    Боуман, Дж.C., Hicks, P.S., Kurtz, M.B., Rosen, H., Schmatz, D.M., Liberator, P.A., et al. (2002). Противогрибковый эхинокандин ацетат каспофунгина убивает растущие клетки Aspergillus fumigatus in vitro. Антимикроб. Агенты Чемотер. 46, 3001–3012. doi: 10.1128/AAC.46.9.3001-3012.2002

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Браун, А.Дж.П., Бадж, С., Калорити, Д., Тиллманн, А., Якобсен, М.Д., Инь, З., и др. (2014). Адаптация к стрессу у патогенного гриба. Дж. Экспл. биол. 217, 144–155. doi: 10.1242/jeb.088930

    Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google

    Castanheira, M., Duncanson, F.P., Diekema, D.J., Guarro, J., Jones, R.N., and Pfaller, M.A. (2012). Активность E1210 и агентов сравнения тестировали методами микроразведения бульона CLSI и EUCAST в отношении видов Fusarium и Scedosporium , идентифицированных с помощью молекулярных методов. Антимикроб. Агенты Чемотер. 56, 352–357. дои: 10.1128/ААС.05414-11

    Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google

    Чунг, Ю.-Ю., и Хуэй, М. (2017). Эффекты эхинокандинов в сочетании с никкомицином Z против инвазивных изолятов Candida albicans из кровотока и мутантов fks. Антимикроб. Агенты Чемотер. 61, фото: e00619-17. doi: 10.1128/AAC.00619-17

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Чу, С.Ю., Хо, К.Л., Чеа, Ю.К., Сандай, Д., Браун, А.Дж.П. и Тан, LTL (2019). Физиологически значимые альтернативные источники углерода модулируют образование биопленки, архитектуру клеточной стенки, а также устойчивость к стрессу и противогрибковым препаратам Candida glabrata . Междунар. Дж. Мол. науч. 20, номер: E3172. дои: 10.3390/ijms20133172

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Chiou, C.C., Mavrogiorgos, N., Tillem, E., Hector, R., and Walsh, T.J. (2001). Синергия, фармакодинамика и временные ультраструктурные изменения взаимодействия между никкомицином Z и эхинокандином FK463 против Aspergillus fumigatus . Антимикроб. Агенты Чемотер. 45, 3310–3321. doi: 10.1128/AAC.45.12.3310-3321.2001

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Cordeiro, R. A., Brilhante, R.S.N., Rocha, M.F.G., Fechine, M.A.B., Costa, A.K.F., Camargo, Z.P., et al. (2006). In vitro активность каспофунгина, амфотерицина В и азолов против штаммов Coccidioides posadasii с северо-востока Бразилии. Микопатология 161, 21–26. doi: 10.1007/s11046-005-0177-0

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Эне И.V., Adya, A.K., Wehmeier, S., Brand, A.C., MacCallum, D.M., Gow, N.A.R., et al. (2012). Источники углерода-хозяина модулируют архитектуру клеточной стенки, лекарственную устойчивость и вирулентность грибкового патогена. Сотовый. микробиол. 14, 1319–1335. doi: 10.1111/j.1462-5822.2012.01813.x

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Эшпинель-Ингрофф, А. (2003). Противогрибковая активность анидулафунгина и микафунгина, лицензированных препаратов и исследуемого триазола позаконазола in vitro, определенная методами NCCLS для 12 052 грибковых изолятов: обзор литературы. Ред. Ибероам. Микол. 20, 121–136.

    Реферат PubMed | Академия Google

    Форастьеро, А., Меса-Аранго, А.С., Аластруй-Искьердо, А., Алькасар-Фуоли, Л., Берналь-Мартинес, Л., Пелаес, Т., и др. (2013). Перекрестная противогрибковая устойчивость Candida tropicalis связана с различными модификациями азоловой мишени (Erg11p). Антимикроб. Агенты Чемотер. 57, 4769–4781. doi: 10.1128/AAC.00477-13

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Фортвендель, Дж.R., Juvvadi, P.R., Pinchai, N., Perfect, B.Z., Alpaugh, J.A., Perfect, J.R., et al. (2009). Дифференциальные эффекты ингибирования синтеза хитина и 1,3-{бета}-D-глюкана у мутантов ras и кальцинейрина Aspergillus fumigatus . Антимикроб. Агенты Чемотер. 53, 476–482. doi: 10.1128/AAC.01154-08

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Ганнум М., Лонг Л., Ларкин Э. Л., Ишам Н., Шериф Р., Боррото-Эсода К. и др. (2018).Оценка противогрибковой активности нового перорального ингибитора глюкансинтазы SCY-078, по отдельности и в комбинации, для лечения инвазивного аспергиллеза. Антимикроб. Агенты Чемотер. 62, e00244–e00218. doi: 10.1128/AAC.00244-18.

    Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google

    Goldberg, J., Connolly, P., Schnizlein-Bick, C., Durkin, M., Kohler, S., Smedema, M., et al. (2000). Сравнение никкомицина Z с амфотерицином В и итраконазолом для лечения гистоплазмоза на мышиной модели. Антимикроб. Агенты Чемотер. 44, 1624–1629. doi: 10.1128/AAC.44.6.1624-1629.2000

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Хадрих И., Макни Ф., Неджи С., Шейхрухоу Ф., Беллаадж Х., Эллуми М. и др. (2012). Резистентность к амфотерицину В in vitro связана с фатальной инфекцией Aspergillus flavus . Мед. Микол. 50, 829–834. дои: 10.3109/136

    .2012.684154

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Хейдж, К. А., Коннолли П., Хоран Д., Дуркин М., Смедема М., Зарновский Р. и соавт. (2011). Исследование эффективности микафунгина при лечении гистоплазмоза с использованием двух североамериканских штаммов Histoplasma capsulatum . Антимикроб. Агенты Чемотер. 55, 4447–4450. doi: 10.1128/AAC.01681-10

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Хагер, К.Л., Ларкин, Э.Л., Лонг, Л.А., и Ганнум, Массачусетс (2018a). Оценка эффективности резафунгина, нового эхинокандина, при лечении диссеминированной инфекции Candida auris с использованием модели мыши с ослабленным иммунитетом. J. Антимикроб. Чемотер. 73, 2085–2088. doi: 10.1093/jac/dky153

    Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google

    Хагер, К.Л., Ларкин, Э.Л., Лонг, Л., Зохра Абиди, Ф., Шоу, К.Дж., и Ганнум, М.А. (2018b). In vitro и in vivo оценка противогрибковой активности APX001A/APX001 в отношении Candida auris. Антимикроб. Агенты Чемотер. 62, номер: e02319-17. doi: 10.1128/AAC.02319-17

    Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google

    Хасим, С.и Коулман, Дж. Дж. (2019). Ориентация на клеточную стенку грибка: современные методы лечения и последствия для разработки альтернативных противогрибковых средств. Будущее Мед. хим. 11, 869–883. doi: 10.4155/fmc-2018-0465

    Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google

    Хата К., Хории Т., Миядзаки М., Ватанабэ Н.-А., Окубо М., Сонода Дж. и др. (2011). Эффективность перорального препарата Е1210, нового противогрибкового препарата широкого спектра действия с новым механизмом действия, на мышиных моделях кандидоза, аспергиллеза и фузариоза. Антимикроб. Агенты Чемотер. 55, 4543–4551. doi: 10.1128/AAC.00366-11

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Гектор, Р.Ф., Циммер, Б.Л., и Паппагианис, Д. (1990). Оценка никкомицинов X и Z в мышиных моделях кокцидиоидомикоза, гистоплазмоза и бластомикоза. Антимикроб. Агенты Чемотер. 34, 587–593. doi: 10.1128/AAC.34.4.587

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Хобсон, Р.P., Munro, C.A., Bates, S., MacCallum, D.M., Cutler, J.E., Heinsbroek, S.E.M., et al. (2004). Потеря маннозилфосфата клеточной стенки у Candida albicans не влияет на распознавание макрофагами. Дж. Биол. хим. 279, 39628–39635. doi: 10.1074/jbc.M405003200

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Хименес-Ортигоса, К., Перес, В. Б., Ангуло, Д., Боррото-Эсода, К., и Перлин, Д. С. (2017). Приобретение De novo устойчивости к SCY-078 у Candida glabrata включает мутации FKS, которые перекрываются и отличаются от мутаций, придающих устойчивость к эхинокандину. Антимикроб. Агенты Чемотер. 61, e00833–e00817. doi: 10.1128/AAC.00833-17

    Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google

    Джонсон, доктор медицины, и Перфект, младший (2003). Каспофунгин: первый одобренный агент нового класса противогрибковых препаратов. Эксперт. мнение Фармацевт. 4, 807–823. дои: 10.1517/14656566.4.5.807

    Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google

    Кофла, Г., и Рунке, М. (2011). Фармакология и метаболизм анидулафунгина, каспофунгина и микафунгина при лечении инвазивного кандидоза — обзор литературы. евро. Дж. Мед. Рез. 16, 159–166. дои: 10.1186/2047-783X-16-4-159

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Косс Т., Багери Б., Зеана К., Романьоли М. Ф. и Гроссман М. Э. (2002). Амфотерицин B-резистентная инфекция Aspergillus flavus успешно лечится каспофунгином, новым противогрибковым средством. Дж. Ам. акад. Дерматол. 46, 945–947. doi: 10.1067/mjd.2002.120627

    Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google

    Лагорс, А., Hauser, N.C., Labourdette, D., Rodriguez, C., Martin-Yken, H., Arroyo, J., et al. (2003). Полногеномный анализ реакции на мутации клеточной стенки у дрожжей Saccharomyces cerevisiae . Дж. Биол. хим. 278, 20345–20357. doi: 10.1074/jbc.M211604200

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Ламот, Ф., и Александр, Б.Д. (2015). Противогрибковая активность SCY-078 (MK-3118) и стандартных противогрибковых средств в отношении клинических изолятов плесени, не относящихся к Aspergillus. Антимикроб. Агенты Чемотер. 59, 4308–4311. doi: 10.1128/AAC.00234-15

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Ламот Ф., Юввади П. Р., Герке К., Асфау Ю. Г. и Штайнбах В. Дж. (2014). Транскрипционная активация белка теплового шока 90, опосредованная проксимальной промоторной областью, как триггер устойчивости к каспофунгину у Aspergillus fumigatus . Дж. Заражение. Дис. 209, 473–481. doi: 10.1093/infdis/jit530

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Ларкин, Э., Hager, C., Chandra, J., Mukherjee, P.K., Retuerto, M., Salem, I. , et al. (2017). Возникающий патоген Candida auris: фенотип роста, факторы вирулентности, активность противогрибковых препаратов и влияние SCY-078, нового ингибитора синтеза глюкана, на морфологию роста и образование биопленки. Антимикроб. Агенты Чемотер. 61, номер: e02396-16. doi: 10.1128/AAC.02396-16

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Лепак, А. Дж., Марчилло, К., и Андес, Д.Р. (2015). Фармакодинамическая целевая оценка нового перорального ингибитора глюкансинтазы, SCY-078 (MK-3118), с использованием мышиной модели инвазивного кандидоза in vivo. Антимикроб. Агенты Чемотер. 59, 1265–1272. doi: 10.1128/AAC.04445-14

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Лепак, А. Дж., Чжао, М., ВанСкой, Б., Амброуз, П. Г., и Андес, Д. Р. (2018). Фармакодинамика эхинокандина длительного действия, CD101, в мышиной модели нейтропенического инвазивного кандидоза с использованием схемы дозирования с увеличенным интервалом. Антимикроб. Агенты Чемотер. 62, номер: e01572-18. doi: 10.1128/AAC.01572-18

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Ли, Р.К., и Ринальди, М.Г. (1999). Противогрибковая активность никкомицина Z in vitro в сочетании с флуконазолом или итраконазолом. Антимикроб. Агенты Чемотер. 43, 1401–1405. doi: 10.1128/AAC.43.6.1401

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Маркос-Замбрано, Л. Дж., Эскрибано, П., Санчес-Каррильо, К., Буза, Э., и Гвинея, Дж. (2017a). Частота парадоксального эффекта, измеренная с использованием методики EUCAST с микафунгином, анидулафунгином и каспофунгином в отношении изолятов видов Candida, вызывающих кандидемию. Антимикроб. Агенты Чемотер. 61, фото: e01584-16. doi: 10.1128/AAC.01584-16

    Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google

    Маркос-Самбрано, Л. Дж., Гомес-Перосанс, М., Эскрибано, П., Боуза, Э., и Гвинея, Дж. (2017b). Новый пероральный ингибитор глюкансинтазы SCY-078 проявляет активность in vitro в отношении сидячих и планктонных Candida spp. J. Антимикроб. Чемотер. 72, 1969–1976 гг. doi: 10.1093/jac/dkx010

    Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google

    Мазур П. и Багинский В. (1996). Для активности 1,3-β-D-глюкансинтазы in vitro необходим GTP-связывающий белок Rho1. Дж. Биол. хим. 271, 14604–14609. doi: 10.1074/jbc.271.24.14604

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Маклеллан, К. А., Уайтселл, Л., Кинг, О. Д., Ланкастер, А. К., Мазичек, Р.и Линдквист, С. (2012). Ингибирование биосинтеза якоря GPI в ​​грибах вызывает стресс эндоплазматического ретикулума и повышает иммуногенность. ACS Хим. биол. 7, 15:20–15:28. дои: 10.1021/cb300235m

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Меса-Аранго, А.С., Руэда, К., Роман, Э., Квинтин, Дж., Террон, М.С., Луке, Д., и др. (2016). Изменения клеточной стенки у устойчивых к амфотерицину В штаммов Candida tropicalis и связь с иммунными реакциями, вызванными хозяином. Антимикроб. Агенты Чемотер. 60, 2326–2335. doi: 10.1128/AAC.02681-15

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Меса-Аранго, А. К., Тревихано-Контадор, Н., Роман, Э., Санчес-Фреснеда, Р., Касас, К., Эрреро, Э., и др. (2014). Продукция активных форм кислорода является универсальным механизмом действия амфотерицина В против патогенных дрожжей и способствует фунгицидному действию этого препарата. Антимикроб. Агенты Чемотер. 58, 6627–6638.doi: 10.1128/AAC.03570-14

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Миядзаки М., Хории Т., Хата К., Ватанабэ Н.-А., Накамото К., Танака К. и др. (2011). Активность нового противогрибкового препарата Е1210 in vitro в отношении клинически важных дрожжевых и плесневых грибов. Антимикроб. Агенты Чемотер. 55, 4652–4658. doi: 10.1128/AAC.00291-11

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Мора-Дуарте, Дж., Беттс, Р., Ротштейн, К., Colombo, A.L., Thompson-Moya, L., Smietana, J., et al. (2002). Сравнение каспофунгина и амфотерицина В при инвазивном кандидозе. Н. англ. Дж. Мед. 347, 2020–2029 гг. дои: 10.1056/NEJMoa021585

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Манро, Калифорния (2013). Хитин и глюкан, инь и ян клеточной стенки грибов, значение для открытия противогрибковых препаратов и терапии. Доп. заявл. микробиол. 83, 145–172. doi: 10.1016/B978-0-12-407678-5.00004-0

    Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google

    Накаи Т., Уно Дж., Икеда Ф., Тавара С., Нисимура К. и Мияджи М. (2003). Противогрибковая активность микафунгина (ФК463) in vitro в отношении диморфных грибов: сравнение дрожжеподобных и мицелиальных форм. Антимикроб. Агенты Чемотер. 47, 1376–1381. doi: 10.1128/AAC.47.4.1376-1381.2003

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Нетт Дж., Линкольн Л., Марчилло К., Мэсси Р., Holoyda, K., Hoff, B., et al. (2007). Предполагаемая роль бета-1,3 глюканов в устойчивости биопленки Candida albicans . Антимикроб. Агенты Чемотер. 51, 510–520. doi: 10.1128/AAC.01056-06

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Найфелер, Р., и Келлер-Ширляйн, В. (1974). Метаболиты микроорганизмов. 143. Эхинокандин В, новый полипептид-антибиотик из Aspergillus nidulans var. echinulatus: выделение и структурные компоненты. Хелв. Чим. Acta 57, 2459–2477. doi: 10.1002/hlca.170818

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    О’Мира, Т. Р., Роббинс, Н., и Коуэн, Л. Э. (2017). Сеть шаперонов Hsp90 модулирует признаки вирулентности Candida. Тенденции микробиол. 25, 809–819. doi: 10.1016/j. tim.2017.05.003

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Паппас, П. Г., Кауфман, К. А., Андес, Д. Р., Клэнси, С. Дж., Марр, К.А., Остроски-Цейхнер Л. и соавт. (2016). Клиническое практическое руководство по лечению кандидоза: обновление 2016 г., подготовленное Американским обществом инфекционистов. клин. Заразить. Дис. 62, е1–е50. doi: 10.1093/cid/civ933

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Перлин, Д. С. (2015). Резистентность к эхинокандину у Candida. клин. Заразить. Дис. 61 (Приложение 6), S612–S617. doi: 10.1093/cid/civ791

    Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google

    Пфаллер, М.А., Хабанд, М. Д., Фламм, Р. К., Бьен, П. А., и Кастанейра, М. (2019). In vitro Активность APX001A (Manogepix) и препаратов сравнения в отношении 1706 изолятов грибов, собранных в ходе международной программы наблюдения (2017 г.). Антимикроб. Агенты Чемотер. 63, фото: e00840-19. doi: 10.1128/AAC.00840-19

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Пфаллер, М. А., Мессер, С. А., Мотыль, М. Р., Джонс, Р. Н., и Кастанхейра, М. (2013).In vitro активность нового перорального ингибитора глюкансинтазы (MK-3118), протестированная против Aspergillus spp. методами микроразведения бульона CLSI и EUCAST. Антимикроб. Агенты Чемотер. 57, 1065–1068. doi: 10.1128/AAC.01588-12

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Пфаллер, М. А., Мессер, С. А., Ромберг, П. Р., Боррото-Эсода, К., и Кастанейра, М. (2017). Дифференциальная активность перорального ингибитора глюкансинтазы SCY-078 в отношении дикого типа и резистентных к эхинокандину штаммов видов Candida. Антимикроб. Агенты Чемотер. 61, e00161–e00117. doi: 10.1128/AAC.00161-17

    Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google

    Кадота Х., Питон С.П., Иноуэ С.Б., Арисава М. , Анраку Ю., Чжэн Ю. и др. (1996). Идентификация дрожжевой Rho1p GTPase как регуляторной субъединицы 1,3-β-глюкансинтазы. Наука 272, 279–281. doi: 10.1126/наука.272.5259.279

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Руэда, К., Куэнка-Эстрелла, М.и Сарагоса, О. (2014). Парадоксальный рост Candida albicans в присутствии каспофунгина связан с множественными перестройками клеточной стенки и снижением вирулентности. Антимикроб. Агенты Чемотер. 58, 1071–1083. doi: 10.1128/AAC.00946-13

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Рюпинг, М. Дж., Верешильд, Дж. Дж., Фаровски, Ф., и Корнели, О. А. (2008). Анидулафунгин: преимущество для новичка? Эксперт. Преподобный Клин.Фармакол. 1, 207–216. дои: 10.1586/17512433.1.2.207

    Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google

    Сэндисон, Т., Онг, В., Ли, Дж., и Тай, Д. (2017). Безопасность и фармакокинетика CD101 IV, нового эхинокандина, у здоровых взрослых. Антимикроб. Агенты Чемотер. 61, e01627–e01616. doi: 10.1128/AAC.01627-16

    Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google

    Сатиш С., Хименес-Ортигоса С., Чжао Ю., Ли М. Х., Долгов Э., Крюгер Т. и др.(2019). Стресс-индуцированные изменения в липидном микроокружении β-(1,3)-D-глюкансинтазы вызывают клинически важную резистентность к эхинокандину у Aspergillus fumigatus. мБио 10:e00779-19. doi: 10.1128/mBio.00779-19

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Шимолер-О’Рурк, Р., Рено, С., Мо, В., и Селитренникофф, К.П. (2003). Белок Neurospora crassa FKS связывается с субстратом (1,3) бета-глюкансинтазы, UDP-глюкозой. Курс. микробиол. 46, 408–412. doi: 10.1007/s00284-002-3884-5

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Скорно Б., Ангуло Д., Боррото-Эсода К., Ганнум М., Пил М. и Ринг С. (2017). SCY-078 является фунгицидным против видов Candida в исследованиях времени уничтожения. Антимикроб. Агенты Чемотер. 61, номер: e01961-16. doi: 10.1128/AAC.01961-16

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Сео, К., Акиёси, Х., и Ониши, Ю.(1999). Изменение состава клеточной стенки приводит к резистентности к амфотерицину В у Aspergillus flavus . Микробиолог. Иммунол. 43, 1017–1025. doi: 10.1111/j.1348-0421.1999.tb01231.x

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Shaw, K.J., Schell, W.A., Covel, J., Duboc, G., Giamberardino, C., Kapoor, M., et al. (2018). In vitro и in vitro оценка APX001A/APX001 и других ингибиторов Gwt1 против Cryptococcus. Антимикроб. Агенты Чемотер. 62:e00523-18. doi: 10.1128/AAC.00523-18

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Шибата Н., Икута К., Имаи Т., Сато Ю., Сато Р., Сузуки А. и др. (1995). Наличие разветвленных боковых цепей в маннане клеточной стенки патогенных дрожжей Candida albicans . Взаимосвязь структура-антигенность между маннанами клеточной стенки Candida albicans и Candida parapsilosis . Дж. Биол. хим. 270, 1113–1122. дои: 10.1074/jbc.270.3.1113

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Сингх, С.Д., Роббинс, Н., Заас, А.К., Шелл, В.А., Перфект, Дж.Р., и Коуэн, Л.Е. (2009). Hsp90 регулирует резистентность к эхинокандину у патогенных дрожжей Candida albicans посредством кальциневрина. PLoS Pathog. 5:e1000532. doi: 10.1371/journal.ppat.1000532

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Сингх-Бабак, С. Д., Бабак, Т., Дизманн, С., Hill, J.A., Xie, J.L., Chen, Y.-L., et al. (2012). Глобальный анализ эволюции и механизма устойчивости к эхинокандину у Candida glabrata . PLoS Pathog. 8:e1002718. doi: 10.1371/journal.ppat.1002718

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Софьян А.К. , Митчелл А., Шах Д.Н., Нгуен Т., Сим М., Тройчак А. и др. (2018). Резафунгин (CD101), эхинокандин нового поколения: систематический обзор литературы и оценка возможного места в терапии. Дж. Глоб. Антимикроб. Сопротивляться. 14, 58–64. doi: 10.1016/j.jgar.2018.02.013

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Стивенс, Д. А. (2000). Исследования лекарственного взаимодействия ингибитора глюкансинтазы (LY 303366) и ингибитора хитинсинтазы (никкомицин Z) для ингибирования и уничтожения грибковых патогенов. Антимикроб. Агенты Чемотер. 44, 2547–2548. doi: 10.1128/AAC.44.9.2547-2548.2000

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Томпсон, Г.Р., Баркер Б.М. и Видерхольд Н.П. (2017). Крупномасштабная оценка активности амфотерицина В, триазола и эхинокандина in vitro против видов Coccidioides из США. Учреждения. Антимикроб. Агенты Чемотер. 61, e02634–e02616. doi: 10.1128/AAC.02634-16

    Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google

    Цукахара К. , Хата К., Накамото К., Сагане К., Ватанабэ Н.-А., Куромицу Дж. и др. (2003). Подход медицинской генетики к идентификации молекулярной мишени нового ингибитора сборки клеточной стенки грибов. Мол. микробиол. 48, 1029–1042. doi: 10.1046/j.1365-2958.2003.03481.x

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Вириякосол, С., Капур, М., Окамото, С., Ковел, Дж., Солтоу, К. А., Трзосс, М., и соавт. (2019). APX001 и другие пролекарства ингибитора Gwt1 эффективны при экспериментальной пневмонии Coccidioides immitis . Антимикроб. Агенты Чемотер. 63, номер: e01715-18. doi: 10.1128/AAC.01715-18

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Уокер, Л.А., Гоу, Н.А.Р., и Манро, Калифорния (2013). Повышенное содержание хитина снижает восприимчивость видов Candida к каспофунгину. Антимикроб. Агенты Чемотер. 57, 146–154. doi: 10.1128/AAC.01486-12

    Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google

    Уокер, Л. А., Манро, К. А., де Брюйн, И., Ленардон, доктор медицины, Маккиннон, А., и Гоу, Н. А. Р. (2008). Стимуляция синтеза хитина избавляет Candida albicans от эхинокандинов. PLoS Pathog. 4:e1000040.doi: 10.1371/journal.ppat.1000040

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Уокер, С. С., Сюй, Ю., Триантафиллоу, И., Уолдман, М. Ф., Мендрик, К., Браун, Н., и соавт. (2011). Открытие нового класса перорально активных противогрибковых ингибиторов β-1,3-d-глюкансинтазы. Антимикроб. Агенты Чемотер. 55, 5099–5106. doi: 10.1128/AAC.00432-11

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Ватанабэ, Н.-А., Миядзаки, М., Хории, Т., Сагане, К., Цукахара, К., и Хата, К. (2012). E1210, новый противогрибковый препарат широкого спектра действия, подавляет рост гиф Candida albicans за счет ингибирования биосинтеза гликозилфосфатидилинозитола. Антимикроб. Агенты Чемотер. 56, 960–971. doi: 10.1128/AAC.00731-11

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Видерхольд, Н.П., и Льюис, Р.Э. (2003). Эхинокандиновые противогрибковые препараты: обзор фармакологии, спектра действия и клинической эффективности. Экспертное заключение. расследование Наркотики 12, 1313–1333. дои: 10.1517/13543784.12.8.1313

    Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google

    Видерхольд, Н. П., Локк, Дж. Б., Дарувала, П., и Бартизал, К. (2018). Резафунгин (CD101) демонстрирует сильную активность in vitro в отношении Aspergillus , включая устойчивые к азолам изоляты Aspergillus fumigatus и криптические виды. J. Антимикроб. Чемотер. 73, 3063–3067. doi: 10.1093/jac/dky280

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Видерхольд, Н.P., Najvar, L.K., Shaw, K.J., Jaramillo, R., Patterson, H., Olivo, M., et al. (2019). Эффективность отсроченной терапии с помощью Fosmanogepix (APX001) в мышиной модели инвазивного кандидоза Candida auris. Антимикроб. Агенты Чемотер. 63:e01120-19. doi: 10.1128/AAC.01120-19

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Wring, S.A., Randolph, R., Park, S., Abruzzo, G., Chen, Q., Flattery, A., et al. (2017). Доклиническая фармакокинетика и фармакодинамическая мишень SCY-078, первого в своем классе перорально активного противогрибкового ингибитора синтеза глюкана, на мышиных моделях диссеминированного кандидоза. Антимикроб. Агенты Чемотер. 61:e02068-16. doi: 10.1128/AAC.02068-16

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Ян Ф., Чжан Л., Вакабаяши Х., Майерс Дж., Цзян Ю., Цао Ю. и др. (2017). Толерантность к каспофунгину у Candida albicans связана по крайней мере с тремя отличительными механизмами, которые регулируют экспрессию генов FKS и ремоделирование клеточной стенки. Антимикроб. Агенты Чемотер. 61, e00071–e00017. дои: 10.1128/ААС.00071-17

    Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google

    Чжао Ю. , Ли М. Х., Падеру П., Ли А., Хименес-Ортигоса К., Парк С. и др. (2018). Значительно улучшенная фармакокинетика повышает эффективность APX001 in vivo против изолятов Candida с эхинокандином и множественной лекарственной устойчивостью в мышиной модели инвазивного кандидоза. Антимикроб. Агенты Чемотер. 62, фото: e00425-18. doi: 10.1128/AAC.00425-18

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    границ | Клеточная стенка грибов: виды Candida, Cryptococcus и Aspergillus

    Введение

    Клеточная стенка грибов является важной структурой с большой пластичностью, жизненно важной для поддержания целостности и жизнеспособности клеток.Клеточная стенка играет важную роль в различных биологических функциях, таких как контроль клеточной проницаемости и защита клетки от осмотического и механического стресса (Ponton, 2008; Gow et al., 2017; Agustinho et al., 2018). В дополнение к этим важным функциям клеточная стенка опосредует взаимодействия с внешней средой через адгезины и большое количество рецепторов, которые после их активации запускают сложный каскад сигналов внутри клетки (Ponton, 2008). Клеточная стенка уникальным образом состоит из полисахаридов и белков, а также липидов и пигментов (Gow et al., 2017). Более того, некоторые компоненты стенок очень иммуногенны и стимулируют клеточные и гуморальные реакции во время инфекции (Erwig and Gow, 2016). β-глюканы и маннаны, а также направленные против них антитела являются очень полезными диагностическими инструментами, поскольку их можно обнаружить у пациентов с инвазивной грибковой инфекцией (Pazos et al., 2006). Как упоминалось выше, клеточная стенка представляет собой незаменимую структуру, и ее разрушение может иметь серьезные последствия для роста и морфологии клеток, что приводит к гибели клеток.Следовательно, он считается хорошей противогрибковой мишенью (Heitman, 2005; Cortes et al., 2019).

    Клеточная стенка представляет собой специфическую и сложную клеточную органеллу, состоящую из глюканов, хитина, хитозана и гликозилированных белков. Белки обычно связаны с полисахаридами, в результате чего образуются гликопротеины. Вместе эти компоненты способствуют жесткости клеточной стенки. Синтез и поддержание клеточной стенки включает большое количество биосинтетических и сигнальных путей (Casadevall and Perfect, 1998).

    В следующих разделах будут рассмотрены различные компоненты клеточной стенки грибов в целом, а затем особое внимание будет уделено трем видам грибов: Candida albicans , Cryptococcus neoformans и Aspergillus fumigatus . Рассмотрены характеристики их компонентов, их связь с вирулентностью, патогенностью и взаимодействием с иммунной системой хозяина. Мы также упоминаем различные работы, в которых различные компоненты клеточной стенки являются возможными мишенями для противогрибковой терапии.Недавно было высказано предположение, что клеточная стенка особенно важна в биотехнологии для разработки новых противогрибковых препаратов, а также ингибиторов определенных компонентов клеточной стенки, которые проходят клинические испытания. Обзор по этой теме см. в ссылке (Cortes et al. , 2019). Клеточная стенка грибов является обширной и сложной темой, и мы выделяем критическую литературу, но невозможно процитировать каждое исследование.

    Структура клеточной стенки

    Клеточная стенка состоит из различных слоев, где самый внутренний слой представляет собой более консервативную структуру, на которой откладываются остальные слои, и может различаться у разных видов грибов.Состав и организация клеточных стенок грибов сравниваются и противопоставляются в тексте ниже.

    Глюканы

    Глюкан является наиболее важным структурным полисахаридом клеточной стенки грибов и составляет 50–60% от сухого веса этой структуры. Большинство полимеров глюкана состоят из 1,3-звеньев глюкозы (65–90%), хотя есть и глюканы с β-1,6 (в Candida , но не в Aspergillus ), β-1,4, звенья α-1,3 и α-1,4. β-1,3-D-глюкан является важнейшим структурным компонентом стенки, с которым ковалентно связаны другие компоненты этой структуры.β-1,3-D-глюкан синтезируется комплексом ферментов, расположенных в плазматической мембране, называемых глюкансинтазами. Гены, кодирующие β-1,3-D-глюканы, FKS1 и FKS2 , были первоначально идентифицированы в Saccharomyces cerevisiae (Douglas et al., 1994; Qadota et al., 1996; Ponton, 2008). Аналоги этих генов в настоящее время известны у нескольких видов Candida , Aspergillus , Cryptococcus и Pneumocystis среди других грибов.Нарушение одного из этих генов влияет на рост клеток (Douglas et al., 1994; Mazur et al., 1995), но устранение обоих вызывает гибель клеток (Mazur et al., 1995; Bowman and Free, 2006). α-1,3-глюкан также является основным компонентом клеточной стенки грибов и синтезируется α-глюкансинтазой ( AGS1 ).

    Хитин

    Содержание хитина в стенке гриба варьирует в зависимости от морфологической фазы гриба. Он составляет 1–2% от сухой массы клеточной стенки дрожжей, в то время как у мицелиальных грибов он может достигать 10–20%.Хитин синтезируется из н-ацетилглюкозамина ферментом хитинсинтазой, который откладывает полимеры хитина во внеклеточном пространстве рядом с цитоплазматической мембраной. Содержание хитина в стенке гиф C. albicans в три раза выше, чем у дрожжей (Chattaway et al., 1968), а содержание хитина в мицелиальных фазах Paracoccidioides brasiliensis и Blastomyces dermatitidis составляет 25– 30% этой дрожжевой фазы (Kanetsuna et al., 1969).

    Гликопротеины

    Белки составляют 30–50 % сухой массы стенки гриба у дрожжей и 20–30 % сухой массы стенки мицелиальных грибов.Большинство белков связаны с углеводами O- или N-связями, в результате чего образуются гликопротеины. Белки клеточной стенки выполняют различные функции, включая участие в поддержании клеточной формы, процессах адгезии, клеточной защите от различных веществ, поглощении молекул, передаче сигналов, а также синтезе и реорганизации компонентов стенки (Bowman and Free, 2006; Ponton, 2008). .

    Меланин

    Меланин представляет собой пигмент с высокой молекулярной массой, отрицательно заряженный, гидрофобный и нерастворимый в водных растворах, который защищает грибы от стрессоров, способствуя выживанию хозяина (Liu et al. , 1999; Casadevall и др., 2000; Носанчук и Касадеваль, 2006 г.; Носанчук и др., 2015). Грибы производят меланин двумя путями: из промежуточного соединения 1,8-дигидроксинафталина (ДГН) и из L-3,4-дигидроксифенилаланина (L-допа) (Eisenman and Casadevall, 2012). Производство меланина способствует вирулентности грибов (Salas et al., 1996; Noverr et al., 2004; Silva et al., 2009), повышает устойчивость к повреждениям окружающей среды, таким как экстремальные температуры, ультрафиолетовое излучение и токсины (Rosa et al., 2010). ; Залар и др., 2011; Eisenman and Casadevall, 2012), и имеет важное значение для инвазии и распространения. Например, меланин C. neoformans связан с распространением дрожжевых клеток из легких в другие органы (Noverr et al., 2004), известно, что он влияет на иммунный ответ хозяина (Eisenman and Casadevall, 2012) и подавляют фагоцитоз (Wang et al., 1995). У Aspergillus меланин ингибирует апоптоз макрофагов, которые фагоцитировали меланизированные конидии (Volling et al. , 2011).

    Candida albicans

    Виды Candida являются частью слизистой флоры и могут вызывать широкий спектр инфекций человека. Этот род включает не менее 30 видов, имеющих клиническое значение (Pfuller et al., 2011; Silva et al., 2012). За последние десятилетия значительно возросла заболеваемость инфекциями, вызванными Candida рода (Sobel, 2007; Pfuller et al., 2011). C. albicans — это вид, который чаще всего выделяют при кандидозе (45–50%) (Del Palacio et al., 2009).

    Состав и биосинтез

    Candida albicans является наиболее распространенным условно-патогенным микроорганизмом и причиной инвазивной грибковой инфекции у госпитализированных пациентов (Sobel, 2007; Pfuller et al., 2011). Это высокоадаптируемый вид грибов с большим репертуаром факторов вирулентности, что позволяет ему переходить от комменсального организма к патогену. Таким образом, одной из ключевых характеристик вирулентности является его способность переключать морфологию между дрожжевыми клетками, псевдогифами и гифами (Tsui et al. , 2016). Основное различие между дрожжевой и гифальной формой состоит в том, что в гифальной оболочке содержание хитина несколько выше, чем у дрожжевой формы (Braun and Calderone, 1978). Кроме того, структура маннанов клеточной стенки различается между морфотипами со значительным снижением фосфодиэстерифицированных кислотолабильных β-1,2-связанных манноолигосахаридов в гифальной форме, тогда как количество кислотоустойчивых β-1,2-связей -содержащие боковые цепи остаются прежними (Shibata et al., 2007).

    Клеточная стенка Candida albicans имеет двухслойную структуру.Основное ядро ​​клеточной стенки состоит из β-глюкан-хитинового скелета, отвечающего за прочность и форму клеточной стенки (см. рис. 1). Хитин расположен во внутреннем слое клеточной стенки (Gow, Hube, 2012), и его цепочки могут образовывать плотные антипараллельные структуры с водородными связями, связанные с высокой нерастворимостью (Chaffin, 2008). В C. albicans имеется одно семейство CHS , состоящее из четырех генов. Было описано, что CHS1 из класса II является незаменимой хитинсинтазой и участвует в формировании перегородки, жизнеспособности, форме и целостности клеток (Munro et al., 2001).

    Рисунок 1. Структурная организация и состав клеточной стенки Candida albicans .

    Как и в других грибах, наиболее распространенными молекулами в C. albicans являются β-1,3-глюканы. Они во внутренней клеточной стенке связаны с β-1,6-глюканами, которые соединяют внутреннюю и внешнюю клеточные стенки (Brown and Gordon, 2005). β-1,3-глюкансинтазы ответственны за синтез β-1,3-глюканов и состоят из ферментного комплекса по крайней мере с двумя субъединицами, Fksp и Rho1p.У C. albicans Fksp кодируется тремя генами-ортологами, FKS1 , FKS2 и FKS3 , которые катализируют перенос фрагментов сахара от активированных донорных молекул к специфическим акцепторным молекулам, образующим гликозидные связи (Sawistowska-Schroder). и др., 1984).

    β-1,6-глюканы представляют собой боковые цепи различной длины и распределения, которые могут образовывать сложные структуры, стабилизированные межцепочечными водородными связями. Они действуют как линкерные молекулы, связывающие различные белки клеточной стенки с ядром β-1,3-глюкан-хитина через белки гликозилфосфатидилинозитол (GPI) (Klis et al., 2001). β-1,6-глюкансинтаза не была идентифицирована ни у одного вида грибов, однако несколько генов, влияющих на синтез этого соединения, описаны у S. cerevisiae (Lesage and Bussey, 2006). Интересно, что клеточная стенка C. albicans содержит значительно больше β-1,6-глюкана по сравнению с S. cerevisiae из-за либо увеличения количества молекул, либо увеличения остатков глюкозы, либо того и другого (Браун и Гордон, 2005). В отличие от Aspergillus или Cryptococcus spp., α-(Ponton, 2008; Gow et al., 2017)-глюкан отсутствует у Candida spp. клеточная стенка (Yoshimi et al. , 2017).

    Внешний слой клеточной стенки C. albicans упакован маннопротеинами, которые модифицированы гликозилфосфатидилинозитолом (GPI) и сшиты с β-1,6-глюканами (Shibata et al., 2007). N-связанные маннаны состоят из основной цепи α-1,6-маннозы с боковыми цепями α-1,2-олигоманнозы, закрытыми β-1,2-моно-, ди-, три- или тетраманнанами (Shibata et al., 2007). О-связанные маннаны связаны с гликопротеинами клеточной стенки.Некоторые протеинманнозилтрансферазы ответственны за первые этапы биосинтеза O-связанных маннанов, добавляя остаток маннозы к остатку серина или треонина. Дополнительные маннозы добавляются α-1,2-маннозилтрансферазами, что приводит к образованию короткой цепи α-1,2-маннозы. Последний этап состоит из добавления α-1,3-маннозы с помощью α-1,3-маннозилтрансфераз (Free, 2013).

    Маннаны менее жесткие по сравнению с β-глюканами и хитином, поэтому они не влияют на форму клеток. Однако они обладают низкой проницаемостью и пористостью, что влияет на устойчивость клеточной стенки к противогрибковым препаратам и защитные механизмы хозяина (Gow and Hube, 2012). Кроме того, поскольку внешний слой маннана покрывает внутренние слои клеточной стенки, было описано, что он играет важную роль в уклонении от иммунитета, скрывая β-глюканы от обнаружения иммунной системой хозяина (Hernandez-Chavez et al., 2017). Маннаны считаются лигандами патоген-ассоциированного молекулярного паттерна (PAMP), и многие рецепторы хозяина, как известно, участвуют в их распознавании (Brown et al., 2002; Rubin-Bejerano et al., 2007). Candida glabrata содержат маннаны со структурой, близкой к S.cerevisiae mannans, так как он генетически более тесно связан с этим видом (Kobayashi et al., 1998). Кроме того, клеточная стенка C. glabrata имеет на 50% больше белка и более высокое соотношение манноза/глюкоза, чем клеточная стенка S. cerevisiae (de Groot et al., 2008; Lima-Neto et al., 2011).

    Влияние компонентов клеточной стенки

    Candida на взаимодействие гриб-хозяин

    Клеточная стенка грибов играет важную роль во взаимодействии с клетками и тканями хозяина. Компоненты клеточной стенки имеют большое значение для защиты от грибков, смещая иммунный ответ хозяина в пользу роста грибов, что позволяет распространять их в организме хозяина (Poulain and Jouault, 2004; Galan-Diez et al., 2010; Sem et al. , 2016). β-глюкан легко распознается иммунной системой хозяина, вызывая эффективный ответ на инфекцию и тем самым защищая хозяина. Следовательно, маскировка β-глюкана является одним из наиболее важных механизмов видов Candida , и любое нарушение синтеза и организации компонентов клеточной стенки приводит к демаскировке слоя глюкана, увеличивая способность иммунной системы хозяина распознавать и атакуют возбудитель грибов (Granger, 2018).

    Маннопротеины образуют фибриллярный слой, содержащий фрагменты O-гликозилированного олигосахарида и N-гликозилированного полисахарида наиболее внешнего слоя клеточной стенки Candida . Маннопротеины необходимы для взаимодействия Candida с хозяином, позволяя активировать и модулировать иммунный ответ против грибков (Gow and Hube, 2012; Shibata et al. , 2012; Paulovicova et al., 2015). Они маскируют слой β-глюкана, уменьшая распознавание грибов иммунной системой хозяина, процесс, который опосредуется дектином-1, напрямую влияя на способность фагоцитирующих клеток хозяина поглощать и убивать клеток Candida (Galan-Diez et al. ., 2010; Бейн и др., 2014). Кроме того, маскирование слоя β-глюкана придает C. albicans устойчивость к активации комплемента классическим и альтернативным путями, что приводит к неэффективной активации иммунной системы хозяина (Zhang et al., 1997; Boxx et al., 2009). , 2010). Ywp1 является распространенным маннопротеином в клеточной стенке C. albicans . Мутантные штаммы с нарушенным геном YWP1 приводили к увеличению экспозиции β-глюкана в клеточной стенке. Экспрессия этого белка в зародышевых трубках и гифах приводит к уменьшению воздействия молекул глюкана, что приводит к снижению доступности этих структур для глюкана (Granger, 2018).Сигнальный путь MAPK был продемонстрирован Galan-Diez et al. (2010) участвовать в процессе маскировки β-глюканов. Они обнаружили, что нарушение CEK1 -опосредованного пути MAPK приводит к образованию мутантных штаммов с большей экспозицией слоя β-глюкана в клеточной стенке, что приводит к усилению иммунных ответов, опосредованных Dectin-1 (Galan-Diez et al. ., 2010).

    Хитин

    играет важную роль во взаимодействии видов Candida с хозяином. Мутантные штаммы с дефицитом хитина проявляют ослабленную вирулентность у иммунокомпетентных и иммуносупрессивных хозяев, даже несмотря на то, что эти мутанты способны колонизировать отдельные органы, показывая, что профиль ослабленной вирулентности не связан с ускоренным очищением (Bulawa et al., 1995). Хитин может блокировать распознавание C. albicans мононуклеарными клетками периферической крови (РВМС) и мышиными макрофагами, что приводит к значительному снижению продукции цитокинов (Mora-Montes et al., 2011). Кроме того, важной особенностью хитина клеточной стенки C. albicans является его важная роль в индукции аргиназы-1 в макрофагах-хозяевах, вызывающая изменения в продукции оксида азота макрофагами, что приводит к снижению антимикробной функции макрофагов (Wagener et al. , 2017).

    Клеточная стенка как противогрибковая мишень

    Клеточная стенка грибов в основном состоит из молекул, которых нет в организме человека, и поэтому они представляют собой идеальную мишень для разработки клинических противогрибковых соединений и разработки иммунотерапевтических средств.

    Препараты эхинокандинов

    представляют собой противогрибковые соединения, которые неконкурентным образом нацелены на синтез β-1,3-глюкана клеточной стенки (Aguilar-Zapata et al., 2015). Есть три коммерчески доступных препарата — каспофунгин, микафунгин и анидулафунгин, а также новая молекула с длительным периодом полувыведения — резафунгин (CD101) — которая в настоящее время находится на стадии 3 оценки (Krishnan et al., 2017; Видерхольд и др., 2018).

    Хитин важен для устойчивости к каспофунгину у некоторых видов Candida , таких как C. albicans , C. tropicalis , C. parapsilosis и C.guilliermondii . Было описано увеличение содержания хитина в некоторых изолятах C. krusei в результате воздействия каспофунгина (Walker et al., 2013). Штаммы с повышенным уровнем хитина в клеточной стенке также проявляют резистентность к эхинокандину, что было выявлено в модели кандидоза с систематической инфекцией in vivo (Lee et al., 2012).

    Кроме того, существует новый препарат под названием ибрексафунгерп (SCY-078), который представляет собой ингибитор глюкансинтазы, относящийся к классу тритерпеноидных противогрибковых средств и проявляющий широкую активность in vitro и in vivo в отношении широкого спектра Candida . (Ларкин и др., 2019). Исследования in vitro показали, что этот новый препарат обладает фунгицидной активностью против резистентных к азолу Candida spp. изолятов, сходных с эхинокандинами, но также и против большинства клинических изолятов, устойчивых к эхинокандинам, из-за мутаций гена FKS (Scorneaux et al., 2017).

    Cryptococcus neoformans

    Cryptococcus neoformans является этиологическим агентом криптококкоза, системного микоза с диссеминацией в центральную нервную систему, вызывающего менингоэнцефалит и в первую очередь поражающего пациентов с ослабленным иммунитетом, таких как ВИЧ-положительные пациенты (Maziarz and Perfect, 2016; Rajasingham et al. , 2017; Beardsley). и др., 2019).

    Состав, биосинтез и взаимодействие с хозяином

    Клеточная стенка Cryptococcus neoformans представляет собой динамическую структуру, которая подвергается постоянному ремоделированию для регулирования распределения и сшивки ее компонентов, необходимых для клеточного роста и деления (Doering, 2009; Agustinho et al., 2018; Ван и др., 2018). Клеточная стенка Cryptococcus представляет собой двухслойную структуру, состоящую из α-1,3-глюкана, β-1,3 и β-1,6-глюкана, хитина, хитозана, маннопротеинов и других GPI-заякоренных белков (Baker et al. ., 2007; Деринг, 2009; О’Мира и Алспо, 2012; Ван и др., 2018). Внутренний слой в основном состоит из β-глюканов и хитина, расположенных в виде волокон, параллельных плазматической мембране, а внешний слой содержит α-глюкан и β-глюкан (Sakaguchi et al., 1993; Doering, 2009; O’Meara and Alspaugh, 2012; см. рис. 2).В совокупности эти компоненты необходимы для поддержания формы клеток и инфекции.

    Рисунок 2. Структурная организация и состав клеточной стенки Cryptococcus neoformans .

    Экзополисахаридная капсула прикреплена к внешнему слою клеточной стенки (O’Meara and Alspaugh, 2012; Wang et al., 2018), и это соединение должно происходить правильно, поскольку оно является основным фактором вирулентности этих дрожжей (Vecchiarelli, 2000; McFadden and Casadevall, 2001; Zaragoza et al., 2009). β-1,6-глюкан является наиболее распространенным компонентом клеточной стенки Cryptococcus , в то время как β-1,3-глюкан менее распространен, в отличие от других дрожжей (Gilbert et al., 2010; Wang et al., 2018). . Основные функции β-1,6-глюкана заключаются в поддержании и организации клеточной стенки посредством взаимодействия с другими компонентами клеточной стенки, что способствует целостности клеточной стенки Cryptococcus . Такие гены, как KRE5 , KRE6 и SKN1 , участвуют в синтезе β-1,6-глюкана и играют важную роль в поддержании правильного роста, морфологии и целостности клеток (Zaragoza et al. , 2009; Гилберт и др., 2010). Мутанты по этим генам более чувствительны к стрессу и обнаруживают важные изменения в составе клеточной стенки, ведущие к потере вирулентности у хозяина-млекопитающего (Gilbert et al., 2010).

    β-1,3-глюкан является структурным компонентом клеточной стенки Cryptococcus . У других аскомицетов β-1,3-глюкан является наиболее распространенным компонентом, но у C. neoformans процент β-1,3-глюкана ниже (Casadevall and Perfect, 1998). Ген β-1,3-глюкансинтазы ( FKS1 ) является важным, что указывает на важность этого консервативного компонента клеточной стенки (Thompson et al., 1999; О’Мира и Алспо, 2012). Активируя FKS1, Cryptococcus способен реагировать на стресс, продуцируя β-1,3-глюкан (Wang et al., 2018). Ингибирование синтеза β-1,3-глюкана вызывает гибель клеток и изменения клеточной морфологии (Toh et al., 2017).

    α-1,3-глюкан является основным компонентом клеточной стенки криптококка и синтезируется AGS1 . Если ген AGS1 нарушен (штамм ags1 Δ), дрожжевые клетки остаются живыми, но на поверхности нет капсулы, несмотря на образование компонентов капсулы (Reese and Doering, 2003; Reese et al., 2007). Это показало, что α-1,3-глюкан важен для правильного прикрепления капсулы к клеточной стенке у C. neoformans . Кроме того, α-1,3-глюкан может участвовать в защите от иммунной системы, действуя как щит, скрывающий иммуногенные β-глюканы и молекулы хитина, как показано в других патогенных грибах, таких как Histoplasma capsulatum , B. .dermatitidis и P. brasiliensis (San-Blas and San-Blas, 1977; Rappleye et al., 2007; Koneti et al., 2008; O’Meara and Alspaugh, 2012).

    Хитин

    присутствует в незначительных количествах в клеточной стенке C. neoformans , тем не менее он способствует прочности клеточной стенки (Doering, 2009). У Cryptococcus восемь хитинсинтаз и три потенциальных регуляторных белка координируют и регулируют отложение хитина в клеточной стенке (Banks et al. , 2005; Doering, 2009). CHS3P необходим для целостности клеток, и его разрушение приводит к появлению чувствительных к стрессу клеток, которые демонстрируют морфологические изменения и неспособность удерживать меланин (Banks et al., 2005; Ван и др., 2018). Хитин играет решающую роль в архитектуре капсулы, что было обнаружено в хитиноподобных структурах, обнаруживаемых в капсульном материале (Zaragoza et al., 2010). Было показано, что хитин клеточной стенки C. neoformans индуцирует иммунный ответ Th3-типа, увеличивая смертность мышей, демонстрируя, что хитин может модулировать иммунную систему хозяина (Wiesner et al., 2015).

    Хитозан, деацетилированная форма хитина, также присутствует в клеточной стенке C. neoformans .Хитозан является более растворимым и гибким полимером (Doering, 2009), а его количество в клеточной стенке в три-пять раз выше, чем у хитина. Это соотношение изменяется с плотностью клеточной стенки (Banks et al., 2005). C. neoformans кодирует три гена хитиндеацетилаз: CDA1 , CDA2 и CDA3 . Когда эти гены нарушены, у мутантов снижается уровень хитозана, что коррелирует с повышенным уровнем хитина, дефектами целостности клеток и увеличением размера капсулы (Baker et al., 2007; Деринг, 2009). Фонсека и др. (2009) наблюдали in vitro , что хитоолигомеры мешали сборке капсулы C. neoformans . Добавление хитоолигомеров к культурам C. neoformans приводило к аберрантным капсулам и нарушению соединения капсулы с клеткой. Кроме того, эксперименты in vitro , в которых синтез хитина C. neoformans ингибируется добавлением ингибитора глюкозамин-6-фосфатсинтазы, привели к тому, что капсулы были слабо связаны с клеточной стенкой, а полисахаридные волокна уменьшились в диаметре (Fonseca et al., 2009). Дефицитные по хитозану штаммы продемонстрировали медленный рост in vivo и ослабленную вирулентность в модели на мышах (Baker et al., 2011).

    Мутанты

    хитозана способствуют защитному ответу хозяина Th2 (Upadhya et al., 2016), показывая, что хитозан необходим для полной вирулентности Cryptococcus . Важной структурой хитина является аминосахар N-ацетилглюкозамин (GlcNAc). Недавно Камачо и соавт. (2017) показали, что C. neoformans способен метаболизировать экзогенный GlcNAc в качестве источника углерода и азота.Добавление в культуральную среду GlcNAc приводило к увеличению уровней соотношения хитина и хитозана. В совокупности данные свидетельствуют о том, что Cryptococcus может использовать этот экзогенный GlcNAc для построения своих клеточных стенок и что GlcNAc влияет на структуру капсулы и отложение меланина в клеточной стенке.

    Меланин является важным фактором вирулентности C. neoformans , связанным с клеточной стенкой. Этот пигмент вырабатывается лакказой, придает устойчивость к факторам стресса, является иммуногенным, модулирует иммунный ответ хозяина и, как известно, играет важную роль в распространении Cryptococcus в мозг хозяина (Liu et al., 1999; Медник и др., 2005; Носанчук и Касадеваль, 2006). Меланизированные клетки Cryptococcus менее чувствительны к амфотерицину В, и этот фенотип может быть связан с модификациями клеточной стенки, такими как уменьшение размеров пор клеточной стенки, в результате чего меланизированные клетки становятся значительно менее пористыми, чем немеланизированные дрожжевые клетки (Jacobson and Ikeda, 2005).

    Наконец, компоненты, завершающие структуру клеточной стенки C. neoformans , представляют собой белки, встроенные в углеводы клеточной стенки.Клеточная стенка криптококка содержит 29 GPI-заякоренных белков, включая протеазы, ферменты, активные в отношении углеводов, и фосфолипазу B1 (Eigenheer et al., 2007). Фосфолипаза B1 (Plb1), ковалентно связанная с β-1,6-глюканом, участвует в гомеостазе мембран, ремоделировании и поддержании целостности клеточной стенки, способствуя выживанию грибов в среде хозяина и облегчая инвазию в ткани (Siafakas et al., 2007; О’Мира и Алспо, 2012). Мутанты Plb1 продуцируют капсулы меньшей плотности, что может указывать на их важность для прикрепления капсулы к клеточной стенке.Кроме того, эти мутанты продемонстрировали повышенную чувствительность к агентам, нарушающим клеточную стенку. Кроме того, количество Plb1 увеличивается в клеточной стенке при более высоких температурах, что указывает на роль этого белка в защите криптококковых клеток от температурного стресса (Siafakas et al. , 2007). Разрушение Plb1 в Cryptococcus приводит к ослаблению его вирулентности, о чем свидетельствует снижение грибковой нагрузки в моделях мышиной инфекции и снижение диссеминации с возможной ролью в транслокации через гематоэнцефалический барьер (Santangelo et al., 2004; Чаякулкири и др., 2011; Марувада и др., 2012 г.; Эванс и др., 2015).

    Компоненты клеточной стенки

    криптококков уникальны и тесно связаны со способностью этого гриба вызывать заболевания, играя важную роль в ответ на различные стрессы хозяина и окружающей среды (Wang et al., 2018). Капсула является основным фактором вирулентности C. neoformans (Vecchiarelli, 2000; McFadden and Casadevall, 2001; Zaragoza et al., 2009). Как упоминалось ранее, компоненты клеточной стенки являются ключом к правильному закреплению капсулы (O’Meara and Alspaugh, 2012). C. neoformans может увеличивать свой размер двумя путями: увеличением размера капсулы, что широко изучается (Zaragoza et al., 2008, 2009; Ding et al. , 2016; Casadevall et al., 2018; Fonseca et al. , 2018; Wang et al., 2018; Zaragoza, 2019) или увеличение размера капсулы и клеточного тела, приводящее к образованию клеток-титанов, явление менее изученное, приводящее к клеткам, концентрация которых может достигать 100 мкМ (Okagaki et al., 2010; Zaragoza et al. и др., 2010; Гарсия-Родас и др., 2018). Эти исследования предполагают, что во время этого морфологического изменения происходит ремоделирование клеточной стенки.Формирование титановых клеток приводит к более толстой клеточной стенке по сравнению с нормальными клетками (Zaragoza et al., 2010), состоящей из большего количества глюкозамина и меньшего количества глюкозы, с меньшим количеством β-глюканов, имеющих в своем внешнем слое клеточной стенки α-глюканы и структурные маннаны. Клеточная стенка клеток титана имеет повышенный уровень хитина по сравнению с клетками нормального размера, что приводит к пагубному иммунному ответу хозяина, характеризующемуся повышенным уровнем цитокинов типа Th-2, что способствует прогрессированию заболевания у мышей (Wiesner et al. , 2015; Mukaremera et al., 2018). Кроме того, исследований in vitro клеток Титана формируют более толстые клеточные стенки по сравнению с «нормальными» клетками обычного размера, что предполагает ремоделирование клеточной стенки во время этого морфологического изменения (Dambuza et al., 2018; Hommel et al., 2018; Trevijano). -Контадор и др., 2018).

    Клеточная стенка как противогрибковая мишень

    β-1,3-глюкансинтаза является мишенью для соединений эхинокандинов. Однако в то время как ген FKS1 необходим для Cryptococcus , а β-1,3-глюкансинтаза чувствительна к эхинокандинам in vitro , этот противогрибковый препарат неэффективен против C.neoformans (Maligie and Selitrennikoff, 2005; O’Meara and Alspaugh, 2012; Toh et al., 2017; Wang et al., 2018). Поскольку интернализация эхинокандинов клетками Cryptococcus необходима для ингибирования β-1,3-глюкансинтазы, было высказано предположение, что Cryptococcus обладают неизвестным механизмом, снижающим приток лекарственного средства. Однако это все еще неясно, и в настоящее время исследуются другие механизмы, такие как инактивация эхинокандинов этими дрожжами или другой механизм устойчивости (Toh et al., 2017; Ван и др., 2018).

    Клеточная стенка Cryptococcus представляет собой динамическую структуру, которая предоставляет основные инструменты, необходимые грибу для адаптации к среде хозяина. Клетки дрожжей содержат обширный молекулярный арсенал, защищающий грибы от хозяев и стрессоров окружающей среды. Факторы вирулентности Cryptococcus , такие как капсула, образование клеток Титана и меланин, тесно связаны с динамикой и составом клеточной стенки, что подчеркивает важность клеточной стенки для патогенности Cryptococcus .

    Aspergillus fumigatus

    Aspergillus spp. включает множество экологических мицелиальных грибов, встречающихся в различных экологических нишах по всему миру, и может вызывать опасные для жизни заболевания у лиц с ослабленным иммунитетом с широким спектром клинических проявлений (Latge, 1999).

    Состав и биосинтез

    Среди этого рода A. fumigatus является наиболее распространенным видом и в значительной степени ответственен за повышенную заболеваемость инвазивным аспергиллезом с высоким уровнем смертности среди пациентов с ослабленным иммунитетом (Garcia-Rubio et al., 2017). Из-за своего клинического значения эта плесень стала моделью для изучения клеточной стенки мицелиальных грибов и понимания ее роли в росте и патогенезе.

    Как и Cryptococcus , клеточная стенка Aspergillus представляет собой двухслойную структуру. У Aspergillus преобладающими компонентами клеточной стенки являются полисахариды, синтезируемые трансмембранными синтазами, трансгликозидазами и гликозилгидролазами. Основное ядро ​​клеточной стенки A. fumigatus состоит из полимера β-1,3-глюкана и хитина, который отвечает за жесткость этой структуры.β-1,3-глюкан поперечно связан с α-1,3-глюканом, галактоманнаном, галактозаминогалактаном и уникальной смешанной молекулой β-1,3-1,4-глюканов, которая ранее никогда не была описана у грибов. они ковалентно связаны друг с другом (Fontaine et al., 2000). Состав внешней клеточной стенки различается между морфотипами, гифами и конидиями, которые имеют стержневой слой, состоящий из гидрофобинов, за которыми следует дигидроксинафталин меланин (Aimanianda et al., 2009; Bayry et al., 2014). Интересно, что во внешнем слое клеточной стенки нет ни β-1,3-глюкана, ни хитина, в отличие от других видов (см. рис. 3).

    Рисунок 3. Структурная организация и состав клеточной стенки Aspergillus fumigatus .

    Хитин составляет гораздо большую долю клеточной стенки у мицелиальных грибов, чем у дрожжей, около 10–20% сухого веса клеточных стенок. На внешней стороне мембраны зарождающаяся хитиновая цепь загибается сама на себя, образуя антипараллельные цепи с внутрицепочечными водородными связями (Chantal et al., 2016). Несколько семейств хитинсинтаз (CHS) ответственны за синтез этого соединения, и многие изоформы были идентифицированы биоинформатически. Однако конкретную функцию каждого из них еще предстоит установить. Предполагается, что A. fumigatus имеет восемь генов CHS (Muszkieta et al., 2014). Эта множественность сохраняется у многих видов и подчеркивает важность хитина в грибах.

    Другим основным компонентом клеточной стенки A. fumigatus является β-1,3-глюкан, который синтезируется комплексом глюкансинтазы, который содержит две субъединицы, с использованием УДФ-глюкозы в качестве субстрата. Каталитическая субъединица кодируется геном FKS1 , мишенью эхинокандиновых препаратов.Этот ген уникален, но не является обязательным для A. fumigatus . Делеционный мутант Δ fks1 показал компенсаторное увеличение хитина и галактозаминогалактана с уменьшением галактоманнана в клеточной стенке (Dichtl et al., 2015). Белок FKS1 образован 16 трансмембранными спиралями и двумя внешними петлями (Beauvais et al., 2001). Регуляторной единицей является Rho1-GTPase, кодируемая геном RHO1 , и было высказано предположение о наличии регуляторного взаимодействия между этой субъединицей и путем целостности клеточной стенки A. fumigatus (Dichtl et al., 2012). Синтез других полисахаридов остается малоизученным. Например, α-1,3-глюкан является важным компонентом клеточной стенки A. fumigatus , синтезируемым тремя α-1,3-глюкансинтазами, кодируемыми генами AGS1 , AGS2 и AGS3 , но субстрат этих ферментов до сих пор неизвестно (Beauvais Anne and Latgé, 2006). Делеция всех трех генов AGS привела к отсутствию α-(Ponton, 2008; Gow et al., 2017)-глюкан в клеточной стенке и снижение вирулентности в мышиной модели. Однако на его рост и прорастание это не повлияло (Beauvais et al., 2013).

    Другим неотъемлемым компонентом клеточной стенки гриба A. fumigatus являются длинные линейные цепи повторяющихся маннановых звеньев, образованных четырьмя α-1,6-связанными и α-1,2-связанными маннозами с боковыми цепями галактофурана, ковалентно связанными с хитин-глюкановое полисахаридное ядро. Однако были обнаружены большие различия в структурной организации длинных маннанов у дрожжей, таких как S. cerevisiae и C. albicans по сравнению с A. fumigatus . Сильно разветвленные маннаны этих дрожжей связаны с белками, но не связаны ковалентно с глюкан-хитиновым ядром, как это было обнаружено у A. fumigatus (Fontaine et al., 2000). Одиннадцать предполагаемых маннозилтрансфераз были обнаружены у A. fumigatus в качестве ортологичных генов у дрожжей, ответственных за установление связей α-1,6- и α-1,2-маннозы. Однако полная делеция этих генов не приводила к снижению содержания маннана в клеточной стенке мицелия, но вызывала уменьшение содержания маннана в клеточной стенке конидиев (Henry et al., 2016). Были исследованы другие ортологичные гены маннозилтрансфераз дрожжей, функция которых не связана с полимеризацией маннана, и было обнаружено, что два члена семейства KTR (также называемые Kre2/Mnt1) ответственны за полимеризацию галактоманнана структурной клеточной стенки в этой плесени. Делеция этого гена привела к тяжелому фенотипу роста, сильному дефекту конидиации и снижению вирулентности в мышиных моделях (Henry et al. , 2019).

    Различные полимеры, содержащие галактозу, расположены в A.фумигатус клеточной стенки. Галактоманнан состоит из маннана и галактофуранозы и, вероятно, включает предшественник якоря GPI (Costachel et al., 2005), в то время как галактозаминогалактан состоит из α-1-4-связанной галактозы и α-1-4-связанного N-ацетилгалактозамина. остатки (Fontaine et al., 2011). Присутствие β-1,3-1,4-глюкана в клеточной стенке A. fumigatus является уникальной особенностью; это было первое описание этой молекулы у грибов (Fontaine et al., 2000). Хотя этот полисахарид является хорошо изученной молекулой в растениях (Doblin et al., 2009), роль этой молекулы в A. fumigatus неизвестна, хотя исследование предполагает, что одна гликозилтрансфераза, кодируемая геном TFT1 (Three Four Transferase 1), участвует в синтезе глюкана со смешанной связью клеточной стенки (Samar и др., 2015). Как только эти линейные ресинтезированные полисахариды экструдируются в клеточную стенку, они должны быть модифицированы и сшиты друг с другом, что приводит к структурной организации клеточной стенки. В этом контексте некоторые GPI-заякоренные трансгликозидазы играют важную роль в ремоделировании вновь синтезированных полисахаридов (Mouyna et al., 2013). Например, ферменты семейства Gel (семейство GH72) ответственны за удлинение, а также за разветвление вновь синтезированного β-1,3-глюкана (Gastebois et al., 2010; Aimanianda et al., 2017), в то время как DFG семейство принимает участие в ковалентном связывании галактоманнана с глюкан-хитиновым ядром (Muszkieta et al., 2019).

    Иммунный ответ хозяина на

    Aspergillus fumigatus Компоненты клеточной стенки

    Aspergillus fumigatus выделяет большое количество переносимых по воздуху конидий, которые люди вдыхают.Первый барьер, участвующий в клиренсе конидий A. fumigatus , формируется мукоцилиарными клетками дыхательных путей, за которыми следуют альвеолярные макрофаги в просвете альвеол до того, как они прорастут (Latge, 1999).

    Состав клеточной стенки варьируется в зависимости от стадии роста гриба, поэтому иммунный ответ хозяина также различается (Lee and Sheppard, 2016). Спящие конидии имеют внешний слой, образованный палочками гидрофобинов RodA и дигидроксинафталин-меланина, которые иммунологически инертны и маскируют внутренние компоненты клеточной стенки грибов.Меланин является важным фактором вирулентности для Aspergillis , поскольку он защищает конидии от макрофагов и фагоцитарную активность эпителиальных клеток, ингибируя подкисление фаголизосом и апоптоз фагоцитов (Amin et al., 2014; Bayry et al., 2014). После фагоцитоза конидий альвеолярными макрофагами и прорастания палочки деградируют, и скрытые полисахариды клеточной стенки обнажаются, вызывая мощный иммунный ответ.

    β-1,3-глюкан специфически распознается рецептором распознавания образов (PRR), Dectin-1 (Herre et al., 2004), который стимулируется только фибриллярными или корпускулярными формами β-1,3-глюкана, но не растворимыми формами. Дектин-1 необходим для продукции IL-23 дендритными клетками и стимуляции продукции IL-17 нейтрофилами (Werner et al., 2009). Он также необходим для ответов IL-22, а также для высвобождения IL-1α, IL-12, CCL3, CCL4 и TNFα (Gessner et al. , 2012). Дектин-1 играет роль в адаптивном иммунном ответе на A. fumigatus , дефицит которого приводит к изменению созревания специфических Т-клеток (Rivera et al., 2011), что приводит к увеличению продукции Dectin-1-зависимых CXCL1, CXCL2 и TNFα макрофагами, происходящими из костного мозга (Carrion Sde et al., 2013). Эти Dectin-1-зависимые ответы более актуальны для прорастающих конидий и молодых гиф, поскольку подвергаются воздействию более высоких уровней β-1,3-глюканов, чем в зрелых гифах, где они покрыты экзополисахаридами (Gravelat et al., 2013). В отношении α-1,3-глюкана рецептор-хозяин не идентифицирован. Мутантный мутант с тройной делецией генов, регулирующих биосинтез, привел к повышенному воздействию поверхностных PAMPs, поэтому он может играть роль в маскировке этих мотивов от иммунного распознавания (Beauvais et al., 2013).

    Одним из важных экзополисахаридов является галактозаминогалактан, адгезин, который облегчает связывание гиф с макрофагами, нейтрофилами и тромбоцитами (Fontaine et al., 2011; Rambach et al., 2015). Это было связано с иммуносупрессивной активностью, маскирующей β-глюканы клеточной стенки от узнавания Dectin-1, снижением апоптоза полиморфноядерных нейтрофилов через механизм, зависящий от NK-клеток, и продукцией ROS (Gravelat et al., 2013; Robinet et al., 2014) . Кроме того, этот полисахарид способствует развитию грибков у иммунокомпетентных мышей из-за его иммуносупрессивной активности, связанной с уменьшением нейтрофильных инфильтратов (Fontaine et al., 2011). У людей полисахарид ингибирует защитный ответ Th2 и Th27 по отношению к Th3, способствуя секреции IL-1Ra мононуклеарными клетками периферической крови человека (Gresnigt et al., 2014). Галактоманнан также оказывает вредное воздействие на иммунную систему, способствуя развитию грибковой инфекции. DC-SIGN представляет собой рецептор адгезии, который специфически взаимодействует с галактоманнанами клеточной стенки A. fumigatus (Serrano-Gomez et al., 2004). Дектин-2 является еще одним рецептором, который распознает α-маннаны и играет важную роль в связывании конидий и гиф макрофагами THP-1, что приводит к высвобождению TNF-α и IFN-α, а также усилению противогрибковой активности плазмоцитоидными дендритными клетками (Loures et al. др., 2015).

    Наконец, рецептор-хозяин для хитина, внутреннего компонента клеточной стенки Aspergillus , еще не продемонстрирован. Иммунный ответ на хитин противоречив, и точные механизмы, определяющие его воспалительную характеристику, плохо изучены. Было показано, что он обладает провоспалительными, а также противовоспалительными свойствами в зависимости от наличия костимулирующих молекулярных паттернов, связанных с патогенами, и иммуноглобулинов (Becker et al., 2016). Его роль зависит от контекста, поскольку его распознавание и способность взаимодействовать с рецепторами зависят от типа клеток, концентрации и размера частиц (Da Silva et al., 2009). Однако, по-видимому, большинство исследований связывают хитин с ответом преимущественно типа 2 (Snarr et al., 2017).

    Клеточная стенка как противогрибковая мишень

    Как было описано ранее, препараты эхинокандинов представляют собой противогрибковые соединения, которые нацелены на синтез β-1,3-глюкана клеточной стенки (Aguilar-Zapata et al., 2015). Однако из-за ограниченной противогрибковой активности этих препаратов в отношении Aspergillus spp. соединения эхинокандинов используются только в качестве альтернативы или терапии спасения для лечения инвазивного аспергиллеза, когда терапия первой линии азоловыми препаратами неэффективна (Aruanno et al., 2019). Примечательно, что новый противогрибковый препарат под названием ибрексафунгерп (SCY-078) обладает широкой активностью in vitro и in vivo в отношении широкого спектра видов Aspergillus (Ghannoum et al., 2018).

    В настоящее время не существует лицензированных вакцин Aspergillus для защиты людей от аспергиллеза (Levitz, 2017). Недавно группа Cassone разработала конъюгат β-1,3-D-глюкана в форме ламинарина и дифтерийного анатоксина CRM197.Углеводные антигены обладают слабой иммуногенностью, поэтому конъюгация с белком-носителем значительно усиливает специфический ответ антител, защищая в данном случае от A. fumigatus и C. albicans (Torosantucci et al., 2005). Кроме того, очищенные гликаны клеточных стенок использовались в качестве иммуногенов посредством интраназальной вакцинации α- и β-1,3-D-глюканами, но не галактоманнаном (Bozza et al., 2009). Учитывая высокую заболеваемость и смертность, связанные с аспергиллезом, предстоит еще много работы, чтобы вакцины против этого патогена стали реальным вариантом.

    Заключение

    Клеточная стенка грибов представляет собой органеллу, состав которой играет решающую роль в жизнеспособности, морфологии и защите клеток от различных стрессоров. В царстве грибов существует неоднородность состава клеточной стенки с видами, которые обладают уникальными характеристиками, отличающими их от других грибов. Синтез основных компонентов клеточной стенки осуществляется разными генами, среди которых выделяются гены FKS1 , AGS1 и CHS , хотя существуют тысячи генов, участвующих в синтезе, передаче сигналов и клеточной стенки сборка.В этом обзоре мы обсуждали, как различные компоненты клеточной стенки играют важную роль в вирулентности этих патогенов и как клеточная стенка взаимодействует с иммунной системой хозяина. Мутанты генов, участвующих в синтезе различных компонентов стенки, показали потерю вирулентности на животных моделях у видов Candida . Клеточная стенка грибов остается наиболее привлекательной мишенью для противогрибковых препаратов следующего поколения. Хотя верно то, что в последнее десятилетие биология клеточной стенки грибов была тщательно изучена, многие вопросы остаются без ответа, требующие дополнительных исследований.

    Вклад авторов

    NT-C, RG-R, HO и JR написали первоначальный вариант рукописи. ХО разработал схему. JR рассмотрел английский язык рукописи. NT-C руководил исследованием.

    Конфликт интересов

    Авторы заявляют, что исследование проводилось при отсутствии каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могли бы быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.

    Ссылки

    Агилар-Сапата, Д., Петрайтиене, Р.и Петрайтис, В. (2015). Эхинокандины: расширяющийся противогрибковый арсенал. клин. Заразить. Дис. 61 (Прил. 6), S604–S611. doi: 10.1093/cid/civ814

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Агустиньо, Д. П., Миллер, Л. К., Ли, Л. К., и Деринг, Т. Л. (2018). Очистка лука: внешние слои Cryptococcus neoformans . Мем. Инст. Освальдо. Круз. 113:e180040. дои: 10.1590/0074-02760180040

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Айманианда, В., Bayry, J., Bozza, S., Kniemeyer, O., Perruccio, K., Elluru, S.R., et al. (2009). Поверхностный гидрофобин предотвращает иммунное распознавание переносимых по воздуху грибковых спор. Природа 460, 1117–1121. doi: 10.1038/nature08264

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Айманианда, В., Сименель, К., Гарно, К., Клаво, К., Тада, Р., Барбин, Л., и соавт. (2017). Двойная активность отвечает за удлинение и разветвление бета-(1,3)-глюкана в клеточной стенке грибов. мБио 8:00619-17. doi: 10.1128/mBio.00619-17

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Амин, С., Тайвиссен, А., Хайнекамп, Т., Салюз, Х. П., и Брэхейдж, А. А. (2014). Зависимая от меланина выживаемость конидий Apergillus fumigatus в эпителиальных клетках легких. Междунар. Дж. Мед. микробиол. 304, 626–636. doi: 10.1016/j.ijmm.2014.04.009

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Аруанно, М., Глампедакис, Э., и Ламот, Ф. (2019). Эхинокандины для лечения инвазивного аспергиллеза: от лаборатории к постели. Антимикроб. Агенты Чемотер. 63:ААС.00399-19. doi: 10.1128/AAC.00399-19

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Bain, J.M., Louw, J., Lewis, L.E., Okai, B., Walls, C.A., Ballou, E.R., et al. (2014). Candida albicans Образование гиф и маскирование маннаном бета-глюкана ингибируют созревание фагосом макрофагов. мБио 5:e01874. doi: 10.1128/mBio.01874-14

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Бейкер, Л.Г., Шпехт, К.А., Донлин, М.Дж., и Лодж, Дж.К. (2007). Хитозан, деацетилированная форма хитина, необходим для целостности клеточных стенок Cryptococcus neoformans . Эукариот. Мобильный 6, 855–867. doi: 10.1128/ec.00399-06

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Бейкер, Л. Г., Шпехт, К.А. и Лодж, Дж. К. (2011). Хитозан клеточной стенки необходим для вирулентности условно-патогенного микроорганизма Cryptococcus neoformans . Эукариот. Мобильный 10, 1264–1268. doi: 10.1128/EC.05138-11

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Бэнкс, И. Р., Шпехт, К. А., Донлин, М. Дж., Герик, К. Дж., Левитц, С. М., и Лодж, Дж. К. (2005). Хитинсинтаза и ее регуляторный белок имеют решающее значение для производства хитозана и роста грибкового патогена Cryptococcus neoformans . Эукариот. Ячейка 4, 1902–1912 гг. doi: 10.1128/ec.4.11.1902-1912.2005

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Bayry, J., Beaussart, A., Dufrene, Y.F., Sharma, M., Bansal, K., Kniemeyer, O., et al. (2014). Характеристика структуры поверхности конидий Aspergillus fumigatus , мутировавших в пути синтеза меланина, и их клеточного иммунного ответа человека. Заразить. Иммун. 82, 3141–3153. doi: 10.1128/IAI.01726-14

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Бердсли, Дж., Соррелл, TC, и Чен, SC (2019). Криптококковые инфекции центральной нервной системы у пациентов, не инфицированных ВИЧ. J Грибы 5:E71.

    Академия Google

    Бове, А., Бозза, С., Нимейер, О., Формоза, К., Баллой, В., Генри, К., и др. (2013). Делеция генов альфа-(1,3)-глюкансинтазы вызывает реструктуризацию конидиальной клеточной стенки, отвечающую за авирулентность Aspergillus fumigatus . PLoS Pathog. 9:e1003716. дои: 10.1371/журнал.ppat.1003716

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Beauvais, A., Bruneau, J.M., Mol, P.C., Buitrago, M.J., Legrand, R., and Latge, J.P. (2001). Глюкансинтазный комплекс Aspergillus fumigatus . J. Бактериол. 183, 2273–2279. doi: 10.1128/jb.183.7.2273-2279.2001

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Бове Энн, П.Д.С., и Латже, Дж.П. (2006). Роль α(1-3) глюкана в aspergillus fumigatus и других грибковых патогенах человека. Грибковая среда. 269–288. дои: 10.1017/CBO9780511541797.014

    Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google

    Becker, K.L., Aimanianda, V., Wang, X., Gresnigt, M.S., Ammerdorffer, A., Jacobs, C.W., et al. (2016). Хитин клеточной стенки Aspergillus индуцирует противовоспалительные и провоспалительные цитокины в РВМС человека через путь Fc-гамма-рецептор/Syk/PI3K. мБио 7:01823-15. doi: 10.1128/mBio.01823-15

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Боумен, С.М. и Фри, С.Дж. (2006). Строение и синтез клеточной стенки грибов. Bioessays 28, 799–808.

    Реферат PubMed | Академия Google

    Boxx, G.M., Kozel, T.R., Nishiya, C.T., и Zhang, MX (2010). Влияние маннана и глюкана на активацию комплемента и связывание С3 Candida albicans . Заразить. Иммун. 78, 1250–1259. doi: 10.1128/IAI.00744-09

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Бокс, Г.М., Нишия, К.Т., Козел, Т.Р., и Чжан, М.Х. (2009). Характеристики Fc-независимого опосредованного человеческими антиманнановыми антителами альтернативного пути инициации отложения C3 в Candida albicans . Мол. Иммунол. 46, 473–480. doi: 10.1016/j.molimm.2008.10.008

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Bozza, S., Clavaud, C., Giovannini, G., Fontaine, T., Beauvais, A., Sarfati, J., et al. (2009). Иммунное зондирование белков, гликолипидов и полисахаридов Aspergillus fumigatus и влияние на иммунитет Th и вакцинацию. Дж. Иммунол. 183, 2407–2414. doi: 10.4049/jimmunol.01

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Браун, П.С., и Кальдероне, Р.А. (1978). Синтез хитина в Candida albicans : сравнение дрожжевых и гифальных форм. J. Бактериол. 133, 1472–1477.

    Реферат PubMed | Академия Google

    Браун, Г.Д., Тейлор, П.Р., Рейд, Д.М., Уиллмент, Дж.А., Уильямс, Д.Л., Мартинес-Помарес, Л., и соавт.(2002). Дектин-1 является основным рецептором бета-глюкана на макрофагах. Дж. Экспл. Мед. 196, 407–412. doi: 10.1084/jem.20020470

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Булава, К.Е., Миллер, Д.В., Генри, Л.К., и Беккер, Дж.М. (1995). Ослабленная вирулентность хитин-дефицитных мутантов Candida albicans . Проц. Натл. акад. науч. США 92, 10570–10574. doi: 10.1073/pnas.92.23.10570

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Камачо, Э., Криссиан, К., Кордеро, Р. Дж. Б., Липораги-Лопес, Л., Старк, Р. Э., и Касадевалл, А. (2017). N-ацетилглюкозамин влияет на состав клеточной стенки Cryptococcus neoformans и структуру меланина. Микробиология 163, 1540–1556. doi: 10.1099/мик.0.000552

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Каррион Сде, Дж., Леал, С.М. мл., Ганнум, М.А., Айманианда, В., Латге, Дж.П., и Перлман, Э. (2013). Гидрофобин RodA на спорах Aspergillus fumigatus маскирует dectin-1- и dectin-2-зависимые реакции и повышает выживаемость грибов in vivo . Дж. Иммунол. 191, 2581–2588. doi: 10.4049/jimmunol.1300748

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Casadevall, A., Coelho, C., Cordero, R.J.B., Dragotakes, Q., Jung, E., Vij, R., et al. (2018). Капсула Cryptococcus neoformans . Вирулентность 1431087, 1–10. дои: 10.1080/21505594.2018

    Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google

    Касадеваль, А., и Перфект, Дж. (1998). Криптококк неоформанс. Вашингтон, округ Колумбия: ASM.

    Академия Google

    Шанталь Ф., Гоу Н.А.Р. и Гонсалвес Т. (2016). Значение подклассов хитинсинтаз ферментов с миозин-подобными доменами для приспособленности грибов. Бр. Микол. соц. 30, 1–14. doi: 10.1016/j.fbr.2016.03.002

    Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google

    Чаттауэй, Ф.В., Холмс, М.Р., и Барлоу, А.Дж. (1968). Состав клеточных стенок мицелиальных и бластоспоровых форм Candida albicans . J. Gen. Microbiol. 51, 367–376. дои: 10.1099/00221287-51-3-367

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Chayakulkeeree, M., Johnston, S.A., Oei, J.B., Lev, S., Williamson, P.R., Wilson, C.F., et al. (2011). SEC14 является особым требованием для секреции фосфолипазы B1 и патогенности Cryptococcus neoformans . Мол. микробиол. 80, 1088–1101. doi: 10.1111/j.1365-2958.2011.07632.x

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Кортес, Дж.CG, Curto, MA, Carvalho, VSD, Perez, P., and Ribas, JC (2019). Клеточная стенка грибов как мишень для разработки новых противогрибковых препаратов. Биотехнология. Доп. 37:107352. doi: 10.1016/j.biotechadv.2019.02.008

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Костачел, К., Коддевиль, Б., Латдж, Дж. П., и Фонтейн, Т. (2005). Гликозилфосфатидилинозитол-заякоренный грибковый полисахарид в Aspergillus fumigatus . Дж.биол. хим. 280, 39835–39842. дои: 10.1074/jbc.m510163200

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Да Силва, К.А., Чалуни, К., Уильямс, А., Хартл, Д., Ли, К.Г., и Элиас, Дж.А. (2009). Хитин является зависящим от размера регулятором продукции ФНО и ИЛ-10 макрофагами. Дж. Иммунол. 182, 3573–3582. doi: 10.4049/jimmunol.0802113

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Дамбуза И. М., Дрейк Т., Chapuis, A., Zhou, X., Correia, J., Taylor-Smith, L., et al. (2018). Клетка Cryptococcus neoformans Titan представляет собой индуцируемый и регулируемый морфотип, лежащий в основе патогенеза. PLoS Pathog. 14:e1006978. doi: 10.1371/journal.ppat.1006978

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    de Groot, P.W., Kraneveld, E.A., Yin, Q.Y., Dekker, H.L., Gross, U., Crielaard, W., et al. (2008). Клеточная стенка человеческого патогена Candida glabrata : дифференцированное включение новых адгезиноподобных белков стенки. Эукариот. Ячейка 7, 1951–1964 гг. doi: 10.1128/EC.00284-08

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Дель Паласио, А., Вильяр, Дж., и Альгамбра, А. (2009). Эпидемиология инвазивного кандидоза у детей и взрослых. Ред. Ибероам. Микол. 26, 2–7.

    Академия Google

    Дихтль, К., Хелмшротт, К., Дирр, Ф., и Вагенер, Дж. (2012). Расшифровка сигналов целостности клеточной стенки в Aspergillus fumigatus : идентификация и функциональная характеристика датчиков стресса клеточной стенки и соответствующих Rho GTPases. Мол. микробиол. 83, 506–519. doi: 10.1111/j.1365-2958.2011.07946.x ​​

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Dichtl, K., Samantaray, S., Aimanianda, V., Zhu, Z., Prevost, M.C., Latge, J.P., et al. (2015). Aspergillus fumigatus , лишенный бета-1,3-глюкана клеточной стенки, является жизнеспособным, массово выделяет галактоманнан и уничтожается ингибиторами образования перегородки. Мол. микробиол. 95, 458–471. doi: 10.1111/mmi.12877

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Дин, Х., Mayer, F.L., Sanchez-Leon, E., de S. Araújo, G.R., Frases, S., и Kronstad, J.W. (2016). Сети волокон и факторы: регуляция образования капсулы у Cryptococcus neoformans . F1000Res 5:F1000. doi: 10.12688/f1000research.8854.1

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Доблин, М.С., Петтолино, Ф.А., Уилсон, С.М., Кэмпбелл, Р., Бертон, Р.А., Финчер, Г.Б., и соавт. (2009). Ген CSLH, подобный синтазе целлюлозы ячменя, опосредует синтез (1,3;1,4)-бета-D-глюкана в трансгенных Arabidopsis . Проц. Натл. акад. науч. США 106, 5996–6001. doi: 10.1073/pnas.09106

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Деринг, Т.Л. (2009). Как это сладко! Биогенез клеточной стенки и формирование полисахаридной капсулы у Cryptococcus neoformans . год. Преподобный Микробиолог. 63, 223–247. doi: 10.1146/annurev.micro.62.081307.162753

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Дуглас, К.M., Foor, F., Marrinan, J.A., Morin, N., Nielsen, J.B., Dahl, A.M., et al. (1994). Ген Saccharomyces cerevisiae FKS1 (ETG1) кодирует интегральный мембранный белок, который является субъединицей 1,3-бета-D-глюкансинтазы. Проц. Натл. акад. науч. США 91, 12907–12911. doi: 10.1073/pnas.91.26.12907

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Эйгенхер, Р. А., Джин Ли, Ю., Блумвальд, Э., Финни, Б. С., и Джелли, А. (2007). Внеклеточные гликозилфосфатидилинозитол-заякоренные маннопротеины и протеазы Cryptococcus neoformans . FEMS Yeast Res. 7, 499–510. doi: 10.1111/j.1567-1364.2006.00198.x

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Эванс, Р. Дж., Ли, З., Хьюз, В. С., Джорджевич, Дж. Т., Нильсен, К., и Мэй, Р. К. (2015). Криптококковая фосфолипаза B1 необходима для внутриклеточной пролиферации и контроля морфологии титановых клеток во время макрофагальной инфекции. Заразить. Иммун. 83, 1296–1304. doi: 10.1128/IAI.03104-14

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Фонсека, Ф.Л., Нимрихтер Л., Кордеро Р.Дж., Фразес С., Родригес Дж., Голдман Д.Л. и соавт. (2009). Роль хитина и хитоолигомеров в архитектуре капсулы Cryptococcus neoformans . Эукариот. Ячейка 8, 1543–1553. doi: 10.1128/EC.00142-09

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Фонсека Ф.Л., Рейс Ф.К.Г., Сена Б.А.Г., Йозефович Л.Дж., Кмецш Л. и Родригес М.Л. (2018). Пропущенные гликановые компоненты капсулы криптококка . Курс. Вверх. микробиол. Иммунол. 422, 31–43. дои: 10.1007/82_2018_140

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Фонтейн, Т., Делангль, А., Сименел, К., Коддевиль, Б., ван Влит, С.Дж., ван Коойк, Ю., и другие. (2011). Галактозаминогалактан, новый иммуносупрессивный полисахарид Aspergillus fumigatus . PLoS Pathog. 7:e1002372. doi: 10.1371/journal.ppat.1002372

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Фонтейн, Т., Simenel, C., Dubreucq, G., Adam, O., Delepierre, M., Lemoine, J., et al. (2000). Молекулярная организация нерастворимой в щелочи фракции клеточной стенки Aspergillus fumigatus . Дж. Биол. хим. 275, 27594–27607.

    Реферат PubMed | Академия Google

    Галан-Диез М., Арана Д. М., Серрано-Гомес Д., Кремер Л., Касасновас Дж. М., Ортега М. и др. (2010). Candida albicans Воздействие бета-глюкана контролируется грибковым CEK1-опосредованным митоген-активируемым протеинкиназным путем, который модулирует иммунные ответы, запускаемые через dectin-1. Заразить. Иммун. 78, 1426–1436. doi: 10.1128/IAI.00989-09

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Гарсия-Родас, Р., де Оливейра, Х.К., Тревихано-Контадор, Н., и Сарагоса, О. (2018). Криптококковые титановые клетки: когда все дрожжевые клетки выросли. Курс. Вверх. микробиол. Иммунол. 422, 101–120. дои: 10.1007/82_2018_145

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Гастебуа, А., Фонтен, Т., Латге, Дж.П. и Муйна И. (2010). бета(1-3)глюканозилтрансфераза Gel4p необходима для Aspergillus fumigatus . Эукариот. Ячейка 9, 1294–1298. doi: 10.1128/EC.00107-10

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Gessner, M.A., Werner, J.L., Lilly, L.M., Nelson, M.P., Metz, A.E., Dunaway, C.W., et al. (2012). Дектин-1-зависимый интерлейкин-22 способствует ранней врожденной защите легких от Aspergillus fumigatus . Заразить.Иммун. 80, 410–417. doi: 10.1128/IAI.05939-11

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Ганнум М., Лонг Л., Ларкин Э. Л., Ишам Н., Шериф Р., Боррото-Эсода К. и др. (2018). Оценка противогрибковой активности нового перорального ингибитора глюкансинтазы SCY-078, по отдельности и в комбинации, для лечения инвазивного аспергиллеза . Антимикроб. Агенты Чемотер. 62:ААС.00244-18. doi: 10.1128/AAC.00244-18

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Гилберт, Н.М., Донлин, М.Дж., Герик, К.Дж., Шпехт, С.А., Джорджевич, Дж.Т., Уилсон, С.Ф., и соавт. (2010). Гены KRE необходимы для синтеза бета-1,6-глюкана, поддержания архитектуры капсулы и закрепления белка клеточной стенки у Cryptococcus neoformans . Мол. микробиол. 76, 517–534. doi: 10.1111/j.1365-2958.2010.07119.x

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Гоу, Н.А.Р., Латге, Дж.П., и Манро, Калифорния (2017). Клеточная стенка грибов: строение, биосинтез и функции. Микробиолог. Спектр. 5:ФУНК-0035-2016. doi: 10.1128/microbiolspec.FUNK-0035-2016

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Грейнджер, Б.Л. (2018). Доступность и вклад в маскировку глюканом природных и генетически меченых версий белка 1 дрожжевой стенки Candida albicans . PLoS One 13:e01. doi: 10.1371/journal.pone.01

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Гравела, Ф.N., Beauvais, A., Liu, H., Lee, M.J., Snarr, B.D., Chen, D., et al. (2013). Галактозаминогалактан Aspergillus опосредует адгезию к компонентам хозяина и скрывает бета-глюкан гиф от иммунной системы. PLoS Pathog. 9:e1003575. doi: 10.1371/journal.ppat.1003575

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Gresnigt, M.S., Bozza, S., Becker, K.L., Joosten, L.A., Abdollahi-Roodsaz, S., van der Berg, W.B., et al. (2014). Полисахаридный фактор вирулентности из Aspergillus fumigatus оказывает противовоспалительное действие за счет индукции антагониста рецептора интерлейкина-1. PLoS Pathog. 10:e1003936. doi: 10.1371/journal.ppat.1003936

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Генри К., Фонтейн Т., Хеддерготт К., Робинет П., Айманианда В., Бо Р. и соавт. (2016). Биосинтез маннана клеточной стенки в конидии и мицелии Aspergillus fumigatus . Клеточная микробиология. 18, 1881–1891. doi: 10.1111/cmi.12665 ​​

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Генри, К., Ли Дж., Данион Ф., Алькасар-Фуоли Л., Мелладо Э., Бо Р. и др. (2019). Две маннозилтрансферазы KTR ответственны за биосинтез маннанов клеточной стенки и контролируют поляризованный рост в Aspergillus fumigatus . мБио 10:02647-18. doi: 10.1128/mBio.02647-18

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Эрнандес-Чавес, М. Дж., Перес-Гарсия, Л. А., Нино-Вега, Г. А., и Мора-Монтес, Х. М. (2017). Грибковые стратегии уклонения от распознавания иммунной системой хозяина. Дж. Фунги 3:51. doi: 10.3390/jof3040051

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Эрре, Дж., Уиллмент, Дж. А., Гордон, С., и Браун, Г. Д. (2004). Роль Дектина-1 в противогрибковом иммунитете. Крит. Преподобный Иммунол. 24, 193–203.

    Реферат PubMed | Академия Google

    Hommel, B., Mukaremera, L., Cordero, R.J.B., Coelho, C., Desjardins, C.A., Sturny-Leclere, A., et al. (2018). Формирование клеток титана у Cryptococcus neoformans точно регулируется условиями окружающей среды и модулируется положительными и отрицательными генетическими регуляторами. PLoS Pathog. 14:e1006982. doi: 10.1371/journal.ppat.1006982

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Канецуна, Ф., Карбонелл, Л.М., Морено, Р.Е., и Родригес, Дж. (1969). Состав клеточной стенки дрожжей и мицелиальных форм Paracoccidioides brasiliensis . J. Бактериол. 97, 1036–1041.

    Реферат PubMed | Академия Google

    Кобаяши Х., Оямада Х., Ивадате Н., Судзуки Х., Митобе Х., Такахаши, К., и др. (1998). Структурная и иммунохимическая характеристика остатка бета-1,2-связанного маннобиозилфосфата в маннане клеточной стенки Candida glabrata . Арх. микробиол. 169, 188–194. дои: 10.1007/s002030050559

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Конети, А., Линке, М.Дж., Браммер, Э., и Стивенс, Д.А. (2008). Уклонение от врожденных иммунных ответов: доказательства ингибирования связывающим маннозу лектином продукции фактора некроза опухоли альфа макрофагами в ответ на Blastomyces dermatitidis . Заразить. Иммун. 76, 994–1002. doi: 10.1128/iai.01185-07

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Кришнан Б.Р., Джеймс К.Д., Полови К., Брайант Б.Дж., Вайдья А., Смит С. и др. (2017). CD101, новый эхинокандин с исключительными свойствами стабильности и повышенной растворимостью в воде. Дж. Антибиот. 70, 130–135. doi: 10.1038/ja.2016.89

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Ларкин, Э.Л., Лонг Л., Ишам Н., Боррото-Эсода К., Барат С., Ангуло Д. и др. (2019). Новый ингибитор 1,3-бета-d-глюкана, ибрексафунгерп (ранее известный как SCY-078), проявляет мощную активность в среде с более низким значением рН Вульвовагинит . Антимикроб. Агенты Чемотер. 63:ААС.02611-18. doi: 10.1128/AAC.02611-18

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Lee, K.K., Maccallum, D.M., Jacobsen, M.D., Walker, L.A., Odds, F.C., Gow, N.A., et al.(2012). Повышенный уровень хитина в клеточной стенке у Candida albicans придает резистентность к эхинокандину in vivo. Антимикроб. Агенты Чемотер. 56, 208–217. doi: 10.1128/AAC.00683-11

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Лима-Нето, Р. Г., Бельтрао, Э. И., Оливейра, П. К., и Невес, Р. П. (2011). Адгезия Candida albicans и Candida parapsilosis к эпителиальным клеткам коррелирует с углеводами поверхности клеток грибов. Микозы 54, 23–29. doi: 10.1111/j.1439-0507.2009.01757.x

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Лю, Л., Тевари, Р. П., и Уильямсон, П. Р. (1999). Лакказа защищает Cryptococcus neoformans от противогрибковой активности альвеолярных макрофагов. Заразить. Иммун. 67, 6034–6039.

    Реферат PubMed | Академия Google

    Лурес, Ф.В., Ром, М., Ли, С.К., Сантос, Э., Ван, Дж.П., Шпехт, К.А., и соавт.(2015). Распознавание гиф Aspergillus fumigatus плазмоцитоидными дендритными клетками человека опосредуется дектином-2 и приводит к образованию внеклеточных ловушек. PLoS Pathog. 11:e1004643. doi: 10.1371/journal.ppat.1004643

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Малиджи, М.А., и Селитренников, С.П. (2005). Cryptococcus neoformans резистентность к эхинокандинам: активность (1,3)бета-глюкансинтазы чувствительна к эхинокандинам. Антимикроб. Агенты Чемотер. 49, 2851–2856. doi: 10.1128/aac.49.7.2851-2856.2005

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Maruvada, R., Zhu, L., Pearce, D., Zheng, Y., Perfect, J., Kwon-Chung, K.J., et al. (2012). Cryptococcus neoformans Фосфолипаза B1 активирует клетку-хозяина Rac1 для преодоления гематоэнцефалического барьера. Клеточная микробиология. 14, 1544–1553. doi: 10.1111/j.1462-5822.2012.01819.x

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Мазур, П., Morin, N., Baginsky, W., el-Sherbeini, M., Clemas, J.A., Nielsen, J.B., et al. (1995). Дифференциальная экспрессия и функция двух гомологичных субъединиц дрожжевой 1,3-бета-D-глюкансинтазы. Мол. Клеточная биол. 15, 5671–5681. doi: 10.1128/mcb.15.10.5671

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Медник, А. Дж., Носанчук, Дж. Д., и Касадевалл, А. (2005). Меланизация Cryptococcus neoformans влияет на воспалительные реакции легких при криптококковой инфекции. Заразить. Иммун. 73, 2012–2019. doi: 10.1128/iai.73.4.2012-2019.2005

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Mora-Montes, H.M., Netea, M.G., Ferwerda, G., Lenardon, M.D., Brown, G.D., Mistry, A.R., et al. (2011). Распознавание и блокирование клеток врожденного иммунитета хитином Candida albicans . Заразить. Иммун. 79, 1961–1970. doi: 10.1128/IAI.01282-10

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Мукаремера, Л., Ли, К.К., Вагенер, Дж., Визнер, Д.Л., Гоу, Н.А.Р., и Нильсен, К. (2018). Производство клеток титана в Cryptococcus neoformans изменяет форму клеточной стенки и состав капсулы во время инфекции. Сотовый серфинг. 1, 15–24. doi: 10.1016/j.tcsw.2017.12.001

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Манро, К.А., Винтер, К., Бьюкен, А., Генри, К., Беккер, Дж.М., Браун, А.Дж., и др. (2001). Chs1 Candida albicans представляет собой важную хитинсинтазу, необходимую для синтеза перегородки и целостности клеток. Мол. микробиол. 39, 1414–1426. doi: 10.1046/j.1365-2958.2001.02347.x

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Muszkieta, L., Aimanianda, V., Mellado, E., Gribaldo, S., Alcazar-Fuoli, L., Szewczyk, E., et al. (2014). Расшифровка роли семейств хитинсинтаз 1 и 2 в росте in vivo и in vitro Aspergillus fumigatus путем делеции множественных генов. Клеточная микробиология. 16, 1784–1805 гг.doi: 10.1111/cmi.12326

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Muszkieta, L., Fontaine, T., Beau, R., Mouyna, I., Vogt, M.S., Trow, J., et al. (2019). Гликозилфосфатидилинозитол-заякоренное семейство DFG необходимо для встраивания галактоманнана в ядро ​​бета-(1,3)-глюкан-хитина клеточной стенки Aspergillus fumigatus . mSphere 4:00397-19. doi: 10.1128/mSphere.00397-19

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Носанчук Ю.Д. и Касадеваль А. (2006). Влияние меланина на микробную вирулентность и клиническую устойчивость к противомикробным соединениям. Антимикроб. Агенты Чемотер. 50, 3519–3528. doi: 10.1128/aac.00545-06

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Noverr, M.C., Williamson, P.R., Fajardo, R.S., and Huffnagle, G.B. (2004). CNLAC1 необходим для внелегочной диссеминации Cryptococcus neoformans , но не для персистенции в легких. Заразить.Иммун. 72, 1693–1699. doi: 10.1128/iai.72.3.1693-1699.2004

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Okagaki, L.H., Strain, A.K., Nielsen, J.N., Charlier, C., Baltes, N.J., Chretien, F., et al. (2010). Морфология криптококковых клеток влияет на взаимодействие клеток-хозяев и патогенность. PLoS Pathog. 6:e1000953. doi: 10.1371/journal.ppat.1000953

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Пауловичова Л., Павловикова Е., Карелин А.А., Цветков Ю.Е., Нифантиев Н.Е. и Быстрицкий С. (2015). Иммунный клеточный ответ на разветвленные альфа-олигоманнозидные конъюгаты клеточной стенки Candida у мышей. J. Microbiol. Иммунол. Заразить. 48, 9–19. doi: 10.1016/j.jmii.2013.08.020

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Пазос, К., Морагес, доктор медицинских наук, Куиндос, Г., Понтон, Дж., и дель Паласио, А. (2006). Диагностический потенциал (1,3)-бета-D-глюкана и антител к зародышевой трубке Candida albicans для диагностики и терапевтического мониторинга инвазивного кандидоза у взрослых пациентов с нейтропенией. Ред. Ибероам. Микол. 23, 209–215.

    Реферат PubMed | Академия Google

    Пфуллер, Р., Гразер, Ю., Эрхард, М., и Грёневальд, М. (2011). Новый вид дрожжей, устойчивых к флуцитозину, Candida pseudoaaseri , вызывает заболевание у онкологического больного. Дж. Клин. микробиол. 49, 4195–4202. doi: 10.1128/JCM.05090-11

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Понтон, Дж. (2008). [Грибная клеточная стенка и механизм действия анидулафунгина]. Ред. Ибероам. Микол. 25, 78–82.

    Реферат PubMed | Академия Google

    Пулен, Д., и Жуо, Т. (2004). Candida albicans Гликаны клеточной стенки, рецепторы хозяина и ответы: элементы для решающих перекрестных помех. Курс. мнение микробиол. 7, 342–349. doi: 10.1016/j.mib.2004.06.011

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Кадота Х., Питон С.П., Иноуэ С.Б., Арисава М., Анраку Ю., Чжэн Ю., и другие. (1996). Идентификация дрожжевой Rho1p GTPase как регуляторной субъединицы 1,3-бета-глюкансинтазы. Наука 272, 279–281. doi: 10.1126/наука.272.5259.279

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Rajasingham, R., Smith, R.M., Park, B.J., Jarvis, J.N., Govender, N.P., Chiller, T.M., et al. (2017). Глобальное бремя ВИЧ-ассоциированного криптококкового менингита: обновленный анализ. Ланцет Заражение. Дис. 17, 873–881.doi: 10.1016/S1473-3099(17)30243-8

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Rambach, G., Blum, G., Latge, J.P., Fontaine, T., Heinekamp, ​​T., Hagleitner, M., et al. (2015). Идентификация компонентов поверхности Aspergillus fumigatus , которые опосредуют взаимодействие конидий и гиф с тромбоцитами человека. Дж. Заражение. Дис. 212, 1140–1149. doi: 10.1093/infdis/jiv191

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Раппли, К.А., Айссенберг, Л.Г., и Гольдман, В.Е. (2007). Histoplasma capsulatum альфа-(1,3)-глюкан блокирует врожденное иммунное распознавание бета-глюкановым рецептором. Проц. Натл. акад. науч. США 104, 1366–1370. doi: 10.1073/pnas.0609848104

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Риз, А. Дж., и Деринг, Т. Л. (2003). Альфа-1,3-глюкан клеточной стенки необходим для закрепления капсулы Cryptococcus neoformans . Мол. микробиол. 50, 1401–1409. doi: 10.1046/j.1365-2958.2003.03780.x

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Риз, А. Дж., Йонеда, А., Брегер, Дж. А., Бове, А., Лю, Х., Гриффит, К. Л., и соавт. (2007). Потеря альфа (1-3) глюкана клеточной стенки влияет на Cryptococcus neoformans от ультраструктуры до вирулентности. Мол. микробиол. 63, 1385–1398. doi: 10.1111/j.1365-2958.2006.05551.x

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Ривера, А., Hohl, T.M., Collins, N., Leiner, I., Gallegos, A., Saijo, S., et al. (2011). Дектин-1 диверсифицирует Т-клеточные ответы, специфичные для Aspergillus fumigatus , ингибируя дифференцировку Т-хелперов CD4 типа 1 Т-клеток. Дж. Экспл. Мед. 208, 369–381. doi: 10.1084/jem.20100906

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Робине, П., Байшелье, Ф., Фонтейн, Т., Пикард, К., Дебре, П., Вийяр, В., и др. (2014). Полисахаридный фактор вирулентности грибкового патогена человека индуцирует апоптоз нейтрофилов через NK-клетки. Дж. Иммунол. 192, 5332–5342. doi: 10.4049/jimmunol.1303180

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Роза, Л.Х., Алмейда Виейра Мде, Л., Сантьяго, И.Ф., и Роза, К.А. (2010). Сообщество эндофитных грибов, ассоциированное с двудольным растением Colobanthus quitnsis (Kunth) Bartl. ( Caryophyllaceae ) в Антарктиде. FEMS микробиол. Экол. 73, 178–189. doi: 10.1111/j.1574-6941.2010.00872.x

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Рубин-Бейерано, И., Abeijon, C., Magnelli, P., Grisafi, P., and Fink, G.R. (2007). Фагоцитоз нейтрофилов человека стимулируется уникальным компонентом клеточной стенки грибов. Микроб-хозяин клетки 2, 55–67. doi: 10.1016/j.chom.2007.06.002

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Сакагучи Н., Баба Т., Фукудзава М. и Оно С. (1993). Ультраструктурное исследование Cryptococcus neoformans методом быстрой заморозки и глубокого травления. Микопатология 121, 133–141.дои: 10.1007/bf01104068

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Салас, С. Д., Беннетт, Дж. Э., Квон-Чунг, К. Дж., Перфект, Дж. Р., и Уильямсон, П. Р. (1996). Влияние гена лакказы CNLAC1 на вирулентность Cryptococcus neoformans . Дж. Экспл. Мед. 184, 377–386. doi: 10.1084/jem.184.2.377

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Самар, Д., Килер, Дж. Б., и Клуттс, Дж. С.(2015). Идентификация и делеция Tft1, предполагаемой гликозилтрансферазы, необходимой для синтеза бета-1,3;1,4-глюкана клеточной стенки у Aspergillus fumigatus . PLoS One 10:e0117336. doi: 10.1371/journal.pone.0117336

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Сантанджело Р., Зеллнер Х., Соррелл Т., Уилсон К., Дональд К., Джорджевич Дж. и др. (2004). Роль внеклеточных фосфолипаз и мононуклеарных фагоцитов в распространении криптококкоза на мышиной модели. Заразить. Иммун. 72, 2229–2239. doi: 10.1128/iai.72.4.2229-2239.2004

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Савистовска-Шредер, Э. Т., Керридж, Д., и Перри, Х. (1984). Ингибирование эхинокандином 1,3-бета-D-глюкансинтазы из Candida albicans . ФЭБС Письмо. 173, 134–138. дои: 10.1016/0014-5793(84)81032-7

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Скорно, Б., Ангуло, Д., Боррото-Эсода, К., Ганнум, М., Пил, М., и Ринг, С. (2017). SCY-078 обладает фунгицидным действием против видов Candida в исследованиях времени уничтожения. Антимикроб. Агенты Чемотер. 61:ААС.01961-16. doi: 10.1128/AAC.01961-16

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Сем, X., Ле, Г. Т., Тан, А. С., Цо, Г., Юрьева, М., Ляо, В. В., и соавт. (2016). Воздействие бета-глюкана на клеточную стенку грибка тесно коррелирует с конкурентоспособностью видов Candida в желудочно-кишечном тракте мыши. Фронт. Заражение клетки. микробиол. 6:186. doi: 10.3389/fcimb.2016.00186

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Серрано-Гомес, Д., Домингес-Сото, А., Анкочеа, Дж., Хименес-Хеффернан, Дж. А., Леал, Дж. А., и Корби, А. Л. (2004). Специфичная для дендритных клеток молекула межклеточной адгезии, захватывающая нонинтегрин, опосредует связывание и интернализацию конидий Aspergillus fumigatus дендритными клетками и макрофагами. Дж. Иммунол. 173, 5635–5643. doi: 10.4049/jиммунол.173.9.5635

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Шибата, Н., Кобаяши, Х., и Судзуки, С. (2012). Иммунохимия патогенных дрожжей, видов Candida , с акцентом на маннан. Проц. Япония. акад. сер. Б физ. биол. науч. 88, 250–265. doi: 10.2183/pjab.88.250

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Шибата Н., Судзуки А., Кобаяши Х. и Окава Ю.(2007). Химическая структура маннана клеточной стенки Candida albicans серотипа А и ее различие у дрожжей и гиф. Биохим. J. 404, 365–372. дои: 10.1042/bj20070081

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Siafakas, A.R., Sorrell, T.C., Wright, L.C., Wilson, C., Larsen, M., Boadle, R., et al. (2007). Связанная с клеточной стенкой криптококковая фосфолипаза B1 является источником секретируемого фермента и детерминантой целостности клеточной стенки. Дж. Биол. хим. 282, 37508–37514. дои: 10.1074/jbc.m707

    0

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Сильва, М.Б., Томаз, Л., Маркес, А.Ф., Свидзинский, А.Е., Носанчук, Дж.Д., Касадевалл, А., и соавт. (2009). Устойчивость меланизированных дрожжевых клеток Paracoccidioides brasiliensis к противомикробным оксидантам и ингибирование фагоцитоза с помощью углеводов и моноклональных антител к CD18. Мем. Инст. Освальдо Круз. 104, 644–648.doi: 10.1590/s0074-0276200

    00019

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Сильва, С., Негри, М., Энрикес, М., Оливейра, Р., Уильямс, Д. В., и Азередо, Дж. (2012). Candida glabrata , Candida parapsilosis и Candida tropicalis : биология, эпидемиология, патогенность и устойчивость к противогрибковым препаратам. FEMS микробиол. Ред. 36, 288–305. doi: 10.1111/j.1574-6976.2011.00278.x

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Томпсон, Дж.R., Douglas, C.M., Li, W., Jue, C.K., Pramanik, B., Yuan, X., et al. (1999). Гомолог глюкансинтазы FKS1 в cryptococcus neoformans является единственной копией и кодирует важную функцию. J. Бактериол. 181, 444–453.

    Реферат PubMed | Академия Google

    Тох, Э. А., Окусу, М., Симидзу, К., Ямагути, М., Ишивада, Н., Ватанабэ, А., и другие. (2017). Создание, характеристика и использование мутантов Cryptococcus neoformans , чувствительных к микафунгину. Курс. Жене. 63, 1093–1104. doi: 10.1007/s00294-017-0713-8

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Торосантуччи А., Бромуро К., Кьяни П., Де Бернардис Ф., Берти Ф., Галли К. и др. (2005). Новая гликоконъюгированная вакцина против грибковых патогенов. Дж. Экспл. Мед. 202, 597–606. doi: 10.1084/jem.20050749

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Тревиано-Контадор, Н., де Оливейра, Х.С., Гарсия-Родас Р., Росси С.А., Льоренте И., Забальос А. и соавт. (2018). Cryptococcus neoformans может образовывать титаноподобные клетки in vitro в ответ на множественные сигналы. PLoS Pathog. 14:e1007007. doi: 10.1371/journal.ppat.1007007

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Цуй, К., Конг, Э.Ф., и Джабра-Ризк, Массачусетс (2016). Патогенез биопленки Candida albicans . Патог. Дис. 74:ftw018.

    Реферат PubMed | Академия Google

    Упадхья, Р., Lam, W.C., Maybruck, B., Specht, C.A., Levitz, S.M., and Lodge, JK (2016). Индукция защитного иммунитета к криптококковой инфекции у мышей с помощью убитого нагреванием штамма Cryptococcus neoformans с дефицитом хитозана. мБио 7:00547-16. doi: 10.1128/mBio.00547-16

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Volling, K., Thywissen, A., Brakhage, A.A., and Saluz, H.P. (2011). Фагоцитоз меланизированных конидий Aspergillus макрофагами оказывает цитопротекторное действие за счет устойчивой передачи сигналов PI3K/Akt. Клеточная микробиология. 13, 1130–1148. doi: 10.1111/j.1462-5822.2011.01605.x

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Вагенер, Дж., МакКаллум, Д.М., Браун, Г.Д., и Гоу, Н.А. (2017). Хитин Candida albicans повышает активность аргиназы-1 в макрофагах человека, оказывая влияние на антимикробные функции макрофагов. мБио 8:01820-16. doi: 10.1128/mBio.01820-16

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Уокер, Л.А., Гоу, Н.А., и Манро, Калифорния (2013). Повышенное содержание хитина снижает восприимчивость видов Candida к каспофунгину. Антимикроб. Агенты Чемотер. 57, 146–154. doi: 10.1128/AAC.01486-12

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Ван, Ю., Айсен, П., и Касадевалл, А. (1995). Cryptococcus neoformans меланин и вирулентность: механизм действия. Заразить. Иммун. 63, 3131–3136.

    Реферат PubMed | Академия Google

    Вернер, Дж.L., Metz, A.E., Horn, D., Schoeb, T.R., Hewitt, M.M., Schwiebert, L.M., et al. (2009). Необходимая роль рецептора бета-глюкана dectin-1 в защите легких от Aspergillus fumigatus . Дж. Иммунол. 182, 4938–4946. doi: 10.4049/jimmunol.0804250

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Видерхольд, Н. П., Локк, Дж. Б., Дарувала, П., и Бартизал, К. (2018). Резафунгин (CD101) демонстрирует мощную активность in vitro против Aspergillus , включая устойчивые к азолу изоляты Aspergillus fumigatus и криптические виды. J. Антимикроб. Чемотер. 73, 3063–3067. doi: 10.1093/jac/dky280

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Wiesner, D.L., Specht, C.A., Lee, C.K., Smith, K.D., Mukaremera, L., Lee, S.T., et al. (2015). Распознавание хитина с помощью хитотриозидазы способствует патологическому ответу хелперных Т-клеток типа 2 на криптококковую инфекцию. PLoS Pathog. 11:e1004701. doi: 10.1371/journal.ppat.1004701

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Залар, П., Новак, М., де Хоог, Г.С., и Гунде-Симерман, Н. (2011). Посудомоечные машины – искусственная экологическая ниша, в которой обитают условно-патогенные грибковые патогены человека. Грибковый биол. 115, 997–1007. doi: 10.1016/j.funbio.2011.04.007

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Сарагоса, О., Крисман, С.Дж., Кастелли, М.В., Фразес, С., Куэнка-Эстрелла, М., Родригес-Тудела, Дж.Л., и др. (2008). Увеличение капсулы у Cryptococcus neoformans придает устойчивость к окислительному стрессу, что указывает на механизм внутриклеточного выживания. Клеточная микробиология. 10, 2043–2057 гг. doi: 10.1111/j.1462-5822.2008.01186.x

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Сарагоса, О., Гарсия-Родас, Р., Носанчук, Дж. Д., Куэнка-Эстрелла, М., Родригес-Тудела, Дж. Л., и Касадевалл, А. (2010). Гигантизм грибковых клеток при инфекции млекопитающих. PLoS Pathog. 6:e1000945. doi: 10.1371/journal.ppat.1000945

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Сарагоса, О., Родригес, М.Л., Де Хесус, М., Фрейз, С., Дадачова, Э., и Касадевалл, А. (2009). Капсула грибкового возбудителя Cryptococcus neoformans . Доп. заявл. микробиол. 68, 133–216. дои: 10.1016/S0065-2164(09)01204-0

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Чжан, М. Х., Лупан, Д. М., и Козел, Т. Р. (1997). Маннан-специфические антитела иммуноглобулина G в нормальной сыворотке человека опосредуют классический путь инициации связывания С3 с Candida albicans . Заразить. Иммун. 65, 3822–3827.

    Реферат PubMed | Академия Google

    Новые противогрибковые препараты и лекарственная устойчивость

    Front Microbiol. 2019; 10: 2573.

    Soraia L. l. lima

    1

    1 MALDINATORIOIO Especial de Micoldia, Дисциплина де infectologia, Universidade Federal de São Paulo, Сан-Паулу, Бразилия

    Arnaldo L. Colombo

    1 Laboratório Especial De Micoldia, Disciplina de Infectologia, Федеральный университет Сан-Паулу, Сан-Паулу, Бразилия

    João N.de Almeida Junior

    2 Центральный лабораторный отдел, Клиника медицинского факультета Университета Сан-Паулу, Сан-Паулу, Бразилия

    1 Особая лаборатория микологии, Дисциплина инфекционных заболеваний Сан-Паулу, Федеральный университет Сан-Паулу Пауло, Бразилия

    2 Центральный лабораторный отдел, Больница das Clínicas da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo, Сан-Паулу, Бразилия

    Под редакцией: Джошуа Д. Носанчук, Медицинский колледж Альберта Эйнштейна, США

    Отредактировано автор: Джениэл Э.Нетт, Университет Висконсин-Мэдисон, США; Эмма Камачо, Университет Джона Хопкинса, США

    Эта статья была отправлена ​​в Fungi and their Interactions, раздел журнала Frontiers in Microbiology

    Поступила в редакцию 19 августа 2019 г.; Принято 23 октября 2019 г.

    Copyright © 2019 Lima, Colombo and de Almeida Junior.

    Это статья с открытым доступом, распространяемая на условиях лицензии Creative Commons Attribution License (CC BY). Использование, распространение или воспроизведение на других форумах разрешено при условии указания оригинального автора(ов) и владельца(ей) авторских прав и при условии цитирования оригинальной публикации в этом журнале в соответствии с общепринятой академической практикой.Запрещается использование, распространение или воспроизведение без соблюдения этих условий.

    Эта статья была процитирована другими статьями в PMC.

    Abstract

    Клеточная стенка является важным компонентом гомеостаза грибов. Отсутствие покрывающей стенки в клетках человека делает этот компонент привлекательной мишенью для разработки противогрибковых средств. Среда хозяина и противогрибковый стресс могут привести к модификации клеточной стенки, связанной с лекарственной устойчивостью. Противогрибковые препараты, воздействующие на клеточную стенку, в том числе новый ингибитор β-D-глюкансинтазы ибрексафунгерп и ингибитор якорного пути гликозил-фосфатидил-инозитола (ГФИ) фосманогепикс, являются перспективным оружием против противогрибковой резистентности.Фосманогепикс проявляет сильную активность in vitro в отношении видов с множественной лекарственной устойчивостью Candida auris , Fusarium solani и Lomentospora prolificans. Альтернативные источники углерода в очаге инфекции изменяют состав β-D-глюкана и хитина клеточной стенки, что приводит к резистентности к эхинокандину и амфотерицину. Популяции Candida , пережившие воздействие эхинокандина, развивают толерантность и демонстрируют высокое содержание хитина в клеточной стенке, в то время как виды грибов, такие как Aspergillus flavus с более высоким содержанием β-D-глюкана, могут проявлять устойчивость к амфотерицину.Поэтому понимание динамики грибковых клеток стало важным не только для взаимодействия между хозяином и грибком, но и для лечения грибковых инфекций. В этом обзоре обобщены недавние результаты, касающиеся противогрибковой терапии и развития резистентности, связанной с клеточной стенкой грибков наиболее важных патогенных видов человека.

    Ключевые слова: клеточная стенка грибов, противогрибковые препараты, терапия, устойчивость, ингибиторы 1,3-β-D-глюкансинтазы, ибрексафунгерп, маногепикс

    Введение

    Клеточная стенка является важным компонентом гомеостаза грибковых клеток , 2007; Гоу и др., 2017). Он также имеет двойной процесс взаимодействия с окружающей средой, который либо отрицательно, либо положительно влияет на выживаемость грибковых клеток. Антигены клеточной стенки индуцируют иммунное распознавание инфицированным хозяином и способствуют фагоцитозу (Roy and Klein, 2012). Некоторые антигены, называемые патоген-ассоциированными молекулярными паттернами (PAMP), распознаются широким спектром рецепторов распознавания паттернов (PRR) на поверхности клетки-хозяина (Roy and Klein, 2012). И наоборот, экологические стрессы приводят к модификациям клеточных стенок, которые препятствуют иммунному распознаванию (Gow et al., 2017).

    Составляя примерно 40% от общего объема грибковой клетки, клеточная стенка гриба образует прочную и прочную сердцевинную основу, к которой различные белки и поверхностные компоненты с волокнистыми и гелеобразными углеводами образуют полимеры, образуя прочную, но гибкую структуру ( Манро, 2013; Гоу и др., 2017). Большинство клеточных стенок имеют два слоя: (1) внутренний слой, включающий относительно консервативный структурный скелет, и (2) внешний слой, который более гетерогенен и имеет видоспецифические особенности (Gow et al., 2017). Внутренняя клеточная стенка представляет собой несущий структурный компонент стенки, который сопротивляется существенному внутреннему гидростатическому давлению, оказываемому на стенку цитоплазмой и мембраной (Latgé, 2007). Этот слой включает хитин и глюкан, в которых 50–60% сухой массы клеточной стенки составляет β-(1–3)-глюкан. Структура внешнего слоя состоит из сильно маннозилированных гликопротеинов с модифицированными N- и O-связанными олигосахаридами. Структура этих боковых цепей олигосахаридов различается у разных видов грибов (Shibata et al., 1995; Хобсон и др., 2004).

    Поскольку клетки человека не имеют покрывающей стенки, противогрибковые препараты, нацеленные на выработку компонентов клеточной стенки, более селективны и менее токсичны по сравнению с производными азола и амфотерицином В (Patil and Majumdar, 2017). Эхинокандины были первыми системными противогрибковыми средствами, нацеленными на клеточную стенку, нарушая выработку глюканов (Patil and Majumdar, 2017). В отношении инвазивного кандидоза эхинокандины стали важным шагом вперед, позволившим снизить смертность, связанную с этими инфекциями, с низкой токсичностью и малым взаимодействием с другими препаратами (Mora-Duarte et al., 2002; Паппас и др., 2016). Однако внутренняя и приобретенная устойчивость к эхинокандинам ограничивает его полезность, что приводит к исследованиям других мишеней в клеточной стенке грибов для противогрибковой терапии (Hasim and Coleman, 2019).

    Динамика клеточной стенки может играть важную роль в развитии резистентности к противогрибковым препаратам, и в связи с этим появляются интересные концепции. Модификации структуры и состава клеточных стенок были исследованы в изолятах Candida и Aspergillus , обладающих устойчивостью к противогрибковым препаратам (Seo et al., 1999; Меса-Аранго и др., 2016). В устойчивых к эхинокандину изолятах Candida описаны модификации поперечных связей β-1,3- и β-1,6-глюканов и более высокое содержание хитина (Perlin, 2015), в то время как более высокий состав β-D-глюкана был обнаружен в изолятов Aspergillus flavus , устойчивых к амфотерицину-В (Seo et al., 1999).

    В этой рукописи мы рассматриваем клеточную стенку грибка как мишень для противогрибковой терапии и, одновременно, посещаем модификации клеточной стенки, которые могут быть связаны с устойчивостью к противомикробным препаратам.

    Противогрибковые препараты, воздействующие на клеточную стенку грибка

    Противогрибковые препараты, воздействующие на клеточную стенку, были разработаны в последние годы (Walker et al., 2011; Chaudhary et al., 2013; Mutz and Roemer, 2016; Hasim and Coleman, 2019). Большинство этих препаратов действуют путем ингибирования β-D-глюкансинтазы, но также разрабатываются ингибиторы якорного пути хитинсинтазы и гликозилфосфатидилинозитол (GPI) (11).

    (A) Грибковая клеточная стенка и мишени, которые были исследованы на предмет развития противогрибкового действия: β-D-глюкансинтаза, хитинсинтаза и фермент Gwt1 из пути якоря GPI; (B) Воздействие эхинокандина вызывает стресс клеточной стенки за счет ингибирования β-D-глюкансинтазы.Протеинкиназа C (PKC), высокоосмолярный глицериновый ответ (HOG) и пути Ca +2 -кальциневрина участвуют в ответе на повреждение клеточной стенки и гиперстимуляцию хитинсинтазы. Кальциневрин является белком-клиентом для шаперона Hsp90, а генетический компромисс гена HSP90 снижает механизм толерантности.

    Ингибиторы 1,3-β-D-глюкансинтазы

    Эхинокандины

    Эхинокандины были впервые описаны в 1970-х годах как антибиотические полипептиды, полученные из Aspergillus nidulans (Nyfeler and Keller-Schierlein, 1974).Эти молекулы в основном представляют собой гексапептидные антибиотики с N-связанными цепями ацильных жирных кислот, которые интеркалируют с фосфолипидным слоем клеточной мембраны (Denning, 2003). Этот противогрибковый класс ингибирует β-D-глюкансинтазу, что приводит к уменьшению β-D-глюканов в клеточной стенке после неконкурентного связывания с Fksp-субъединицей фермента (Hector, 1993; Denning, 2003; Aguilar-Zapata). и др., 2015; Перлин, 2015; Патил и Маджумдар, 2017).

    Комплекс β-D-глюкансинтазы клеточной стенки грибов состоит из двух основных субъединиц: Fks1p и Rho1p (Mazur and Baginsky, 1996; Aguilar-Zapata et al., 2015). Fks1p представляет собой каталитическую субъединицу, ответственную за образование гликозидных связей (Schimoler-O’Rourke et al., 2003), тогда как Rho1p представляет собой Ras-подобный GTP-связывающий белок, который регулирует активность β-D-глюкансинтазы (Qadota et al. ., 1996).

    Ингибирование β-D-глюкансинтазы приводит к гибели клеток видов Candida , в то время как эхинокандины модифицируют морфогенез гиф и оказывают фунгистатическое действие против видов Aspergillus (Bowman et al., 2002).И наоборот, виды, принадлежащие к порядку Mucorales и базидиомицетам, по своей природе устойчивы к этому классу противогрибковых средств (Espinel-Ingroff, 2003; Aguilar-Zapata et al., 2015).

    В настоящее время FDA одобрено три эхинокандина для лечения инвазивных грибковых инфекций: каспофунгин, анидулафунгин и микафунгин (Johnson and Perfect, 2003; Rüping et al., 2008; Pappas et al., 2016). По сравнению с другими противогрибковыми классами эхинокандины проявляют меньшую токсичность для почек или печени, меньшее лекарственное взаимодействие и выведение преимущественно печенью, не требуя коррекции дозы при почечной недостаточности или диализе (Aguilar-Zapata et al., 2015). Однако эхинокандины имеют фармакокинетические ограничения, такие как низкая биодоступность при пероральном введении, высокое связывание с белками и низкое проникновение в центральную нервную систему (ЦНС) (Wiederhold and Lewis, 2003). Новые ингибиторы глюкансинтазы с лучшими фармакокинеическими профилями, в том числе пероральные формы с высокой биодоступностью, находятся в стадии изучения (Davis et al., 2019).

    Резафунгин (CD101, ранее SP3025, Cidara Therapeutics, Сан-Диего, Калифорния, США), эхинокандин нового поколения, в настоящее время проходит Фазу 3 клинических испытаний для лечения кандидемии и инвазивного кандидоза 1 .Это противогрибковое средство является структурным аналогом анидулафунгина, но с холиновой частью, заменяющей полуаминальную группу в положении орнитина C5, что приводит к образованию стабильного соединения с длительным периодом полувыведения (Sandison et al., 2017). Он хорошо растворим в водных системах и имеет период полувыведения более 130 часов у человека по сравнению с 24, 9–11, 10–17 часами периодов полувыведения анидулафунгина, каспофунгина и микафунгина соответственно (Kofla and Ruhnke, 2011). ; Сэндисон и др., 2017). Длительный период полувыведения резафунгина позволяет применять еженедельный режим дозирования (Sandison et al., 2017; Софьян и др., 2018).

    Резафунгин обладает мощной активностью in vitro против обычных видов Candida и Aspergillus (Wiederhold et al., 2018; Arendrup et al., 2018a,b). Кроме того, этот противогрибковый препарат обладает сильной противогрибковой активностью in vitro в отношении потенциально полирезистентных видов C. auris (Berkow and Lockhart, 2018). Более того, in vivo эффективность резафунгина в моделях диссеминированного кандидоза у мышей с нейтропенией была продемонстрирована против C.albicans, C. glabrata, C. parapsilosis (Lepak et al., 2018) и C. auris (Hager et al., 2018a).

    Тритерпеноиды

    Класс тритерпеноидов представлен ибрексафунгерпом (SCY-078, ранее MK-3118), новым полусинтетическим производным полуацетального тритерпенового гликозида энфумафунгина (Synexis Inc., Джерси-Сити, Нью-Джерси, США) (Pfaller et al., 2017; Wring et al., 2017; Davis et al., 2019). Это ингибитор β-D-глюкансинтазы с сходными, но не идентичными сайтами связывания с эхинокандинами в каталитических областях Fks1p и Fks2p фермента (Walker et al., 2011; Хименес-Ортигоса и др., 2017). Он имеет высокое связывание с белками и хорошее проникновение в ткани, хотя, как и эхинокандины, плохо проникает в ЦНС (Davis et al., 2019). Фармакокинетическое преимущество этого нового противогрибкового средства заключается в его хорошей пероральной биодоступности (Walker et al., 2011).

    Ibrexafungerp продемонстрировал хорошую активность in vitro против соответствующих грибковых патогенов, таких как Candida spp., включая полирезистентные C. glabrata (Pfaller et al., 2013, 2017; Jiménez-Ortigosa et al., 2017), штаммы-продуценты биопленки (Marcos-Zambrano et al., 2017b) и C. auris (Larkin et al., 2017). Примечательно, что устойчивые к эхинокандину штаммы Candida , несущие мутации горячей точки в Fksp, могут сохранять чувствительность к ибрексафунгерпу (Pfaller et al., 2017). Более глубокое исследование, анализирующее штамма C. glabrata с резистентностью к эхинокандину и чувствительностью к ибрексафунгерпу, показало, что ибрексафунгерп имеет лишь частичное перекрывание сайтов связывания эхинокандинов Fksp в ферменте β-D-глюкансинтазы (Jiménez-Ortigosa et al., 2017). В отношении клинически значимых видов Aspergillus ибрексафунгерп также продемонстрировал высокую активность in vitro (Davis et al., 2019). Кроме того, комбинация ибрексафунгерпа с вориконазолом или амфотерицином В продемонстрировала синергизм против штаммов A. fumigatus дикого типа (Ghannoum et al., 2018). Следует отметить, что ибрексафунгерп проявлял некоторую противогрибковую активность в отношении мультирезистентной плесени Lomentospora prolificans (Lamoth and Alexander, 2015) и высокоактивен в отношении Paecilomyces variotii (Lamoth and Alexander, 2015).Однако ибрексафунгерп малоактивен в отношении Mucorales spp., Fusarium spp. и Purpureocillium lilacinum (Lamoth and Alexander, 2015). Активность ибрексафунгерпа in vitro обобщена в .

    Таблица 1

    In vitro активность антагонистов основной клеточной стенки.

    92 565

    аспергилл дымящийся
    Виды Противогрибковые класс
    β-D-глюкан ингибиторы синтазы хитина синтазы ингибиторы GPI ингибиторы анкерный проводящих путей
    Эхинокандины Enfumafungin производные (Ibrexafungerp) Nikkomycin Z Fosmanogepix
    Кандид видов Strong сильных Бедные, но сильный синергизм с эхинокандинами сильных
    Кандида Auris Strong Strong Не оценены Сильный
    +

    Сильные Сильная с синергизмом с азолами и амфотерицином B Бедного Strong
    Fusarium видов бедных бедные Р ООК Strong
    Lomentospora prolificans Бедный Умеренный Плохой Сильные
    Coccidioides видов Умеренный 1 Не оцениваемые Умеренный и синергизм с эхинокандинов Сильные
    Blastomyces dermatitidis Бедный Не оцененную Умеренный Не оценено
    Histoplasma capsulatum Плохо Не оценено Умеренный Не оценено
    Cryptococcus Виды Бедный Бедные Бедные Бедные, но с сильным синергизмом с азолами прочные

    В экспериментах с временным временем Ibrexafungerp показал в основном фунгицидную активность против Candida albicans и не-albicans изолятов (Scorneaux et al., 2017). Для in vivo мышиных моделей инвазивного кандидоза, вызванного C. albicans , C. glabrata и C. parapsilosis , этот препарат показал сходное зависимое от концентрации уничтожение трех видов Candida (Lepak et al., 2015).

    Этот противогрибковый препарат в настоящее время проходит клинические испытания для лечения вульвовагинального кандидоза (фаза 3; https://clinicaltrials.gov/ct2/show/{«type»:»clinical-trial»,»attrs»:{«text» :»NCT03987620″,»term_id»:»NCT03987620″}}NCT03987620), при инвазивном аспергиллезе в комбинации с вориконазолом (фаза 2; https://clinicaltrials.gov/ct2/show/{«type»:»clinical-trial»,»attrs»:{«text»:»NCT03672292″,»term_id»:»NCT03672292″}}NCT03672292), инвазивный кандидоз и кандидоз слизистых оболочек (фаза 3; https://clinicaltrials.gov/ct2/show/{«type»:»clinical-trial»,»attrs»:{«text»:»NCT03059992″,»term_id»:»NCT03059992″}}NCT03059992), и для инвазивный кандидоз, вызванный C. auris (фаза 3; https://clinicaltrials.gov/ct2/show/{«type»:»clinical-trial»,»attrs»:{«text»:»NCT03363841″,» term_id»:»NCT03363841″}}NCT03363841).

    Ингибиторы хитинсинтазы

    Хитин является важным компонентом клеточной стенки грибов, и соединения, влияющие на его синтез, были исследованы в качестве противогрибковых средств, таких как никкомицины, полиоксины и плагиохин (Chaudhary et al., 2013).

    Никкомицины представляют собой пептидилнуклеозидные агенты, которые конкурентно ингибируют хитинсинтазу ( CHS ). Никкомицин Z обладает активностью in vitro в отношении C. parapsilosis, Coccidioides immitis и Blastomyces dermatitidis (Hector et al., 1990), но его полезность зависит от синергизма с эхинокандинами в отношении C. albicans, A. fumigatus, и C. immitis (Chiou et al., 2001; Cheung and Hui, 2017). Одно исследование с использованием мышиной модели инвазивного кандидоза показало, что никкомицин Z плюс эхинокандины были эффективны для лечения инфекций, вызванных устойчивыми к эхинокандину C.albicans (Cheung and Hui, 2017).

    Гликозилфосфатидилинозитол Ингибиторы якорного пути

    Гликозилфосфатидилинозитол (ГФИ) является компонентом клеточной стенки эукариот и синтезируется в эндоплазматическом ретикулуме консервативным путем (Ikezawa, 2002). Гликолипиды GPI прикрепляют различные белки к клеточной стенке и необходимы для ее целостности (Yadav and Khan, 2018).

    Противогрибковые препараты, воздействующие на путь синтеза якоря GPI, были разработаны за последние 15 лет (Tsukahara et al., 2003; Мутц и Ремер, 2016). Одной из мишеней пути синтеза якоря GPI является белок Gwt1 (GPI-заякоренный белок переноса 1), инозитол-ацилтрансфераза, которая катализирует ацилирование инозитола (Tsukahara et al., 2003; Hata et al., 2011). Ингибирование Gwt1 нарушает целостность клеточной стенки, продукцию биопленки, образование зародышевой трубки и вызывает серьезные дефекты роста грибов (Yadav and Khan, 2018). Было показано, что у C. albicans и Saccharomyces cerevisiae ингибирование Gwt1 ставит под угрозу созревание и стабилизацию GPI-заякоренных маннопротеинов (McLellan et al., 2012). Первым соединением, использованным для ингибирования фермента Gwt1, была молекула 1-(4-бутилбензил)изохинолина (BIQ), описанная Tsukahara et al. (2003).

    Исследовательскими лабораториями Tsukuba компании Eisai Co., Ltd. (Ибараки, Япония) из молекулы BIQ было создано новое соединение с более высокой противогрибковой активностью, APX001A или manogepix (ранее E1210) (Hata et al., 2011) . Позже компания Amplix Pharmaceuticals Inc. (Сан-Диего, Калифорния, США) разработала N-фосфонооксиметилпролекарство фосманогепикс (APX001, ранее E1211) для перорального и внутривенного введения.Пролекарство метаболизируется фосфатазами и превращается в маногепикс (APX001A, ранее E1210), который ингибирует Gwt1, но не человеческий гомолог Pig-W (Watanabe et al., 2012; Wiederhold et al., 2019). Пероральная форма фосманогепикса показала хорошую биодоступность в экспериментах на мышах (Zhao et al., 2018).

    Активность in vitro маногепикса исследовалась в отношении дрожжей и плесени (Miyazaki et al., 2011; Castanheira et al., 2012). Низкие минимальные ингибирующие концентрации (МИК) этого нового противогрибкового средства были обнаружены в отношении C.albicans, C. tropicalis, C. glabrata, C. parapsilosis, C. lusitaniae, C. kefyr, (Miyazaki et al., 2011; Pfaller et al., 2019), а также против полирезистентных C. auris (Hager et al., 2018a) и устойчивый к эхинокандину C. glabrata (Pfaller et al., 2019). Однако результаты in vitro против C. krusei и C. norvegensis были описаны как плохие (Arendrup et al., 2018a). Сильная активность in vitro маногепикса также была отмечена в отношении штаммов Cryptococcus neoformans и Cryptococcus gattii (Shaw et al., 2018; Пфаллер и др., 2019). Относительно активности in vitro в отношении плесени, низкие МИК в отношении видов Aspergillus видов из секции Fumigati, Flavi, Terrei и Nigri (Miyazaki et al., 2011; Pfaller et al., 2019), видов Purpureocillium lilacinum, Cladosporium видов , Phialophora вида, Rhinocladiella aquaspersa, Fonsecaea pedrosoi (Miyazaki et al., 2011), Scedosporium apiospermum и Scedosporium aurantiacum (Castanheira et al., 2012), а также против видов с множественной лекарственной устойчивостью Fusarium solani и L. prolificans (Castanheira et al., 2012). Активность маногепикса in vitro обобщена в .

    Активность in vivo маногепикса/фосманогепикса была также исследована на мышиных моделях диссеминированного кандидоза, аспергиллеза, фузариоза (Hata et al., 2011; Hager et al., 2018b) и пневмонии Coccidioides immitis (Viriyakosol и др., 2019).В мышиной модели диссеминированной инфекции C. albicans он показал эффективность, аналогичную каспофунгину, флуконазолу и липосомальному амфотерицину B (Hata et al., 2011). В другом исследовании сравнивали эффективность маногепикса/фосманогепикса и анидулафунгина для лечения мышей с диссеминированной инфекцией C. auris и обнаружили более высокие показатели выживаемости в группе, получавшей ингибитор Gwt1 (Hager et al., 2018b). В мышиной модели инвазивной инфекции Aspergillus flavus мыши, получавшие этот новый противогрибковый препарат, имели аналогичные показатели выживаемости по сравнению с группами, получавшими либо вориконазол, либо каспофунгин (Hata et al., 2011). В том же исследовании мыши, инфицированные F. solani , показали более высокую выживаемость при лечении фосманогэпиксом в дозе 20 мг/кг по сравнению с контрольной группой без противогрибковой терапии (Hata et al., 2011).

    В настоящее время проводится фаза 2 открытого исследования фосманогепикс для лечения кандидемии первой линии 2 .

    Модификации клеточной стенки грибов и резистентность к противогрибковым препаратам

    Модификации в строении клеточной стенки грибов появляются после стрессов, вызванных микроокружением хозяина и противогрибковым воздействием (Ene et al., 2012; Перлин, 2015; Меса-Аранго и др., 2016).

    Исследования in vitro показали, что в условиях, имитирующих микроокружение хозяина в месте заражения, у дрожжевых клеток могут развиться модификации стенок и устойчивость к противогрибковым препаратам (Ene et al., 2012; Brown et al., 2014). Клетки C. albicans , выращенные в сыворотке (<0,1% глюкозы), обнаруживают серьезные изменения в архитектуре клеточной стенки с уменьшением длины маннановых цепей, а также содержания хитина и β-глюкана (Ene et al., 2012). Более того, мешающие росту условия с альтернативными источниками углерода, такими как лактат, изменяют биосинтез клеточной стенки, что приводит к образованию более тонкой, но более жесткой внутренней клеточной стенки (Ene et al., 2012). Эти клетки C. albicans с реконструированной клеточной стенкой становятся устойчивыми к амфотерицину B (AMB) и каспофунгину (Ene et al., 2012). Аналогичные результаты были продемонстрированы для штаммов C. glabrata , которые росли в альтернативной углеродной микросреде, обнаруживая измененную архитектуру клеточной стенки с более низким содержанием хитина и β-глюкана и с увеличенным наружным слоем маннана (Chew et al., 2019). Эти клетки C. glabrata также были устойчивы к АТ-В при выращивании в лактате или олеате (Chew et al., 2019).

    Промежуточным этапом устойчивости к противогрибковым препаратам является развитие толерантности (Perlin, 2015). Клетки, пережившие воздействие лекарств, могут реагировать на отбор и развивать устойчивость (Perlin, 2015). Воздействие эхинокандина вызывает стресс клеточной стенки за счет ингибирования синтеза β-D-глюкана, который запускает адаптивные клеточные факторы, стимулирующие выработку хитина (Walker et al., 2008, 2010). Протеинкиназа C (PKC), высокоосмолярный глицериновый ответ (HOG) и пути Ca +2 -кальциневрина участвуют в ответе на повреждение клеточной стенки и синтезе хитина (; Lagorce et al., 2003; Bermejo et al. , 2008; Walker et al., 2008; Fortwendel et al., 2009). Шаперон Hsp90 является еще одним важным компонентом толерантности к эхинокандинам после стресса клеточной стенки (Singh et al., 2009; O’Meara et al., 2017). Кальциневрин является белком-клиентом для шаперона Hsp90, и генетический компромисс гена HSP90 снижает механизм толерантности у C.albicans (Singh et al., 2009), C. glabrata (Singh-Babak et al., 2012) и Aspergillus fumigatus (Lamoth et al., 2014). Другое выражение грибковых адаптационных механизмов, вызванных противогрибковым стрессом, называется пародоксальным эффектом, который представляет собой восстановление роста грибов после воздействия противогрибковых препаратов при увеличении концентрации выше определенного порога (Aruanno et al., 2019). Об этом явлении сообщалось у Candida spp. и Aspergillus spp.после воздействия эхинокандинов, преимущественно каспофунгина (Rueda et al., 2014; Marcos-Zambrano et al., 2017a; Aruanno et al., 2019). Подобно механизму толерантности, парадоксальный эффект связан с внутриклеточными сигнальными путями, которые приводят к ремоделированию клеточной стенки с увеличением количества хитина и потерей содержания β-D-глюкана (Aruanno et al., 2019). У A. fumigatus воздействие каспофунгина может также привести к увеличению продукции активных форм кислорода (АФК) и к модификации липидного микроокружения, окружающего β-D-глюкансинтазу, что приводит к резистентности к эхинокандинам (Satish et al., 2019).

    У C. albicans другие релевантные компоненты толерантности к эхинокандину могут быть расположены на хромосоме 5 (Ch5), поскольку некоторые толерантные мутанты обнаруживали либо моносомию Ch5, либо комбинированную моносомию левого плеча и трисомию правого плеча Ch5 (Янг и др., 2017). В конце концов, постоянное воздействие эхинокандина приводит к мутациям FKS , и появляются организмы с выраженной и стабильной устойчивостью с высоким содержанием хитина в клеточной стенке (Walker et al., 2013; Perlin, 2015). мутации FKS у видов Candida и резистентность к эхинокандину были подробно рассмотрены в другом месте (Walker et al., 2010; Perlin, 2015).

    Устойчивость к AMB может быть объяснена несколькими механизмами, среди которых модификации архитектуры клеточной стенки (Seo et al., 1999; Mesa-Arango et al., 2016). Изоляты Aspergillus flavus с резистентностью к AMB были связаны с инвазивными грибковыми инфекциями с неблагоприятным прогнозом у пациентов с нейтропенией (Koss et al., 2002; Хадрич и др., 2012). Seo, Akiyoshi и Ohnishi продемонстрировали, что in vitro устойчивых к АМВ мутантных штаммов A. flavus имеют одинаковое содержание стеролов в клеточной мембране по сравнению с чувствительными штаммами (Seo et al., 1999). Наоборот, клеточная стенка устойчивых мутантов содержала больше 1,3-β-D-глюкана по сравнению с чувствительными штаммами (Seo et al., 1999). Авторы предполагают, что более высокое содержание глюканов, обнаруженное у резистентных мутантов, помогает адсорбировать АМВ, что затрудняет проникновение противогрибкового препарата на клеточную мембрану (Seo et al., 1999). Сравнение биопленочных (АТВ-устойчивых) и планктонных (АТВ-чувствительных) клеток C. albicans показало, что клеточная стенка выращенных в биопленке изолятов толще и содержит больше β-1,3-глюканов (Nett et al., 2007). У C. tropicalis резистентность к AMB была связана с несколькими потенциальными механизмами, такими как повышение активности каталазы, изменения митохондриального потенциала, низкое накопление активных форм кислорода и дефицит эргостерола на клеточной мембране (Forastiero et al., 2013; Меса-Аранго и др., 2014). Совсем недавно модификации клеточных стенок также были обнаружены у устойчивых к АТВ изолятов C. tropicalis (Mesa-Arango et al., 2016). Устойчивые к АМВ изоляты показали более толстые клеточные стенки и больший объем по сравнению с восприимчивыми изолятами (Mesa-Arango et al., 2016). Кроме того, у этих устойчивых к АМВ организмов в 2–3 раза повышен уровень β-1,3-глюканов в клеточной стенке (Mesa-Arango et al., 2016).

    Выводы и перспективы

    Недавние достижения в изучении клеточной стенки грибов открыли двери для новых методов лечения грибковых инфекций и помогли лучше понять механизмы устойчивости к противогрибковым препаратам.Новые противогрибковые препараты, нацеленные на клеточную стенку, демонстрируют лучшую безопасность и фармакокинетические/фармакокинетические профили, чем доступные токсичные молекулы полиенов и производных азола. Новый ингибитор β-D-глюкансинтазы ибрексафунгерп обладает мощной активностью in vitro в отношении патогенов с множественной лекарственной устойчивостью, таких как резистентные к эхинокандину виды C. glabrata , C. auris, и виды Aspergillus .

    Ингибиторы глюкансинтазы, такие как никкомицин Z, обладают сильным синергизмом с эхинокандинами и могут быть полезны для лечения инфекций, устойчивых к эхинокандинам Candida , и рефрактерного аспергиллеза.

    Ингибиторы якорного пути GPI APX001/APX001A имеют хорошие фармакокинетические профили и высокую активность in vitro в отношении нескольких патогенных видов грибов, включая полирезистентные C. auris, F. solani, и L. prolificans . Это делает эти препараты наиболее многообещающими противогрибковыми препаратами, которые будут запущены в производство в будущем.

    Микроокружение в очаге инфекции приводит к модификации клеточной стенки грибка, что может привести к резистентности к противогрибковым препаратам.Стресс клеточной стенки, вызванный воздействием эхинокандина, приводит к появлению толерантных клеток с высоким содержанием хитина. Пути PKC, HOG и Ca +2 -кальциневрина, а также шаперон Hsp90 являются ключевыми компонентами феномена противогрибковой толерантности и должны быть изучены в качестве будущих мишеней для противогрибковой терапии. Несколько устойчивых к АМВ A. flavus и C. tropicalis показали более высокое содержание глюканов в клеточной стенке, но необходимы дальнейшие исследования, анализирующие модификации клеточной стенки и устойчивость к АМВ, чтобы усилить эту корреляцию.

    Авторские взносы

    SL, AC и JA задумали рукопись. SL и JA провели обзор литературы. SL, AC и JA написали рукопись. AC пересмотрел рукопись.

    Конфликт интересов

    Авторы заявляют, что исследование проводилось при отсутствии каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могли бы быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.

    Финансирование. Работа SL поддерживается CAPES (грант 88882.430766/2019-01). Работа JA поддерживается FAPESP (грант 2018/18347-4). AC получил гранты от CNPq (Грант 307510/2015-8) и FAPESP (Грант 2017/02203-7).

    Ссылки

    • Агилар-Запата Д., Петрайтене Р., Петрайтис В. (2015). Эхинокандины: расширяющийся противогрибковый арсенал. клин. Заразить. Дис.
      61 (Приложение 6), S604–S611. 10.1093/cid/civ814 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Arendrup M.C., Chowdhary A., Astvad K.M.T., Jørgensen K.M. (2018a). Активность APX001A in vitro в отношении современных изолятов крови и Candida auris определена эталонным методом EUCAST.Антимикроб. Агенты Чемотер.
      62, фото: e01225-18. 10.1128/AAC.01225-18 [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Arendrup M.C., Meletiadis J., Zaragoza O., Jørgensen K.M., Marcos-Zambrano L.J., Kanioura L., et al. (2018б). Многоцентровое определение чувствительности видов Candida к резафунгину (CD101) методом EUCAST. клин. микробиол. Заразить.
      24, 1200–1204. 10.1016/j.cmi.2018.02.021 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Аруанно М., Глампедакис Э., Ламот Ф. (2019). Эхинокандины для лечения инвазивного аспергиллеза: от лаборатории к постели. Антимикроб. Агенты Чемотер.
      63, фото: e00399-19. 10.1128/AAC.00399-19, PMID: [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Беркоу Э. Л., Локхарт С. Р. (2018). Активность CD101, эхинокандина длительного действия, против клинических изолятов Candida auris. Диагн. микробиол. Заразить. Дис.
      90, 196–197. 10.1016/j.diagmicrobio.2017.10.021, PMID: [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Bermejo C., Родригес Э., Гарсия Р., Родригес-Пенья Х.М., Родригес де ла Консепсьон М.Л., Ривас К. и др. (2008). Последовательная активация путей дрожжей HOG и SLT2 необходима для выживания клеток в условиях стресса клеточной стенки. Мол. биол. Клетка
      19, 1113–1124. 10.1091/mbc.e07-08-0742 [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Bowman J.C., Hicks P.S., Kurtz M.B., Rosen H., Schmatz D.M., Liberator P.A., et al. . (2002). Противогрибковый эхинокандин ацетат каспофунгина убивает растущие клетки Aspergillus fumigatus in vitro.Антимикроб. Агенты Чемотер.
      46, 3001–3012. 10.1128/AAC.46.9.3001-3012.2002, PMID: [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Brown AJP, Budge S., Kaloriti D., Tillmann A., Jacobsen MD, Yin Z. , и другие. (2014). Адаптация к стрессу у патогенного гриба. Дж. Эксп. биол.
      217, 144–155. 10.1242/jeb.088930 [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Castanheira M., Duncanson F.P., Diekema D.J., Guarro J., Jones RN, Pfaller MA (2012). Активность E1210 и агентов сравнения протестирована методами микроразведения бульона CLSI и EUCAST в отношении видов Fusarium и Scedosporium , идентифицированных с помощью молекулярных методов.Антимикроб. Агенты Чемотер.
      56, 352–357. 10.1128/AAC.05414-11 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Чаудхари П. М., Тупе С. Г., Дешпанде М. В. (2013). Ингибиторы хитинсинтазы как противогрибковые средства. Мини Преподобный Мед. хим.
      13, 222–236. 10.2174/138

      3804805256, PMID: [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

    • Cheung Y.-Y., Hui M. (2017). Эффекты эхинокандинов в сочетании с никкомицином Z против инвазивных изолятов Candida albicans из кровотока и мутантов fks.Антимикроб. Агенты Чемотер.
      61, фото: e00619-17. 10.1128/AAC.00619-17, PMID: [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Chew S.Y., Ho K.L., Cheah Y.K., Sandai D., Brown A.J.P., Than L.T.L. (2019). Физиологически значимые альтернативные источники углерода модулируют образование биопленки, архитектуру клеточной стенки, а также устойчивость к стрессу и противогрибковым препаратам Candida glabrata . Междунар. Дж. Мол. науч.
      20, фото: E3172. 10.3390/ijms20133172, PMID: [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Chiou C.К., Маврогиоргос Н., Тиллем Э., Гектор Р., Уолш Т.Дж. (2001). Синергия, фармакодинамика и временные ультраструктурные изменения взаимодействия между никкомицином Z и эхинокандином FK463 против Aspergillus fumigatus . Антимикроб. Агенты Чемотер.
      45, 3310–3321. 10.1128/AAC.45.12.3310-3321.2001, PMID: [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Cordeiro R.A., Brilhante R.S.N., Rocha M.F.G., Fechine M.A.B., Costa A.K.F., Camargo et al.P.. (2006). In vitro активность каспофунгина, амфотерицина В и азолов в отношении штаммов Coccidioides posadasii с северо-востока Бразилии. Микопатология
      161, 21–26. 10.1007/s11046-005-0177-0, PMID: [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Дэвис М. Р., Доннелли М. А., Томпсон Г. Р. (2019). Ибрексафунгерп: новый пероральный ингибитор глюкансинтазы. Мед. Микол.
      Пии: myz083. 10.1093/mmy/myz083, PMID: [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Denning D. W. (2003). Эхинокандиновые противогрибковые препараты.Ланцет
      362, 1142–1151. 10.1016/S0140-6736(03)14472-8 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Эне И. В., Адья А. К., Вемейер С., Бранд А. К., Маккаллум Д. М., Гоу Н. А. Р. и др. . (2012). Источники углерода-хозяина модулируют архитектуру клеточной стенки, лекарственную устойчивость и вирулентность грибкового патогена. Клетка. микробиол.
      14, 1319–1335. 10.1111/j.1462-5822.2012.01813.x, PMID: [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Espinel-Ingroff A. (2003). Противогрибковая активность анидулафунгина и микафунгина, лицензированных препаратов и исследуемого триазола позаконазола in vitro, определенная методами NCCLS для 12 052 грибковых изолятов: обзор литературы.Преподобный Ибероам. Микол.
      20, 121–136. PMID: [PubMed] [Google Scholar]
    • Forastiero A., Mesa-Arango A.C., Alastruey-Izquierdo A., Alcazar-Fuoli L., Bernal-Martinez L., Pelaez T., et al. . (2013). Перекрестная противогрибковая устойчивость Candida tropicalis связана с различными модификациями азоловой мишени (Erg11p). Антимикроб. Агенты Чемотер.
      57, 4769–4781. 10.1128/AAC.00477-13, PMID: [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Fortwendel J. R., Juvvadi P. R., Pinchai N., Perfect B.Z., Alspaugh J.A., Perfect J.R., et al. . (2009). Дифференциальные эффекты ингибирования синтеза хитина и 1,3-{бета}-D-глюкана у мутантов ras и кальцинейрина Aspergillus fumigatus . Антимикроб. Агенты Чемотер.
      53, 476–482. 10.1128/AAC.01154-08, PMID: [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Ганнум М., Лонг Л., Ларкин Э.Л., Ишам Н., Шериф Р., Боррото-Эсода К. ., и другие. (2018). Оценка противогрибковой активности нового перорального ингибитора глюкансинтазы SCY-078, по отдельности и в комбинации, для лечения инвазивного аспергиллеза.Антимикроб. Агенты Чемотер.
      62, e00244–e00218. 10.1128/ААС.00244-18. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Goldberg J., Connolly P., Schnizlein-Bick C., Durkin M., Kohler S., Smedema M., et al. . (2000). Сравнение никкомицина Z с амфотерицином В и итраконазолом для лечения гистоплазмоза на мышиной модели. Антимикроб. Агенты Чемотер.
      44, 1624–1629. 10.1128/AAC.44.6.1624-1629.2000, PMID: [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Gow N.А.Р., Латге Дж.-П., Манро К.А. (2017). Клеточная стенка грибов: строение, биосинтез и функции. микробиол. Спектр
      5. 10.1128/microbiolspec.FUNK-0035-2016, PMID: [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Hadrich I., Makni F., Neji S., Cheikhrouhou F., Bellaaj H., Elloumi M., и другие. . (2012). Резистентность к амфотерицину В in vitro связана с фатальной инфекцией Aspergillus flavus . Мед. Микол.
      50, 829–834. 10.3109/136

      .2012.684154, PMID: [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

    • Hage C.А., Коннолли П., Хоран Д., Дуркин М., Смедема М., Зарновски Р. и др. . (2011). Исследование эффективности микафунгина при лечении гистоплазмоза с использованием двух североамериканских штаммов Histoplasma capsulatum . Антимикроб. Агенты Чемотер.
      55, 4447–4450. 10.1128/AAC.01681-10, PMID: [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Hager C.L., Larkin E.L., Long L.A., Ghannoum M.A. (2018a). Оценка эффективности резафунгина, нового эхинокандина, при лечении диссеминированной инфекции Candida auris с использованием модели мыши с ослабленным иммунитетом.Дж. Антимикроб. Чемотер.
      73, 2085–2088 гг. 10.1093/jac/dky153 [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Hager C.L., Larkin E.L., Long L., Zohra Abidi F., Shaw K.J., Ghannoum MA (2018b). In vitro и in vivo оценка противогрибковой активности APX001A/APX001 в отношении Candida auris. Антимикроб. Агенты Чемотер.
      62, фото: e02319-17. 10.1128/AAC.02319-17 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Хасим С., Коулман Дж. Дж. (2019). Ориентация на клеточную стенку грибка: современные методы лечения и последствия для разработки альтернативных противогрибковых средств.Будущее мед. хим.
      11, 869–883. 10.4155/fmc-2018-0465 [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Хата К., Хории Т., Миядзаки М., Ватанабэ Н.-А., Окубо М., Сонода Дж. , и другие. . (2011). Эффективность перорального препарата Е1210, нового противогрибкового препарата широкого спектра действия с новым механизмом действия, на мышиных моделях кандидоза, аспергиллеза и фузариоза. Антимикроб. Агенты Чемотер.
      55, 4543–4551. 10.1128/AAC.00366-11, PMID: [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Гектор Р.Ф. (1993). Соединения активны против клеточных стенок важных с медицинской точки зрения грибов. клин. микробиол. преп.
      6, 1–21. 10.1128/CMR.6.1.1, PMID: [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Hector R. F., Zimmer B. L., Pappagianis D. (1990). Оценка никкомицинов X и Z в мышиных моделях кокцидиоидомикоза, гистоплазмоза и бластомикоза. Антимикроб. Агенты Чемотер.
      34, 587–593. 10.1128/AAC.34.4.587, PMID: [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Hobson R.P., Munro C.A., Bates S., MacCallum D.M., Cutler J.E., Heinsbroek S.E.M., et al. . (2004). Потеря маннозилфосфата клеточной стенки у Candida albicans не влияет на распознавание макрофагами. Дж. Биол. хим.
      279, 39628–39635. 10.1074/jbc.M405003200, PMID: [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Икезава Х. (2002). Гликозилфосфатидилинозитол (GPI)-заякоренные белки. биол. фарм. Бык.
      25, 409–417. 10.1248/bpb.25.409, PMID: [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Хименес-Ортигоса С., Перес В. Б., Ангуло Д., Боррото-Эсода К., Перлин Д. С. (2017). Приобретение De novo устойчивости к SCY-078 у Candida glabrata связано с мутациями FKS, которые перекрываются и отличаются от мутаций, придающих устойчивость к эхинокандину. Антимикроб. Агенты Чемотер.
      61, e00833–e00817. 10.1128/AAC.00833-17 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Johnson MD, Perfect JR (2003). Каспофунгин: первый одобренный агент нового класса противогрибковых препаратов. Эксперт. мнениеФармацевт.
      4, 807–823. 10.1517/14656566.4.5.807 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Кофла Г., Рунке М. (2011). Фармакология и метаболизм анидулафунгина, каспофунгина и микафунгина при лечении инвазивного кандидоза — обзор литературы. Евро. Дж. Мед. Рез.
      16, 159–166. 10.1186/2047-783X-16-4-159, PMID: [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Koss T., Bagheri B., Zeana C., Romagnoli MF, Grossman ME (2002 ). Амфотерицин В-резистентная инфекция Aspergillus flavus успешно лечится каспофунгином, новым противогрибковым средством.Варенье. акад. Дерматол.
      46, 945–947. 10.1067/mjd.2002.120627 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Lagorce A., Hauser N.C., Labourdette D., Rodriguez C., Martin-Yken H., Arroyo J., et al. . (2003). Полногеномный анализ реакции на мутации клеточной стенки у дрожжей Saccharomyces cerevisiae . Дж. Биол. хим.
      278, 20345–20357. 10.1074/jbc.M211604200, PMID: [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Ламот Ф., Александр Б. Д. (2015). Противогрибковая активность SCY-078 (MK-3118) и стандартных противогрибковых средств в отношении клинических изолятов плесени, не относящихся к Aspergillus.Антимикроб. Агенты Чемотер.
      59, 4308–4311. 10.1128/AAC.00234-15, PMID: [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Lamoth F., Juvvadi P.R., Gehrke C., Asfaw Y.G., Steinbach WJ (2014). Транскрипционная активация белка теплового шока 90, опосредованная проксимальной промоторной областью, как триггер устойчивости к каспофунгину у Aspergillus fumigatus . Дж. Заразить. Дис.
      209, 473–481. 10.1093/infdis/jit530, PMID: [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Ларкин Э., Хагер С., Чандра Дж., Мукерджи П.К., Ретуэрто М., Салем И. и др. . (2017). Возникающий патоген Candida auris: фенотип роста, факторы вирулентности, активность противогрибковых препаратов и влияние SCY-078, нового ингибитора синтеза глюкана, на морфологию роста и образование биопленки. Антимикроб. Агенты Чемотер.
      61, фото: e02396-16. 10.1128/AAC.02396-16, PMID: [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Latgé J.-P. (2007). Клеточная стенка: углеводная броня для грибковой клетки.Мол. микробиол.
      66, 279–290. 10.1111/j.1365-2958.2007.05872.x, PMID: [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Лепак А. Дж., Марчилло К., Андес Д. Р. (2015). Фармакодинамическая целевая оценка нового перорального ингибитора глюкансинтазы, SCY-078 (MK-3118), с использованием мышиной модели инвазивного кандидоза in vivo. Антимикроб. Агенты Чемотер.
      59, 1265–1272. 10.1128/AAC.04445-14, PMID: [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Лепак А. Дж., Чжао М., ВанСкой Б., Амброуз П.Г., Анды Д.Р. (2018). Фармакодинамика эхинокандина длительного действия, CD101, в мышиной модели нейтропенического инвазивного кандидоза с использованием схемы дозирования с увеличенным интервалом. Антимикроб. Агенты Чемотер.
      62, фото: e01572-18. 10.1128/AAC.01572-18, PMID: [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Ли Р.К., Ринальди М.Г. (1999). Противогрибковая активность никкомицина Z in vitro в сочетании с флуконазолом или итраконазолом. Антимикроб. Агенты Чемотер.
      43, 1401–1405. 10.1128/ААС.43.6.1401, PMID: [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Маркос-Замбрано Л. Дж., Эскрибано П., Санчес-Каррильо К., Буза Э., Гвинея Дж. (2017a). Частота парадоксального эффекта, измеренная с использованием методики EUCAST с микафунгином, анидулафунгином и каспофунгином в отношении изолятов видов Candida, вызывающих кандидемию. Антимикроб. Агенты Чемотер.
      61, фото: e01584-16. 10.1128/AAC.01584-16 [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Marcos-Zambrano L.Дж., Гомес-Перосанс М., Эскрибано П., Буза Э., Гвинея Дж. (2017b). Новый пероральный ингибитор глюкансинтазы SCY-078 проявляет активность in vitro в отношении сидячих и планктонных Candida spp. Дж. Антимикроб. Чемотер.
      72, 1969–1976. 10.1093/jac/dkx010 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Мазур П., Багинский В. (1996). Для активности 1,3-β-D-глюкансинтазы in vitro необходим GTP-связывающий белок Rho1. Дж. Биол. хим.
      271, 14604–14609. 10.1074/jbc.271.24.14604, PMID: [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • McLellan C.А., Уайтселл Л., Кинг О.Д., Ланкастер А.К., Мазичек Р., Линдквист С. (2012). Ингибирование биосинтеза якоря GPI в ​​грибах вызывает стресс эндоплазматического ретикулума и повышает иммуногенность. АКС хим. биол.
      7, 1520–1528. 10.1021/cb300235m, PMID: [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Меса-Аранго А.С., Руэда С., Роман Э., Квинтин Дж., Террон М.С., Луке Д. и др. . (2016). Изменения клеточной стенки у устойчивых к амфотерицину В штаммов Candida tropicalis и связь с иммунными реакциями, вызванными хозяином.Антимикроб. Агенты Чемотер.
      60, 2326–2335. 10.1128/AAC.02681-15, PMID: [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Меса-Аранго А.С., Тревихано-Контадор Н., Роман Э., Санчес-Фреснеда Р., Касас С. ., Herrero E., et al. . (2014). Продукция активных форм кислорода является универсальным механизмом действия амфотерицина В против патогенных дрожжей и способствует фунгицидному действию этого препарата. Антимикроб. Агенты Чемотер.
      58, 6627–6638. 10.1128/AAC.03570-14, PMID: [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Миядзаки М., Хории Т., Хата К., Ватанабэ Н.-А., Накамото К., Танака К. и др. . (2011). Активность нового противогрибкового препарата Е1210 in vitro в отношении клинически важных дрожжевых и плесневых грибов. Антимикроб. Агенты Чемотер.
      55, 4652–4658. 10.1128/AAC.00291-11, PMID: [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Mora-Duarte J., Betts R., Rotstein C., Colombo AL, Thompson-Moya L., Смитана Дж. и др. . (2002). Сравнение каспофунгина и амфотерицина В при инвазивном кандидозе. Н. англ. Дж. Мед.347, 2020–2029 гг. 10.1056/NEJMoa021585, PMID: [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Munro CA (2013). Хитин и глюкан, инь и ян клеточной стенки грибов, значение для открытия противогрибковых препаратов и терапии. Доп. заявл. микробиол.
      83, 145–172. 10.1016/B978-0-12-407678-5.00004-0 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Мутц М., Ремер Т. (2016). Якорный путь GPI: многообещающая противогрибковая мишень?
      Будущее мед. хим.
      8, 1387–1391. 10.4155/fmc-2016-0110, PMID: [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Накаи Т., Уно Дж., Икеда Ф., Тавара С., Нисимура К., Мияджи М. (2003). Противогрибковая активность микафунгина (ФК463) in vitro в отношении диморфных грибов: сравнение дрожжеподобных и мицелиальных форм. Антимикроб. Агенты Чемотер.
      47, 1376–1381. 10.1128/AAC.47.4.1376-1381.2003, PMID: [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Нетт Дж., Линкольн Л., Марчилло К., Мэсси Р., Холойда К., Хофф Б. и др. . (2007). Предполагаемая роль бета-1,3 глюканов в устойчивости биопленки Candida albicans .Антимикроб. Агенты Чемотер.
      51, 510–520. 10.1128/AAC.01056-06, PMID: [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Nyfeler R., Keller-Schierlein W. (1974). Метаболиты микроорганизмов. 143. Эхинокандин В, новый полипептид-антибиотик из Aspergillus nidulans var. echinulatus: выделение и структурные компоненты. Хелв. Чим. Акта
      57, 2459–2477. 10.1002/hlca.170818, PMID: [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • O’Meara T. R., Robbins N., Коуэн Л.Э. (2017). Сеть шаперонов Hsp90 модулирует признаки вирулентности Candida. Тенденции микробиол.
      25, 809–819. 10.1016/j.tim.2017.05.003, PMID: [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Pappas PG, Kauffman CA, Andes DR, Clancy CJ, Marr KA, Ostrosky-Zeichner L., и другие. . (2016). Клиническое практическое руководство по лечению кандидоза: обновление 2016 г., подготовленное Американским обществом инфекционистов. клин. Заразить. Дис.
      62, е1–е50. 10.1093/cid/civ933, PMID: [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Патил А., Маджумдар С. (2017). Эхинокандины в противогрибковой фармакотерапии. Дж. Фарм. Фармакол.
      69, 1635–1660. 10.1111/jphp.12780, PMID: [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Перлин Д. С. (2015). Резистентность к эхинокандину у Candida. клин. Заразить. Дис.
      61 (Приложение 6), S612–S617. 10.1093/cid/civ791 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Пфаллер М. А., Хабанд М. Д., Фламм Р. К., Бьен П. А., Кастанхейра М. (2019). In vitro активность APX001A (Manogepix) и агентов сравнения в отношении 1706 изолятов грибов, собранных в ходе международной программы наблюдения (2017 г.).Антимикроб. Агенты Чемотер.
      63, фото: e00840-19. 10.1128/AAC.00840-19, PMID: [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Пфаллер М. А., Мессер С. А., Мотыль М. Р., Джонс Р. Н., Кастанхейра М. (2013). In vitro активность нового перорального ингибитора глюкансинтазы (MK-3118), протестированная против Aspergillus spp. методами микроразведения бульона CLSI и EUCAST. Антимикроб. Агенты Чемотер.
      57, 1065–1068. 10.1128/AAC.01588-12, PMID: [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Pfaller M.А., Мессер С.А., Ромберг П.Р., Боррото-Эсода К., Кастанейра М. (2017). Дифференциальная активность перорального ингибитора глюкансинтазы SCY-078 в отношении дикого типа и резистентных к эхинокандину штаммов видов Candida. Антимикроб. Агенты Чемотер.
      61, e00161–e00117. 10.1128/AAC.00161-17 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Qadota H., Python C.P., Inoue S.B., Arisawa M., Anraku Y., Zheng Y., et al. . (1996). Идентификация дрожжевой Rho1p GTPase как регуляторной субъединицы 1,3-β-глюкансинтазы.Наука
      272, 279–281. 10.1126/science.272.5259.279, PMID: [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Рой Р. М., Кляйн Б. С. (2012). Дендритные клетки в противогрибковом иммунитете и разработке вакцин. Клеточный микроб-хозяин
      11, 436–446. 10.1016/j.chom.2012.04.005, PMID: [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Rueda C., Cuenca-Estrella M., Zaragoza O. (2014). Парадоксальный рост Candida albicans в присутствии каспофунгина связан с множественными перестройками клеточной стенки и снижением вирулентности.Антимикроб. Агенты Чемотер.
      58, 1071–1083. 10.1128/AAC.00946-13, PMID: [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Рюпинг М. Дж., Верешильд Дж. Дж., Фаровски Ф., Корнели О. А. (2008). Анидулафунгин: преимущество для новичка?
      Эксперт. Преподобный Клин. Фармакол.
      1, 207–216. 10.1586/17512433.1.2.207 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Sandison T., Ong V., Lee J., Thye D. (2017). Безопасность и фармакокинетика CD101 IV, нового эхинокандина, у здоровых взрослых. Антимикроб.Агенты Чемотер.
      61, e01627–e01616. 10.1128/AAC.01627-16 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Сатиш С., Хименес-Ортигоса К., Чжао Ю., Ли М.Х., Долгов Э., Крюгер Т. и др. др. . (2019). Стресс-индуцированные изменения в липидном микроокружении β-(1,3)-D-глюкансинтазы вызывают клинически важную резистентность к эхинокандину у Aspergillus fumigatus. mBio
      10:e00779-19. 10.1128/mBio.00779-19, PMID: [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Schimoler-O’Rourke R., Renault S., Mo W., Selitrennikoff C.P. (2003). Белок Neurospora crassa FKS связывается с субстратом (1,3) бета-глюкансинтазы, UDP-глюкозой. Курс. микробиол.
      46, 408–412. 10.1007/s00284-002-3884-5, PMID: [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Скорно Б., Ангуло Д., Боррото-Эсода К., Ганнум М., Пил М., Ринг С. ( 2017). SCY-078 является фунгицидным против видов Candida в исследованиях времени уничтожения. Антимикроб. Агенты Чемотер.
      61, фото: e01961-16. 10.1128/AAC.01961-16, PMID: [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Seo K., Акиёси Х., Ониши Ю. (1999). Изменение состава клеточной стенки приводит к устойчивости к амфотерицину В у Aspergillus flavus . микробиол. Иммунол.
      43, 1017–1025. 10.1111/j.1348-0421.1999.tb01231.x, PMID: [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Shaw KJ, Schell WA, Covel J., Duboc G., Giamberardino C., Kapoor M., et al. . . (2018). In vitro и in vitro оценка APX001A/APX001 и других ингибиторов Gwt1 против Cryptococcus. Антимикроб. Агенты Чемотер.
      62:e00523-18. 10.1128/AAC.00523-18, PMID: [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Shibata N., Ikuta K., Imai T., Satoh Y., Satoh R., Suzuki A. , и другие. . (1995). Наличие разветвленных боковых цепей в маннане клеточной стенки патогенных дрожжей Candida albicans . Связь структуры и антигенности между маннанами клеточной стенки Candida albicans и Candida parapsilosis . Дж. Биол. хим.
      270, 1113–1122. 10.1074/jbc.270.3.1113, PMID: [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Сингх С.Д., Роббинс Н., Заас А.К., Шелл В.А., Перфект Дж.Р., Коуэн Л.Е. (2009). Hsp90 регулирует резистентность к эхинокандину у патогенных дрожжей Candida albicans посредством кальциневрина. PLoS Патог.
      5:e1000532. 10.1371/journal.ppat.1000532, PMID: [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Singh-Babak SD, Babak T., Diezmann S., Hill JA, Xie JL, Chen Y.- Л. и др. . (2012). Глобальный анализ эволюции и механизма устойчивости к эхинокандину у Candida glabrata .PLoS Патог.
      8:e1002718. 10.1371/journal.ppat.1002718, PMID: [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Софьян А.К., Митчелл А., Шах Д.Н., Нгуен Т., Сим М., Тройчак А. и др. др. . (2018). Резафунгин (CD101), эхинокандин нового поколения: систематический обзор литературы и оценка возможного места в терапии. Дж. Глоб. Антимикроб. Сопротивляться.
      14, 58–64. 10.1016/j.jgar.2018.02.013, PMID: [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Stevens DA (2000). Исследования лекарственного взаимодействия ингибитора глюкансинтазы (LY 303366) и ингибитора хитинсинтазы (никкомицин Z) для ингибирования и уничтожения грибковых патогенов.Антимикроб. Агенты Чемотер.
      44, 2547–2548. 10.1128/AAC.44.9.2547-2548.2000, PMID: [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Томпсон Г. Р., Баркер Б. М., Видерхольд Н. П. (2017). Крупномасштабная оценка активности амфотерицина В, триазола и эхинокандина in vitro против видов Coccidioides из США. Учреждения. Антимикроб. Агенты Чемотер.
      61, e02634–e02616. 10.1128/AAC.02634-16 [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Цукахара К., Хата К., Накамото К., Сагане К., Ватанабэ Н.-А., Куромицу Дж. и др. . (2003). Подход медицинской генетики к идентификации молекулярной мишени нового ингибитора сборки клеточной стенки грибов. Мол. микробиол.
      48, 1029–1042. 10.1046/j.1365-2958.2003.03481.x, PMID: [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Viriyakosol S., Kapoor M., Okamoto S., Covel J., Soltow QA, Trzoss M., et др. . (2019). APX001 и другие пролекарства ингибитора Gwt1 эффективны при экспериментальной пневмонии Coccidioides immitis .Антимикроб. Агенты Чемотер.
      63, фото: e01715-18. 10.1128/AAC.01715-18, PMID: [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Walker L.A., Gow N.A.R., Munro CA (2010). Резистентность грибов к эхинокандину. Грибковая генетика. биол.
      47, 117–126. 10.1016/j.fgb.2009.09.003, PMID: [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Walker L.A., Gow N.A.R., Munro CA (2013). Повышенное содержание хитина снижает восприимчивость видов Candida к каспофунгину. Антимикроб.Агенты Чемотер.
      57, 146–154. 10.1128/AAC.01486-12 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Уокер Л. А., Манро К. А., де Брюйн И., Ленардон М. Д., Маккиннон А., Гоу Н. А. Р. (2008). Стимуляция синтеза хитина избавляет Candida albicans от эхинокандинов. PLoS Патог.
      4:e1000040. 10.1371/journal.ppat.1000040, PMID: [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Walker S. S., Xu Y., Triantafyllou I., Waldman M. F., Mendrick C., Brown N., и другие. . (2011). Открытие нового класса перорально активных противогрибковых ингибиторов β-1,3-d-глюкансинтазы. Антимикроб. Агенты Чемотер.
      55, 5099–5106. 10.1128/AAC.00432-11, PMID: [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Ватанабе Н.-А., Миядзаки М., Хории Т., Сагане К., Цукахара К., Хата К. (2012). E1210, новый противогрибковый препарат широкого спектра действия, подавляет рост гиф Candida albicans за счет ингибирования биосинтеза гликозилфосфатидилинозитола. Антимикроб.Агенты Чемотер.
      56, 960–971. 10.1128/AAC.00731-11, PMID: [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Видерхольд Н. П., Льюис Р. Э. (2003). Эхинокандиновые противогрибковые препараты: обзор фармакологии, спектра действия и клинической эффективности. Мнение эксперта. расследование Наркотики
      12, 1313–1333. 10.1517/13543784.12.8.1313 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Видерхольд Н. П., Локк Дж. Б., Дарувала П., Бартизал К. (2018). Резафунгин (CD101) демонстрирует сильную активность in vitro против Aspergillus , включая устойчивые к азолам изоляты Aspergillus fumigatus и криптические виды.Дж. Антимикроб. Чемотер.
      73, 3063–3067. 10.1093/jac/dky280, PMID: [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Wiederhold N. P., Najvar L. K., Shaw K. J., Jaramillo R., Patterson H., Olivo M., et al. . (2019). Эффективность отсроченной терапии с помощью Fosmanogepix (APX001) в мышиной модели инвазивного кандидоза Candida auris. Антимикроб. Агенты Чемотер.
      63:e01120-19. 10.1128/AAC.01120-19, PMID: [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Wring S. A., Randolph R., Park S., Абруццо Г., Чен К., Флэттери А. и др. . (2017). Доклиническая фармакокинетика и фармакодинамическая мишень SCY-078, первого в своем классе перорально активного противогрибкового ингибитора синтеза глюкана, на мышиных моделях диссеминированного кандидоза. Антимикроб. Агенты Чемотер.
      61:e02068-16. 10.1128/AAC.02068-16, PMID: [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Ядав У., Хан М. А. (2018). Ориентация на путь биосинтеза GPI. Патог. Глобальное здоровье
      112, 115–122. 10.1080/20477724.2018.1442764, PMID: [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Ян Ф., Чжан Л., Вакабаяши Х., Майерс Дж., Цзян Ю., Цао Ю. и др. (2017). Толерантность к каспофунгину у Candida albicans связана по крайней мере с тремя отличительными механизмами, которые регулируют экспрессию генов FKS и ремоделирование клеточной стенки. Антимикроб. Агенты Чемотер.
      61, e00071–e00017. 10.1128/AAC.00071-17 [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Zhao Y., Lee M.Х., Падеру П., Ли А., Хименес-Ортигоса К., Парк С. и др. . (2018). Значительно улучшенная фармакокинетика повышает эффективность APX001 in vivo против изолятов Candida с эхинокандином и множественной лекарственной устойчивостью в мышиной модели инвазивного кандидоза. Антимикроб. Агенты Чемотер.
      62, фото: e00425-18. 10.1128/AAC.00425-18, PMID: [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

    Разрушение клеточной стенки грибка противогрибковыми экстрактами эхинацеи | Медицинская микология

    2″ data-legacy-id=»s1″> Введение

    Эхинацея имеет богатую традицию использования коренными народами равнин Северной Америки [1] . Эхинацея была быстро принята европейскими поселенцами в 19 веке [2] и в настоящее время является одной из самых продаваемых трав в обзорах рынка натуральных продуктов в Северной Америке [3,4].Род произрастает в прериях центральной и юго-восточной части США, простираясь на север до юго-востока Саскачевана и юга Манитобы в Канаде [2]. Таксономия Echinacea была недавно переоценена с использованием морфометрического и AFLP-анализа, который предоставил данные о четырех видах и нескольких разновидностях [5]. Двумя видами, обычно используемыми в медицине, являются Echinacea purpurea (L.) Moench и Echinacea pallida (Nutt.) Nutt. вар. узколистный (DC.) Кронквист (син. E. angustifolia ) [5,6]. Лекарственные экстракты эхинацеи производятся из всех частей растения, включая корень, листья, цветочные головки и семена. Они обычно используются для профилактики, лечения и уменьшения симптомов и продолжительности простуды, кашля, гриппа и других заболеваний верхних дыхательных путей (обзор в: [7]). Эхинацея также используется для лечения инфекций и местных состояний, таких как кандидоз (включая этноботанические отчеты об использовании при молочнице [1]), воспалений, вызванных различными бактериями, вирусами и другими микробами, связанными с раневыми инфекциями, а также для облегчения отек и боль [8–12].

    Ряд химических соединений считаются важными факторами терапевтического действия Echinacea . К ним относятся эфирное масло, алкамиды, алкалоиды, производные кофейной кислоты, флавоноиды, эфирные масла, полиацетилены и полисахариды [13–17]. Однако алкамиды, основные липофильные соединения, обнаруженные в высоких концентрациях в корнях эхинацеи , обладают гораздо более высокой биодоступностью по сравнению с другими компонентами эхинацеи , такими как цикоровая кислота и кофейная кислота [18–20].Следовательно, они могут быть ответственны за фармакологические эффекты спиртовых экстрактов [21].

    In vivo и in vitro фармакологические исследования показали иммуномодулирующее действие Echinacea [12,22], что может объяснить эффективность использования Echinacea для лечения и профилактики простуды и гриппа [7]. Однако способы действия эхинацеи в качестве противогрибкового средства и для местного применения подробно не изучались.Наша цель состояла в том, чтобы изучить возможные способы противогрибковой активности экстрактов эхинацеи . Мы исследовали восемь различных спиртовых экстрактов E. purpurea и E. angustifolia на предмет потенциальной фототоксичности и светонезависимой (темновой) токсичности по отношению к Saccharomyces cerevisiae , т.е. всего 16 обработок. Чтобы изучить возможный механизм действия Echinacea , мы использовали набор из примерно 4600 жизнеспособных мутантов с делецией гена S. cerevisiae , каждый с определенной делецией охарактеризованного или предполагаемого гена.Мутанты выращивали с каждой обработкой и без нее, чтобы получить представление о химико-генетических взаимодействиях и определить пути, затронутые воздействием экстрактов эхинацеи .

    Наше обоснование вышеуказанного подхода было трояким. Во-первых, мы исследовали способ противогрибковой активности экстрактов всех частей E. purpurea и E. angustifolia на основе традиционного использования, описанного выше. Во-вторых, противогрибковая активность спиртовых экстрактов из этих растений, усиленная в темноте и в ближнем ультрафиолетовом свете, хорошо известна, хотя специфическая активность десятков липофильных соединений в этих экстрактах в значительной степени неизвестна [11,23].Таким образом, мы искали согласованную активность среди различных этанольных экстрактов эхинацеи с активацией УФ-светом и без нее. Наконец, в-третьих, химико-геномные профили сырых экстрактов могут быть очень похожи на профили активных, чистых составляющих соединений [24]. Таким образом, определение механизма действия неочищенных экстрактов может помочь в последующих усилиях по идентификации активного соединения (соединений) в сложных смесях.

    Заметной тенденцией в наборах данных массива делеций генов (GDA) Echinacea было обилие сверхчувствительных мутантов дрожжей с дефектами функций, связанных с клеточной стенкой, что позволяет предположить, что экстракты Echinacea нарушают биогенез/функции клеточной стенки грибов.Впоследствии мы проверили, были ли грибы, выращенные в присутствии субингибирующих уровней эхинацеи , более чувствительными к разрушению клеточной стенки ультразвуком.

    3″ data-legacy-id=»s2a»> Источники эхинацеи

    Растительные материалы

    Echinacea purpurea (ваучер U Ottawa № 010502-18) и E. angustifolia (U Ottawa № 010410-12 и 020607-01) были получены от коммерческих производителей Северной Америки и классифицированы в соответствии с последними таксономическими редакция [5]. Восемь этанольных экстрактов (55% EtOH или 70% EtOH) были приготовлены с использованием корня, листьев+стеблей, листьев+стеблей+цветков (травы) и цветков точно так же, как описано ранее [10,25], с использованием системы ускоренной экстракции растворителем (DIONEX). .Все фракции концентрировали при 30°С в роторном испарителе и доводили до 50 мл в соответствующем растворителе и хранили в темноте при -20°С или хранили в виде высушенного порошка до использования.

    8″ data-legacy-id=»s2c»> Анализ матрицы делеций генов (GDA)

    Химико-геномное профилирование экстрактов эхинацеи проводили с использованием дрожжевого GDA, как описано Parsons et al. . [24]. Метод основан на сравнении размеров колоний, образованных штаммами с делецией гена дрожжей, в присутствии и в отсутствие полуингибирующей концентрации целевого лекарственного средства в среде. Мы использовали набор гаплоидных штаммов S. cerevisiae , представляющих около 4600 генных мутантов фонового штамма BY4741, производного S288C [26].Экстракты Echinacea добавляли к расплавленной агаровой среде YPD при 55°C в концентрации, которая составляла ~80% от MIC. Чашки с агаром YPD без (контроль) и с экстрактом эхинацеи (экспериментальная) инокулировали путем ручного закрепления наборами 384 (16 × 24) мутантных штаммов на чашку с репликатором с 384 плавающими штифтами. После облучения УФ-светом (как описано выше) или обработки в темноте планшеты инкубировали в течение 1–2 дней при 30°C, фотографировали цифровой камерой высокого разрешения (цифровая камера Hewlett Packard PhotoSmart 735) и анализировали, как подробно описано. Мемариан и др. .[27]. Вкратце, как для экспериментальных, так и для контрольных чашек размер каждой колонии определяли цифровым способом и сравнивали со средним размером колонии для всех колоний на чашке. Мутантные колонии, чувствительные к данной обработке, меньше среднего размера колоний на экспериментальной чашке, но не меньше среднего размера колонии на контрольной чашке. После этой нормализации различий в размерах колоний, связанных с мутациями, и общего ингибирования роста из-за обработки мы получили для каждого экстракта ранжированный список наиболее и наименее чувствительных мутантов.Затем из каждой из 16 обработок (обработка светом и темнотой каждым из 8 экстрактов) отбирали 5% (примерно 230) наиболее чувствительных мутантов. Затем мы отобрали подмножество мутантов, которые были сверхчувствительны к пяти или более обработкам экстрактом, чтобы определить общий механизм противогрибкового действия Echinacea .

    клеточной оболочки функции 1) Gas1 / CWH52, GGP1 YMR307W 1, 3-β-глюканосилтерсфераза активности 2,3 , камеровая стена сборка 3 , удаление приводит к увеличению читин & Calcofluor белая чувствительность 3 2) KRE6 / CWH58 YPR159W β-1 , 6-глюкан биосинтез 2,3 , интеграл к мембране 3 3) MNN10 / Bed1, SLC2, REC41 YDR245W α-1,6-манносилтрансфераза активность 2,3 , делеция приводит к повышению чувствительности к хитину и калькофлуору белку 33 2,3 , клеточная стена Mannon целостность 2 5) BEM2 / IPL2, SUP9, TSL1 YER155C RHO GTPASE Activator Activitor 3 , требуется для появления BUD 2,3 и клеточный цикл для организации цитоскелета 2 6) OPI3 / PEM2 YJR073C фосфолипидов метилтрансферазы 2,3 , удаление приводит к calcofluor белизну чувствительности 3 7) CAX4 / CWH8 YGR036C Генерация клеточной стенки маннопротеина 2 , пирофосфатаза, промежуточный синтез и белок N-гликозилирование 3 8) Ubm1 YIL008W UBIQUITITIN 2 , активность белка и требуется для нормального роста 3   9) AXL2 YIL140W Неизвестно, требуется для осевой завивки в h aploid клетка мембрана 2,3 10) OPI9 YLR338W Неизвестной 2,3 , делеция приводит к увеличению хитина и calcofluor белой Чувствительности 3 неизвестных функциям 11) YPL264C YPL264C Неизвестный 2,3 , интегральный мембранный до 3 12) YPR071W YPR071W Неизвестный 2,3 , интегральную к мембранным 3 13) YDR455C YDR455C Неизвестный 2,3 14) YL¬R402W YLR402W Неизвестный 2,3 15) YPL182C YPL182C Неизвестный 2 ,3   16) WSS1 YHR134W Неизвестно 2,3 , УФ-чувствительный мутантный фенотип и, возможно, е ДНК элемент ответа на повреждение 3 17) YAL056C-А / YAL058C-А YAL056C-А Неизвестный 2,3 Другие функции 18) ARF1 YDL192W ГТФаза активность, Гольджи торговлей 19) SPT20 / ADA5 YOL148C субъединицей SAGA транскрипционный регуляторный комплекс 2,3 , транскрипция кофактора активности 3 20) PIG2 YIL045W белка типа фосфатазы 1 регулятор активность 2,3 21) sin4 / BEL2, GAL22, SDI 3 YNL236W РНК-полимераза II транскрипции медиатор активность 2,3 22) PHO2/BAS2, GRF10 YDL106C Транскрипционный фактор фосфатного обмена 2,3   23) PRO2 YOR323C катализирует вторую стадию в биосинтезе пролина 2,3

    +

    +

    HOC1

    9337 9 22) PHO2 / BAS2, GRF10
    Джин стандарт Название / псевдоним Джин ID описание функции гена
    Функции сотовой стены
    1)

    1)

    1) Gas1 / Cwh52, GGP1 YMR307W 1,3-β-глюканозилтернсфераза активность 2,3 , монтаж сотовой стенки 3 , удаление приводит к увеличению читина и калькуляции белый чувствительность 3
    2) KRE6 / CWh58 YPR159W β-1,6-глюкан биосинтез 2,3 , интегральный мембранный до 3
    3) MNN10 /BED1, SLC2, REC41  YDR245W  Активность α-1,6-маннозилтрансферазы 2,3 , делеция приводит к повышению чувствительности к хитину и калькофлуору у 3
    4) YJR075W α-1,6-mannosyltransferase активность 2,3 , целостность клеточной стенки Маннон 2
    5) BEM2 / IPL2 , Sup9, tsl1 yer155c Rho Gtpase Activator Activator 3 , требуется для появления BUD 2,3 и ячеистый цикл для цитоскелетной организации 2
    6) OPI3 / PEM2 YJR073C Фосфолипид Methyltransferase 2,3 , Удаление приводит к калькулюрной белой чувствительности 3
    7) CAX4 / CWH8 YGR036C ygr036c Генерация клеточной стенки Mannoprotein 2 , пирофосфатазная активность промежуточного синтеза и белка N-гликозилирование 3  
    8) URM1 YIL008W Убиквитин 2 , активность мечения белков и требуется для нормальный рост 3
    9) AXL2 YIL140W Неизвестных, необходимый для осевого почкования в гаплоидных клетках мембрана 2,3
    10) OPI9 YLR338W Неизвестного 2,3 , удаление приводит к увеличению хитина и calcofluor белой чувствительности 3
    Неизвестных функции
    11) YPL264C YPL264C Неизвестного 2,3 , интегральная мембранная до 3
    12) YPR071W YPR071W Неизвестный 2,3 , интегральный мембранный до 3
    13) YDR455C YDR455C Неизвестный 2,3
    14) YL¬R402W YLR402W Неизвестно 2,3
    15) YPL182C YPL182C Неизвестно 2,3
    16) WSS1 yhr134w Неизвестный 2,3 , УФ-чувствительный мутантный фенотип и возможные DNA Ущерб Элемент ответа DNA 3
    17) Yal056c-A / yal058c-A yal056c- Неизвестный 2,3
    Другие функции
    18) ARF1 YDL192W ГТФаза активность, Гольджи незаконный оборот
    19) SPT20 / ADA5 YOL148C субъединица Сага транскрипционный регулирующий комплекс 2,3 , транскрипция COFACTOR активность 3
    20) PIG2 YIL045W Белковый фосфатаза 1 Регулятор 1-1598
    21) SIN4 / BEL2, GAL22, SDI 3   YNL236W Активность медиатора транскрипции РНК-полимеразы II 2,3  
    YDL106C Транскрипция фактор фосфатного метаболизма 2,3
    23) PRO2 YOR323C катализирует вторую стадию в биосинтезе пролина 2,3

    Таблица 1

    Мутанты дрожжей, идентифицированные как сверхчувствительные к пяти или более обработкам Echinacea 1 .

    +

    92 592

    Джин стандарт Название / псевдоним Джин ID Гена описание функции
    клеточной оболочки функции
    1) Gas1 / CWH52, GGP1 YMR307W 1, 3-β-глюканосилтерсфераза активности 2,3 , камеровая стена сборка 3 , удаление приводит к увеличению читин & Calcofluor белая чувствительность 3
    2) KRE6 / CWH58 YPR159W β-1 , 6-глюкан биосинтез 2,3 , интеграл к мембране 3
    3) MNN10 / Bed1, SLC2, REC41 YDR245W α-1,6-манносилтрансфераза активность 2,3 , делеция приводит к повышению чувствительности к хитину и калькофлуору белку 33 2,3 , клеточная стена Mannon целостность 2
    5) BEM2 / IPL2, SUP9, TSL1 YER155C RHO GTPASE Activator Activitor 3 , требуется для появления BUD 2,3 и клеточный цикл для организации цитоскелета 2
    6) OPI3 / PEM2 YJR073C фосфолипидов метилтрансферазы 2,3 , удаление приводит к calcofluor белизну чувствительности 3
    7) CAX4 / CWH8 YGR036C Генерация клеточной стенки маннопротеина 2 , пирофосфатаза, промежуточный синтез и белок N-гликозилирование 3
    8) Ubm1 YIL008W UBIQUITITIN 2 , активность белка и требуется для нормального роста 3  
    9) AXL2 YIL140W Неизвестно, требуется для осевой завивки в h aploid клетка мембрана 2,3
    10) OPI9 YLR338W Неизвестной 2,3 , делеция приводит к увеличению хитина и calcofluor белой Чувствительности 3
    неизвестных функциям
    11) YPL264C YPL264C Неизвестный 2,3 , интегральный мембранный до 3
    12) YPR071W YPR071W Неизвестный 2,3 , интегральную к мембранным 3
    13) YDR455C YDR455C Неизвестный 2,3
    14) YL¬R402W YLR402W Неизвестный 2,3
    15) YPL182C YPL182C Неизвестный 2 ,3  
    16) WSS1 YHR134W Неизвестно 2,3 , УФ-чувствительный мутантный фенотип и, возможно, е ДНК элемент ответа на повреждение 3
    17) YAL056C-А / YAL058C-А YAL056C-А Неизвестный 2,3
    Другие функции
    18) ARF1 YDL192W ГТФаза активность, Гольджи торговлей
    19) SPT20 / ADA5 YOL148C субъединицей SAGA транскрипционный регуляторный комплекс 2,3 , транскрипция кофактора активности 3
    20) PIG2 YIL045W белка типа фосфатазы 1 регулятор активность 2,3
    21) sin4 / BEL2, GAL22, SDI 3 YNL236W РНК-полимераза II транскрипции медиатор активность 2,3
    22) PHO2/BAS2, GRF10 YDL106C Транскрипционный фактор фосфатного обмена 2,3  
    23) PRO2 YOR323C катализирует вторую стадию в биосинтезе пролина 2,3

    +

    +

    HOC1

    9337 9 22) PHO2 / BAS2, GRF10
    Джин стандарт Название / псевдоним Джин ID описание функции гена
    Функции сотовой стены
    1)

    1)

    1) Gas1 / Cwh52, GGP1 YMR307W 1,3-β-глюканозилтернсфераза активность 2,3 , монтаж сотовой стенки 3 , удаление приводит к увеличению читина и калькуляции белый чувствительность 3
    2) KRE6 / CWh58 YPR159W β-1,6-глюкан биосинтез 2,3 , интегральный мембранный до 3
    3) MNN10 /BED1, SLC2, REC41  YDR245W  Активность α-1,6-маннозилтрансферазы 2,3 , делеция приводит к повышению чувствительности к хитину и калькофлуору у 3
    4) YJR075W α-1,6-mannosyltransferase активность 2,3 , целостность клеточной стенки Маннон 2
    5) BEM2 / IPL2 , Sup9, tsl1 yer155c Rho Gtpase Activator Activator 3 , требуется для появления BUD 2,3 и ячеистый цикл для цитоскелетной организации 2
    6) OPI3 / PEM2 YJR073C Фосфолипид Methyltransferase 2,3 , Удаление приводит к калькулюрной белой чувствительности 3
    7) CAX4 / CWH8 YGR036C ygr036c Генерация клеточной стенки Mannoprotein 2 , пирофосфатазная активность промежуточного синтеза и белка N-гликозилирование 3  
    8) URM1 YIL008W Убиквитин 2 , активность мечения белков и требуется для нормальный рост 3
    9) AXL2 YIL140W Неизвестных, необходимый для осевого почкования в гаплоидных клетках мембрана 2,3
    10) OPI9 YLR338W Неизвестного 2,3 , удаление приводит к увеличению хитина и calcofluor белой чувствительности 3
    Неизвестных функции
    11) YPL264C YPL264C Неизвестного 2,3 , интегральная мембранная до 3
    12) YPR071W YPR071W Неизвестный 2,3 , интегральный мембранный до 3
    13) YDR455C YDR455C Неизвестный 2,3
    14) YL¬R402W YLR402W Неизвестно 2,3
    15) YPL182C YPL182C Неизвестно 2,3
    16) WSS1 yhr134w Неизвестный 2,3 , УФ-чувствительный мутантный фенотип и возможные DNA Ущерб Элемент ответа DNA 3
    17) Yal056c-A / yal058c-A yal056c- Неизвестный 2,3
    Другие функции
    18) ARF1 YDL192W ГТФаза активность, Гольджи незаконный оборот
    19) SPT20 / ADA5 YOL148C субъединица Сага транскрипционный регулирующий комплекс 2,3 , транскрипция COFACTOR активность 3
    20) PIG2 YIL045W Белковый фосфатаза 1 Регулятор 1-1598
    21) SIN4 / BEL2, GAL22, SDI 3   YNL236W Активность медиатора транскрипции РНК-полимеразы II 2,3  
    YDL106C Транскрипция фактор фосфатного метаболизма 2,3
    23) PRO2 YOR323C катализирует вторую стадию в биосинтезе пролина 2,3

    Второй вариант этого анализа, основанного на обработке ультразвуком, использовал более мягкие условия воздействия Echinacea и исследовал возможное дозозависимое воздействие экстрактов Echinacea на клеточные стенки дрожжей.Для этого анализа штамм S288C инкубировали при 30°C при 150 об/мин до ранней логарифмической фазы (OD600 = 0,2). В этот момент к двум аликвотам клеток добавляли 70% EtOH-экстракт корней E. purpurea при концентрации MIC 10% и 20%. Контроль носителя также устанавливали путем инкубации аликвоты клеток с эквивалентным объемом 70% EtOH. Затем культуры инкубировали в течение 4,5 ч при 30°C при встряхивании, после чего аликвоты каждого образца помещали на лед перед обработкой ультразвуком на время от 40 до 85 с (амплитуда 60%, микронаконечник 3 мм, Vibra-Cell VCX130).Затем проводили анализ с использованием капельной пластины, как описано выше. Чувствительность каждого образца выражали как процент выживаемости клеток (количество клеток, выживших при обработке ультразвуком/количество клеток, выживших без обработки ультразвуком × 100).

    Влияние экстракта Echinacea на клеточные стенки дрожжей также исследовали с помощью флуоресцентной микроскопии. S. cerevisiae S288C выращивали до средней логарифмической фазы в SCM и добавляли 70% EtOH-экстракт корней E. purpurea при 40% МИК.Также был установлен контроль перевозчиков. Клетки инкубировали в течение 4 ч при 30°C при встряхивании перед легкой обработкой ультразвуком на льду (30 с, амплитуда 60%, Vibra-Cell VCX130, микронаконечник 3 мм). Культуры окрашивали 0,2 мкг/мкл калькофлуорового белого (American Cyanamid, Bound Brook, NJ) и немедленно просматривали с помощью флуоресцентной микроскопии (Axio Imager, Carl Zeiss, Торонто, ON). Для каждой обработки исследовали не менее 200 клеток из ≥ 5 случайно выбранных полей и оценивали повреждение клеточной стенки.

    9″ data-legacy-id=»s3a»> Двадцать три мутанта дрожжей проявляют высокую чувствительность к эхинацее

    Противогрибковая активность, которая усиливается при воздействии ближнего ультрафиолета, хорошо известна для экстрактов эхинацеи [11,23]. Конкретные активные соединения и способы их действия в этих экстрактах в значительной степени неизвестны. Чтобы исследовать противогрибковый механизм действия Echinacea , мы искали закономерности среди профилей химико-геномных взаимодействий, полученных в результате ингибирующего воздействия Echinacea на множество гаплоидных делеционных мутантов дрожжей.Мы выбрали различные методы лечения (рис. 1; различные экстракты этанола, части растений, активность света и темноты и два традиционно соответствующих вида эхинацеи ) в попытке определить доминирующие закономерности противогрибковой активности эхинацеи .

    Все протестированные экстракты эхинацеи обладали противогрибковой активностью против дикого типа S. cerevisiae S288C. Значения МИК варьировались от 0,3 до 5,0 мг/мл в зависимости от вида-источника, части растения и приготовления экстракта (рис.1). В целом 70% экстракты EtOH были более эффективны, чем 55% экстракты EtOH, в ингибировании роста дрожжей (в среднем 1,6 и 3,3 мг/мл соответственно; P = 0,02, парный t-критерий). В соответствии с предыдущими исследованиями (обзор в [11]), опосредованная светом противогрибковая активность (фототоксичность) проявлялась в более низких значениях МИК при обработке светом ближнего УФ (300–400 нм) по сравнению с обработкой в ​​темноте (в среднем 1,7 и 2,6). мг/мл соответственно; P = 0,01, парный t-критерий). Предыдущие исследования показывают, что фототоксичность этанольных экстрактов эхинацеи , вероятно, связана с присутствием полиацетиленов и алкамидных соединений, некоторые из которых, как известно, также обладают темновой активностью [11,25].Эти соединения могут быть склонны к окислительной деградации в зависимости от условий хранения и состава экстракта [29]. Чтобы контролировать возможность деградации противогрибковых соединений и варьирование ингибирующих характеристик различных экстрактов, мы использовали высушенные или свежеприготовленные экстракты и регулировали концентрации экстрактов для последующих экспериментов на основе уровней ингибирования данного штамма гриба и комбинации экстрактов (например, 80% от значения МПК).

    Для изучения химико-генетических взаимодействий, которые могут дать представление о механизме противогрибкового действия Echinacea , были созданы генетические профили для каждого из 16 различных видов лечения.Для этого влияние каждой обработки на штаммы с делецией гена определяли с помощью цифровой визуализации и сравнения размеров колоний на средах с добавлением экстракта и без него при ~80% МИК (рис. 1). Примеры трех сверхчувствительных мутантных колоний из экспериментов GDA показаны на рис. 2. Мутанты впоследствии были упорядочены на основе процентного уменьшения размера колонии и 5% из ~4600 мутантов, которые показали наибольшее снижение роста на экспериментальных чашках по сравнению с контрольными чашками-носителями. были обозначены как сверхчувствительные мутантные штаммы для каждой обработки (см. Дополнительную таблицу S1 в онлайн-версии статьи).Затем мы сравнили эти наиболее чувствительные мутантные штаммы из каждой обработки и отобрали те, которые были среди сверхчувствительных в пяти или более обработках. На основании биномиальных соотношений маловероятно ( P < 0,05), что данный мутант в этой наиболее чувствительной 5% группе случайно возникнет в пяти или более обработках. Из этого мы получили консенсусный набор из 23 Echinacea -чувствительных мутантов, перечисленных в таблице 1.

    Рис. 2

    Примеры сверхчувствительных мутантов из экспериментов GDA.На каждой панели показаны три штамма из контрольного планшета (продолжение) и экспериментального планшета для обработки (A) 70% EtOH-экстрактом цветков Echinacea purpurea с УФ-облучением (flw+uv), B) (70% EtOH-экстрактом Echinacea angustifolia). корни с УФ-облучением (корень+УФ) и (С) 70% этаноловый экстракт цветков эхинацеи пурпурной без УФ-излучения (flw+темнота). В среднем колонии на экспериментальных чашках немного меньше, чем на контрольных чашках, потому что были установлены обработки эхинацеей вплоть до частично тормозного.Два верхних штамма на каждой панели нечувствительны (N), тогда как нижний штамм на каждой панели является сверхчувствительным (S), о чем свидетельствует относительно небольшой размер колонии на экспериментальной чашке. Идентификаторы генов для штаммов приведены справа.

    Рис. 2

    Примеры сверхчувствительных мутантов из экспериментов GDA. На каждой панели показаны три штамма из контрольного планшета (продолжение) и экспериментального планшета для обработки (A) 70% EtOH-экстрактом цветков Echinacea purpurea с УФ-облучением (flw+uv), B) (70% EtOH-экстрактом Echinacea angustifolia). корни с УФ-облучением (корень+УФ) и (С) 70%-ный этаноловый экстракт цветков эхинацеи пурпурной без УФ-излучения (flw+dark).В среднем колонии на экспериментальных чашках немного меньше, чем на контрольных чашках, потому что обработка эхинацеей была настроена на частичное ингибирование. Два верхних штамма на каждой панели нечувствительны (N), тогда как нижний штамм на каждой панели является сверхчувствительным (S), о чем свидетельствует относительно небольшой размер колонии на экспериментальной чашке. Идентификаторы генов для штаммов приведены справа.

    На основании последующих определений МИК для одного из экстрактов, E. purpurea 70% экстракта корня EtOH, эта группа из 23 мутантных штаммов была значительно более чувствительна, чем штамм дикого типа S288C (рис.3; 1-сторонний t-критерий P значения 0,01 {+УФ} и 0,004 {темный}). Значения MIC также коррелировали с уменьшением размера колоний, полученным в результате анализов GDA, поскольку мутанты с относительно меньшими размерами колоний в экспериментах с GDA также были наиболее чувствительны к Echinacea на основании определения MIC (данные не показаны). Эти определения MIC подтвердили количественные результаты наших экспериментов с GDA.

    Рис. 3

    Относительная чувствительность 23 сверхчувствительных мутантных штаммов к одному из экстрактов, используемых при скрининге GDA.Значения MIC определяли с использованием 70% EtOH экстракта корня E. purpurea. Штаммы пронумерованы, как в таблице 1, а штамм S288C дикого типа показан слева. MIC определяли с (треугольники) и без (точки) воздействием УФ-света. На график для каждого штамма нанесено значение МИК мут /МИК con , где МИК мут и МИК con представляют собой значения МИК мутантного штамма и S288C соответственно. Мутантные штаммы, чувствительные к этому экстракту, относительно S288C расположены ниже горизонтальной линии.

    Рис. 3

    Относительная чувствительность 23 сверхчувствительных мутантных штаммов к одному из экстрактов, используемых в скрининге GDA. Значения MIC определяли с использованием 70% EtOH экстракта корня E. purpurea. Штаммы пронумерованы, как в таблице 1, а штамм S288C дикого типа показан слева. MIC определяли с (треугольники) и без (точки) воздействием УФ-света. На график для каждого штамма нанесено значение МИК мут /МИК con , где МИК мут и МИК con представляют собой значения МИК мутантного штамма и S288C соответственно.Мутантные штаммы, чувствительные к этому экстракту, относительно S288C расположены ниже горизонтальной линии.

    8″ data-legacy-id=»s3c»> Комбинация обработки ультразвуком с экстрактами дрожжей90 значительно увеличивает гибель клеток90

    Мы оценили, будет ли лечение S.cerevisiae и Cryptococcus neoformans с 70% EtOH экстрактами корней E. purpurea нарушает функцию клеточной стенки с помощью анализа ультразвуком. Основой этих анализов является то, что штамм с дефектом клеточной стенки или подвергающийся воздействию химического вещества, влияющего на биогенез клеточной стенки, с большей вероятностью будет повреждаться и лизировать клеточную стенку во время воздействия ультразвука [28]. В таблице 3 показаны результаты экспериментов по обработке ультразвуком, проведенных с использованием дрожжей дикого типа S288C и штамма YLR338W, который имеет мутацию, предположительно нарушающую функцию клеточной стенки (таблица 1), а также изолят C.neoformans , базидиальные дрожжи. Штаммы грибов культивировали без или с 70% EtOH-экстрактом корней E. purpurea при ~50% МПК, концентрации, которая приводила к снижению скорости роста соответствующих штаммов примерно на 20%. В то время как некоторая чувствительность к ультразвуку была очевидна, когда каждый штамм выращивался без экстракта Echinacea , сочетание обработки ультразвуком и обработки Echinacea привело как минимум к 200-кратному снижению колониеобразующих единиц (КОЕ), что указывает на то, что воздействие до Экстракт эхинацеи значительно повышал чувствительность дрожжевых клеток к разрушению ультразвуком.Чувствительность к экстракту эхинацеи была наиболее выражена у мутанта клеточной стенки YLR338W (снижение КОЕ более чем в 2000 раз, таблица 3). Это, а также тот факт, что как аскомицеты, так и базидиальные дрожжи обладают повышенной чувствительностью к ультразвуку после воздействия экстракта, позволяют предположить, что общий механизм противогрибковой активности Echinacea заключается в нарушении функции клеточной стенки.

    Таблица 3

    Изменения в грибковых КОЕ с воздействием и без воздействия 70% EtOH Экстракт корня Echinacea purpurea и/или обработка ультразвуком.

    КОЕ / мл (× 10 6 ) в определенные моменты времени обработки ультразвуком
    Штамм эхинацеи экстракт 1 0 мин 2,15 мин КОЕ Снижение сгиба 2
    S. Cerevisiae S288C 11.0 2.0 5.5
    S.CEREVISIAE S288C + 2,0 0,01 200
    S.cerevisiae, YLR338W 3,0 0,2 15
    S.cerevisiae, YLR338W + 2.0 <0.001 > 2000
    C. Neoformans 2,0 0.2 10
    C.neoformans + 1,0 0,002 500
    КОЕ / мл (× 10 6 ) в определенное время обработки ультразвуком
    Штамм Echinacea Extract 1 0 мин 0 мин 2,15 мин CFU-края 2
    S. Cerevisiae S288C 11.0 2,0 5,5
    S.cerevisiae, S288C + 2,0 0,01 200
    S.cerevisiae, YLR338W 3,0 0,2 15
    92 433 S.cerevisiae, YLR338W + 2,0 <0,001 > 2000
    C. neoformans 2.0 0,2 10
    C. neoformans + 1,0 0,002 500

    +

    Таблица 3

    Изменения в грибковой CFU с и без воздействия на 70% EtOH эхинацеи пурпурной экстракт корня и/или обработка ультразвуком.

    0 мин

    +

    92 592

    +

    92 565 КОЕ / мл (× 10 6 ) в определенные моменты времени обработки ультразвуком
    Штамм эхинацеи Экстракт 1 2.15 мин КОЕ кратное снижение 2
    S.cerevisiae, S288C 11,0 2,0 5,5
    S.cerevisiae, S288C + 2,0 0.01 200
    S. Cerevisiae YLR338W 3.0 3.0 0,2 15
    S.CEREVISIAE YLR338W + 2,0 <0,001 > 2000
    C. neoformans 2,0 0,2 10
    C. neoformans + 1,0 0,002 500
    +

    92 592

    +

    КОЕ / мл (× 10 6 ) в определенные моменты времени обработки ультразвуком
    Штамм эхинацеи экстракт 1   0 мин  2.15 мин КОЕ кратное снижение 2
    S.cerevisiae, S288C 11,0 2,0 5,5
    S.cerevisiae, S288C + 2,0 0.01 200
    S. Cerevisiae YLR338W 3.0 3.0 0,2 15
    S.CEREVISIAE YLR338W + 2,0 <0,001 > 2000
    C. neoformans 2,0 0,2 10
    C. neoformans + 1,0  0,002  500

    Концентрации экстракта, использованные в этих экспериментах, были установлены на уровне 10% и 20% от значений MIC, а экспозиция составляла более 4,5 часов. На рисунке показан процент выживаемости обработанных ультразвуком клеток по сравнению с не подвергнутыми ультразвуку клетками с добавлением экстракта эхинацеи и без него, а также представлены доказательства дозозависимого ответа, при котором увеличение концентрации эхинацеи приводит к большей чувствительности к разрушению клеточной стенки при обработке ультразвуком. . Результаты приведенных выше экспериментов по обработке ультразвуком подтвердили гипотезу о том, что функции клеточной стенки дрожжей нарушаются при воздействии экстрактов эхинацеи .

    Рис. 4

    Повышенная чувствительность дрожжей к ультразвуку при относительно мягкой обработке 70% этанолом экстракта корней эхинацеи пурпурной. Процент выживших клеток S288C (среднее + SD, n > 4) в образцах, подвергнутых ультразвуку, по отношению к образцам, не подвергнутым ультразвуку (t = 0 с), нанесен на логарифмической шкале в зависимости от времени обработки ультразвуком, где белая полоса = контроль носителя, серая полоса = E. purpurea при 10% концентрации MIC и черная полоса = E.purpurea при 20% МПК. Результаты показывают, что существует взаимосвязь между концентрацией экстракта и выживаемостью клеток, связанная с воздействием на дрожжевые клетки S288C экстракта эхинацеи . Клетки дрожжей, обработанные этим экстрактом эхинацеи при концентрациях 10% и 20% от МПК в течение 4,5 ч, соответственно, примерно в 100 и 1000 раз более чувствительны, чем необработанные клетки, к 85-секундной обработке ультразвуком.

    Рис. 4

    Повышенная чувствительность дрожжей к ультразвуку при относительно мягкой обработке 70% EtOH экстрактом корней эхинацеи пурпурной.Процент выживших клеток S288C (среднее + SD, n > 4) в образцах, подвергнутых ультразвуку, по отношению к образцам, не подвергнутым ультразвуку (t = 0 с), нанесен на логарифмической шкале в зависимости от времени обработки ультразвуком, где белая полоса = контроль носителя, серая полоса = E. purpurea при 10% концентрации MIC и черная полоса = E. purpurea при 20% MIC. Результаты показывают, что существует взаимосвязь между концентрацией экстракта и выживаемостью клеток, связанная с воздействием на дрожжевые клетки S288C экстракта эхинацеи .Клетки дрожжей, обработанные этим экстрактом эхинацеи при концентрациях 10% и 20% от МПК в течение 4,5 ч, соответственно, примерно в 100 и 1000 раз более чувствительны, чем необработанные клетки, к 85-секундной обработке ультразвуком.

    Наконец, прямое микроскопическое исследование клеток S. cerevisiae дало дополнительное подтверждение вышеуказанной гипотезы (рис. 5). Значительно большая частота клеток имела повреждения клеточных стенок, очевидные при обработке экстрактом Echinacea до легкой обработки ультразвуком, по сравнению с клетками, которые не подвергались воздействию экстракта ( P ≥ 0.001, tтест частот, преобразованных из арксинуса квадратного корня).

    Рис. 5

    Влияние воздействия 70% EtOH экстракта корня эхинацеи пурпурной на повреждение клеточной стенки, связанное с обработкой ультразвуком. Изображения флуоресцентной микроскопии (40×, полоса = 5 мкм) обработанных ультразвуком клеток S. cerevisiae , которые (A) не обрабатывались или (B) обрабатывались экстрактом эхинацеи. Белые стрелки указывают на явные повреждения клеточной стенки. (C) Процент (среднее + SE, n > 200 клеток) клеток S. cerevisiae с очевидными повреждениями клеточной стенки без (-son) и с (+son) ультразвуковой обработкой, без (-Ech) и с (+ Ech) 4 ч 70% EtOH E.воздействие экстракта пурпуры . (D) Флуоресцентные микрофотографии (100×, полоса = 5 мкм) клеток, показывающие детали повреждения стенки, связанного с воздействием эхинацеи. Для панелей A, B и D клеточные стенки окрашивали калькофлуоровым белым непосредственно перед микроскопией.

    Рис. 5

    Влияние воздействия 70% EtOH экстракта корня эхинацеи пурпурной на повреждение клеточной стенки, связанное с обработкой ультразвуком. Изображения флуоресцентной микроскопии (40×, полоса = 5 мкм) обработанных ультразвуком клеток S. cerevisiae , которые (A) не обрабатывались или (B) обрабатывались экстрактом эхинацеи.Белые стрелки указывают на явные повреждения клеточной стенки. (C) Процент (среднее + SE, n > 200 клеток) клеток S. cerevisiae с очевидными повреждениями клеточной стенки без (-son) и с (+son) ультразвуковой обработкой, без (-Ech) и с (+ Ech) 4 ч воздействия 70% EtOH E. purpurea экстракта. (D) Флуоресцентные микрофотографии (100×, полоса = 5 мкм) клеток, показывающие детали повреждения стенки, связанного с воздействием эхинацеи. Для панелей A, B и D клеточные стенки окрашивали калькофлуоровым белым непосредственно перед микроскопией.

    Обсуждение

    Используя упорядоченный набор мутантов с делецией гена S. cerevisiae , мы исследовали молекулярный механизм противогрибковой активности экстрактов эхинацеи с точки зрения потенциальных белков-мишеней и путей в дрожжевых клетках. Существенная тенденция, выявленная при анализе 23 делеционных мутантов, которые были сверхчувствительны к 5 или более обработкам Echinacea , заключалась в нарушении функций клеточной стенки. Ранее Башни и др. .[31] предположили, что повышенная ингибирующая активность фототоксичных алкамидов и полиацетеленов, опосредованная ближним УФ-светом, может быть связана с продукцией одного кислорода и перекисным окислением клеточных мембран в организме-мишени. Этот предполагаемый механизм интригует, учитывая результаты нашего анализа GDA и функциональную ассоциацию клеточной мембраны в биогенезе клеточной стенки грибов.

    В таблице 2 перечислены пять функций клеточной стенки, которые нарушены у мутантов, наиболее чувствительных к экстрактам эхинацеи .Связанные мутации, вероятно, нарушают процессы, связанные с клеточной стенкой, такие как организация и синтез комплекса b-1,6-маннозилтрансферазы. Например, было показано, что делеционный штамм KRE6 значительно снижает рост в ответ на шесть из 16 обработок Echinacea (дополнительная таблица S1). Штаммы с дефицитом Kre6p обнаруживают снижение уровня b-1,6-глюкансинтазы и снижение уровня щелочнорастворимых белков в клеточной стенке S. cerevisiae [32].Кроме того, было показано, что мутации, влияющие на Kre6p, вызывают синтетическую летальность при экспрессии в клетках мутантов gas1 [33]. Обратите внимание, что делеционный штамм GAS1 также был идентифицирован в нашей группе из 23 мутантов (таблица 1). GAS1 кодирует гликозилфосфатидилинозитол (GPI)-заякоренный белок, локализованный в плазматической мембране дрожжей [34]. Нарушение GAS1 вызывает утечку β-1,3-глюкана в среду, гиперчувствительность к калькофлуору белилу и повышенное содержание хитина в клеточной стенке [34–36].Наша идентификация как мутантов GAS1 , так и KRE6 среди сверхчувствительных мутантов предполагает, что параллельный путь, связанный с клеточной стенкой, отрицательно влияет на экстракты эхинацеи .

    Идентификация двух генов MNN10 и HOC1 среди наиболее чувствительных штаммов в настоящем исследовании дает дополнительные доказательства того, что соединения Echinacea препятствуют процессам клеточной стенки грибов. Делеция Mnn10p приводит к нарушению биосинтеза маннана in vivo и повышению активности других компонентов клеточной стенки, особенно хитина [37-39].Также было показано, что HOC1 кодирует субъединицу локализованного комплекса Гольджи в маннозилтрансферазе, а Hoc1p играет регуляторную роль в определении размера полимера маннана [40].

    Целостность клеточной стенки, вероятно, имеет решающее значение во время почкования. Предыдущие исследования показали, что Bem2p, также указанный в таблице 1, важен для организации цитоскелета, а также для поддержания клеточной стенки у дрожжей [41]. У дрожжей гены, кодирующие Rho GTPases, такие как RHO1 , которые активируются Bem2p, играют существенную роль в регуляции синтеза клеточной стенки и организации цитоскелета, включая появление почек и рост [42,43].Интересно, что BEM2 участвует в появлении бутонов, а также существует прямое генетическое взаимодействие между BEM2 и RHO1 по тому же пути, который регулирует опосредованный микрофиламентами рост поляризованных клеток [41]. Еще одно важное соображение заключается в том, что экстракты эхинацеи влияют на некоторые другие функции, которые могут косвенно вызывать изменения в синтезе клеточной стенки. Особый интерес представляет обнаружение того факта, что делеция гена убиквитина, URM1 , приводит к повышенной чувствительности к экстрактам Echinacea , поскольку убиквитин метит трансмембранные белки для удаления с мембраны [44,45].

    Обработка ультразвуком используется для физического нарушения клеточных стенок и мембран дрожжей с помощью ультразвуковой кавитации [28,46]. Ультразвуковые анализы предоставили дополнительные доказательства того, что экстракты Echinacea нарушают функции клеточных стенок грибов. Анализы жизнеспособности и прямое микроскопическое исследование показали, что в образцах, подвергшихся воздействию экстрактов корней E. purpurea , наблюдается значительное увеличение частоты гибели клеток, связанной с обработкой ультразвуком, и частоты лизиса клеток. Подобные анализы разрушения клеточной стенки могут идентифицировать дополнительные гены, которые вносят вклад в функцию клеточной стенки в наборе из девяти мутантов с неизвестной функцией, перечисленных в таблице 1.

    Грибы признаны сестринским таксоном животных и имеют много общих биохимических и структурных клеточных особенностей с растениями. Таким образом, разработка противогрибковых соединений, которые ингибируют рост грибов, не нанося вреда растению или животному-хозяину, является сложной задачей. Однако одной из определяющих характеристик грибов является структура и состав клеточной стенки. В результате клеточная стенка и пути целостности клеточной стенки являются одними из наиболее желательных мишеней при разработке новых высокоспецифичных противогрибковых препаратов [47-49].Это исследование предоставляет убедительные доказательства того, что клеточная стенка грибов является основной мишенью для экстрактов эхинацеи , и, таким образом, может объяснить полезность этого фитопрепарата в традиционном лечении микозов.

    Благодарности

    Авторы благодарят Н. Мемариан за техническую помощь и Б. Джонсон за понимание методов анализа клеточных стенок грибов. Это исследование было поддержано Советом по естественным наукам и инженерным исследованиям Канады (NSERC), стратегическими и исследовательскими грантами для MLS, AG и JTA.

    Заявление о заинтересованности: Нет.

    Каталожные номера

    1..

    Лекарственное и другое использование сложноцветных индейцами в США и Канаде

    ,

    J Ethnopharmacol

    ,

    1982

    , vol.

    5

     (стр. 

    303

    358

    )2.,  . , 

    Canadian Medicinal Crops

    1999

    Ottawa, ON

    NRC Research Press

    (стр.

    47

    52

    )3.,  ,  ,  .

    Использование дополнительной и альтернативной медицины среди взрослых: США, 2002 г.

    ,

    Предварительные данные статистики естественного движения населения и здоровья; номер 343

    2004

    Hyattsville, Maryland

    Национальный центр статистики здравоохранения

    4..

    Быстро развивающийся ботанический рынок США

    HerbalGram

    , vol

    00098

    44

     (стр. 

    33

    48

    )5.,  ,  .

    Таксономическая ревизия рода Echinacea (Helianthae: Asteraceae)

    ,

    Syst Bot

    ,

    2002

    , vol.

    27

     (стр. 

    610

    632

    )6.,  ,  ,  .

    Противовирусная активность охарактеризованных экстрактов из Echinacea spp. (Helianthae: Asteraceae) против вируса Herpes simplex (HSV-I)

    ,

    Planta Med

    ,

    2002

    , vol.

    68

     (стр. 

    780

    783

    )7.,  ,  ,  ,  .

    Оценка препарата Echinacea для профилактики и лечения простуды: метаанализ

    ,

    Lancet Infect Dis

    ,

    2007

    , vol.

    7

     (стр. 

    473

    480

    )8.,  ,  , и др.

    Эхинацея стимулирует функцию макрофагов в легких и селезенке нормальных крыс

    ,

    J Nutr Biochem

    ,

    2002

    , vol.

    13

     

    487

    9.. 

    Эхинацея : Обзор литературы; ботаника, история, химия, фармакология, токсикология и клиническое использование

    ,

    HerbalGram

    ,

    1994

    , vol.

    30

     (стр.

    33

    45

    )10., , , и другие.

    Характеристика противовирусной активности препаратов корня эхинацеи

    ,

    Фарм Биол

    ,

    2005

    , том.

    43

     (стр. 

    790

    796

    )11.,  ,  , и др.

    Противогрибковая и противовоспалительная активность рода Эхинацея

    ,

    Фарм Биол

    ,

    2003

    , том.

    41

     (стр. 

    412

    420

    )12.,  .

    Ингибирование вируса с помощью Echinacea purpurea

    ,

    Planta Med

    ,

    1978

    , vol.

    33

     (стр. 

    89

    102

    )13.,  .

    Фитотерапия, Эхинацея

    ,

    Can Pharmaceut J

    ,

    1991

    , vol.

    124

     (стр. 

    512

    515

    )14.. ,  .

    эхинацея — биологические эффекты и активные принципы

    ,

    Фитомедицины европейской химии и биологической активности

    ,

    1998

    Washington, DC

    ACS Книги

    (стр.

    140

    157

    ) 15 ..,

    British Herbal Compendium Vol 1

    1992

    Борнмут, Великобритания

    Британская ассоциация фитотерапии

    pg.

    81

     16.,  ,  ,  ,  . .

    Содержание циторической кислоты и изобутиламида в эхинацея PURPUREA навсегда под влиянием цветок Развитие этапов

    ,

    Перспективы на новых культурах и новых использования

    ,

    1999

    ALEXANDRIA, VA

    ALABS Press

    17 ..

    Использование Echinacea в медицине

    ,

    Biochem Pharmacol

    ,

    2000

    , vol.

    60

     (стр. 

    155

    158

    )18.,  ,  , и др.

    Распределение алкамида эхинацеи и фармакокинетика у человека после приема внутрь таблетки

    77

     (стр. 

    2018

    2029

    )19.,  ,  , и др.

    Исследования проницаемости алкиламидов и конъюгатов кофейной кислоты из Echinacea с использованием модели монослоя клеток Caco-2

    29

     (стр. 

    7

    13

    )20.,  ,  , и др.

    Биодоступность и фармакокинетика алкамидов из корней Echinacea angustifolia у человека

    ,

    J Clin Pharmacol

    ,

    2005

    , vol.

    45

     (стр. 

    683

    689

    )21.,  ,  ,  .

    Фитохимические вариации Echinacea из корней и соцветий дикорастущих и культивируемых популяций

    ,

    J Agric Food Chem

    ,

    2002

    , vol.

    50

     (стр. 

    3673

    3687

    )22.,  ,  ,  .

    Экстракты эхинацеи модулируют характер секреции хемокинов и цитокинов в инфицированных и неинфицированных риновирусами эпителиальных клетках

    20

     (стр. 

    147

    152

    )23.,  ,  , и др.

    Светоопосредованная активность Экстракты эхинацеи

    ,

    Planta Medica

    ,

    2000

    , vol.

    44

     (стр. 

    1494

    1498

    )24.,  ,  , и др.

    Интеграция данных химико-генетического и генетического взаимодействия связывает биоактивные соединения с клеточными путями-мишенями

    22

     (стр.

    62

    69

    )25., , , и другие.

    Echinacea purpurea надземные части содержат несколько противовирусных соединений

    ,

    Pharm Biol

    ,

    2005

    , vol.

    43

     (стр. 

    740

    745

    )26.,  ,  , и др.

    Систематический генетический анализ с упорядоченными массивами делеционных мутантов дрожжей

    ,

    Наука

    ,

    2001

    , том.

    294

     (стр. 

    2364

    2368

    )27.,  ,  , и др.

    Измерение размера колонии штаммов с делецией гена дрожжей для функциональной геномики

    ,

    BMC Bioinf

    ,

    2007

    , том

    8

    стр.

    117

     28.,  ,  ,  ,  .

    Крупномасштабный ультразвуковой анализ мутантов клеточной стенки дрожжей

    ,

    Дрожжи

    ,

    1999

    , vol.

    15

     (стр. 

    1001

    1008

    )29.,  .

    Устойчивость к алкамидам в экстрактах Echinacea purpurea с фенольными кислотами и без них в сухих пленках и растворах

    55

     (стр. 

    120

    126

    )30., , , и другие.

    Признаки дрожжей: выявление существенных признаков, общих для белков дрожжей, для функциональной геномики

    Опосредованная светом биологическая активность натуральных продуктов из растений и грибов

    ,

    Curr Org Chem

    ,

    1997

    , vol.

    1

     (стр. 

    395

    414

    )32.,  .

    Включение Sed1p в клеточную стенку Saccharomyces cerevisiae включает KRE6

    ,

    FEMS Yeast Res

    ,

    2004

    , vol.

    4

     (стр. 

    731

    735

    )33.,  ,  , и др.

    Синтетически летальные мутации с аллелем gas1Delta вызывают дефекты в клеточной стенке Saccharomyces cerevisiae

    ,

    Mol Genet Genomics

    ,

    2003

    , vol.

    269

     (стр. 

    562

    573

    )34.,  ,  ,  ,  .

    Выделение и установленная аминокислотная последовательность гена, кодирующего Gp115, белок, заякоренный на гликофосфолипидах дрожжей, содержащий богатую серином область

    266

     (стр. 

    12242

    12248

    )35.,  ,  , и др.

    Физиологический анализ мутантов указывает на участие Saccharomyces cerevisiae GPI-заякоренного белка gp115 в морфогенезе и разделении клеток

    175

     (стр. 

    1879

    1885

    )36.,  ,  .

    Новый метод количественного определения полисахаридов в клеточной стенке дрожжей. Нанесение на мутанты с дефектом клеточной стенки Saccharomyces cerevisiae

    ,

    Дрожжи

    ,

    1998

    , vol.

    14

     (стр. 

    1297

    1306

    )37.,  ,  , и др.

    Потеря связанного с плазматической мембраной белка Gas1p в Saccharomyces cerevisiae приводит к высвобождению бета-1,3-глюкана в среду и запускает компенсационный механизм для обеспечения целостности клеточной стенки .

    180

     (стр. 

    1418

    1424

    )38.,  ,  ,  ,  .

    Геномный подход к идентификации мутаций, влияющих на чувствительность к каспофунгину у Saccharomyces cerevisiae

    ,

    Противомикробные агенты Chemother

    ,

    2004

    , vol.

    48

     (стр. 

    3871

    3876

    )39.,  ,  .

    Белок Saccharomyces cerevisiae Mnn10p/Bed1p является субъединицей маннозилтрансферазного комплекса Гольджи

    274

     (стр. 

    6579

    6585

    )40.,  ,  ,  ,  .

    Saccharomyces cerevisiae HOC1, супрессор pkc1, кодирует предполагаемую гликозилтрансферазу

    145

     (стр. 

    637

    645

    )41.,  .

    Rho-Gap, кодируемый Bem2, регулирует структуру цитоскелета у почкующихся дрожжей

    ,

    Mol Biol Cell

    ,

    1995

    , vol.

    6

     (стр. 

    1011

    1024

    )42.,  ,  .

    Роль малых G-белков в поляризации клеток дрожжей и биосинтезе стенок

    ,

    Annu Rev Biochem

    ,

    1998

    , vol.

    67

     (стр. 

    307

    333

    )43.,  ,  , и др.

    Локализация в месте роста малого Gtp-связывающего белка Rho1 и его участие в формировании почек у Saccharomyces cerevisiae

    ,

    J Cell Biol

    ,

    1994

    , vol.

    125

     (стр. 

    1077

    1093

    )44.,  ,  , и др.

    NEDD8 рекрутирует E2-убиквитин в лигазу SCF E3

    ,

    EMBO J

    ,

    2001

    , vol.

    20

     (стр. 

    4003

    4012

    )45.,  ,  ,  .

    Новый путь модификации белка, связанный с убиквитиновой системой

    ,

    EMBO J

    ,

    1998

    , vol.

    17

     (стр. 

    2208

    2214

    )46.,  ,  , и др.

    Геномный подход к идентификации и классификации генов, участвующих в формировании клеточной стенки и ее регуляции у Saccharomyces cerevisiae

    ,

    Comp Funct Genomics

    ,

    2001

    , vol.

    2

     (стр. 

    124

    142

    )47.,  ,  .

    Новые препараты и новые мишени для лечения инвазивных грибковых инфекций у онкологических больных

    ,

    Онколог

    ,

    2000

    , том.

    5

     (стр. 

    120

    135

    )48.,  .

    Антибиотики, подавляющие развитие клеточной стенки грибов

    ,

    Annu Rev Microbiol

    ,

    1994

    , vol.

    48

    (стр.

    471

    497

    )49..

    Соединения, активные против клеточных стенок важных с медицинской точки зрения грибов

    ,

    Clin Microbiol Rev

    ,

    1995 900vol.

    6

     (стр. 

    1

    21

    )50.,  ,  ,  ,  .

    База данных протеома дрожжей (YPD): модель организации и представления полногеномных функциональных данных

    ,

    Nucleic Acids Res

    ,

    1999

    , vol.

    27

     (стр.

    69

    73

    )51.

    Проект SGD [База данных генома Saccharomyces]

     

    Эта статья была впервые опубликована в Интернете в Early Online 20 апреля 2010 г.

    Дополнительный материал доступен в Интернете

    Дополнительная таблица 1.

    Дополнение d47099e5259

    © 2010 Международное общество микологии человека и животных

    молекул | Бесплатный полнотекстовый | Химический состав, антибактериальная и противогрибковая активность сырой Dittrichia viscosa (L.) Экстракты листьев Greuter

    2.1. Фитохимический скрининг

    Общее содержание конденсированных танинов (CTC), фенолов (TPC), флавоноидов (TFC) и кофеилхининовой кислоты (CQC) в различных экстрактах D. viscosa указано в таблице 1. Они выражены в мг эквивалента катехина (CE). , мг эквивалента галловой кислоты, мг эквивалента кверцетина (QE) и мг эквивалента хлорогеновой кислоты (ChIA E) на г сухого экстракта соответственно. метанольный экстракт (табл. 1).TPC варьировался от 75,34 ± 1,30 до 123,39 ± 1,22 мг GAE / г, самое высокое содержание было получено в метанольных и 80% этанольных экстрактах (таблица 1). Количество CQC в экстрактах D. viscosa варьировалось от 57,11 ± 0,98 до 87,61 ± 1,06 мг. ChlA E/g (табл. 1), а наибольшее количество CQC зарегистрировано в метанольном экстракте. ТФК варьировала от 30,86 ± 1,28 до 58,03 ± 1,85 мг ХЭ/г, а наибольшее содержание было зарегистрировано в бутанольном экстракте (табл. 1). Метанольный экстракт содержит самые высокие значения CTC, TPC и CQC, в то время как бутанольный экстракт содержит наибольшее количество TFC.Результаты этого исследования ясно показывают, что содержание фенолов и флавоноидов в неочищенных экстрактах D. viscosa варьируется в зависимости от процедуры экстракции растворителем. В частности, это исследование впервые сообщает о наличии конденсированных дубильных веществ в этом виде растений. Действительно, никакие предыдущие исследования не оценивали CTC в листьях D. viscosa, но полученные здесь результаты показывают, что количество в метанольных экстрактах находится в том же диапазоне, что и у некоторых видов сложноцветных, таких как род Artemisia [14]. Напротив, значения TPC тунисской D.viscosa были в том же диапазоне или немного ниже, чем в турецких или марокканских образцах [4,15], что позволяет предположить, что значения TPC D. viscosa не зависят от растительного происхождения. Соответственно, количество ТФХ зависит от полярности растворителя, и оно было самым высоким при повышении полярности растворителя. Аналогичные результаты были получены Negi и Jayaprakasha при изучении метанольных экстрактов кожуры Punica granatum [16]. Однако высокое значение TFC в наших экстрактах было обнаружено в бутанольном экстракте, что позволяет предположить, что флавоноидный состав D.viscosa может состоять из веществ с высокой растворимостью в бутаноле, таких как производные лютеолина [17,18].

    2.3. Антибактериальная, противокандидозная и противогрибковая активность экстрактов D. viscosa

    В таблице 3 показано ингибирующее действие экстрактов D. viscosa на грамположительные (т. е. Staphylococcus aureus, Enterococcus feacium, Streptococcus agalactiae) и грамотрицательные бактерии (т. е. Escherichia coli и Salmonella typhimurium) с ореолом торможения от 9,5 до 34,5 мм. Между разными экстрактами не было зафиксировано статистически значимых различий.Наибольшая антимикробная активность наблюдалась в отношении Enterococcus feacium (G+) и Streptococcus agalactiae (G+) с зонами ингибирования 34,5 ± 0,7 мм и 29 ± 1,41 мм соответственно. Результаты антикандидозной и антималассезионной активности представлены в таблице 4. Диаметр ореола колебался от 7 до 14,5 мм в зависимости от концентрации экстракта. Существенных различий между активностью различных экстрактов в отношении видов Candida не зарегистрировано.

    Что касается биологической активности, то здесь результаты не только подтверждают существующие данные об антибактериальной активности неочищенных экстрактов D.viscosa, но расширили наши знания о противогрибковой активности против различных видов Candida spp. (т.е. C. parapsilosis и C. krusei), штаммы Malassezia и A. fumigatus.

    Все исследованные экстракты проявляли антибактериальную и антикандидозную активность, которая не зависит от растворителя для экстракции, но зависит от концентрации экстракта, что позволяет предположить, что как флавоноидные, так и фенольные соединения могут действовать как антибактериальные и антикандидозные препараты [20]. Хорошо известно, что производные лютеолина, изорамнетин и, в частности, 3′-ди-О-метилкверцетин и 3-О-метилкверцетин из Jordanian D.viscosa обладают прекрасным ингибирующим действием против B. cereus, S. typhimurium и S. aureus. Фенольные соединения, такие как производные гидроксикоричных кислот (кофеоилхиновая кислота и хлорогеновая кислота) или п-кумаровая кислота, также являются мощными ингибиторами E. coli, K. pneumoniae, B. cereus и C. albicans [20,21]. Как фенольные, так и флавоноидные соединения вызывают повреждение клеточных стенок и цитоплазматических мембран бактерий или дрожжей [21,22]. Интересно, что протестированные грамположительные бактерии были значительно более чувствительны к D.viscosa, чем грамотрицательные бактерии, скорее всего, из-за наличия липополисахаридной (ЛПС) мембраны у грамотрицательных бактерий, более устойчивых к чужеродным агентам [23]. Отсутствие этих ЛПС в мембранных клетках Candida spp. делает их уязвимыми для чужеродных агентов. Зона ингибирования анти-Malassezia колебалась от 0 до 11 мм. Среди популяций дрожжей, протестированных в этом исследовании, виды Malassezia демонстрируют профиль восприимчивости, варьирующийся в зависимости от вида и штамма (таблица 4).В частности, все экстракты показали хорошее действие широкого спектра против M. pachydermatis от отита/дерматита собак, тогда как самая низкая эффективность против Malassezia furfur, выделенного из инфекций кровотока человека. Эти результаты неудивительны, поскольку аналогичные тенденции наблюдались при сравнении чувствительности M. pachydermatis и M. furfur к азолам из-за изменчивости химического состава клеточной стенки дрожжей Malassezia [24]. Анти-Malassezia активность наших экстрактов варьировалась не только в зависимости от вида Malassezia, но и от растворителя, используемого для экстракции метанольным экстрактом, наиболее активным против M.фурфур (табл. 4). Действительно, экстракты, приготовленные с использованием растворителей с высокой полярностью (метанол), были более эффективны против видов Malassezia, включая M. furfur, чем экстракты с использованием растворителей с низкой полярностью. Аналогичные тенденции наблюдались при использовании хлороформного экстракта листьев Lawsonia inermis или водных экстрактов Allium cepa и Allium sativum против Malassezia furfur [25]. Активность экстрактов D. viscosa против Malassezia можно объяснить высоким содержанием TFC и CQC, выявленным в метанольных экстрактах, что подтверждает предыдущие результаты с I.paraguariensis [26]. Анализы токсичности и влияние на прорастание грибов экстрактов против M. canis и A. fumigatus представлены в Таблице 5 и Таблице 6 соответственно. Прорастание и спорообразование выражали как средние значения (± стандартное отклонение) Log10 колониеобразующих единиц (КОЕ)/мл, а вегетативный рост как среднее значение (± стандартное отклонение) диаметров колоний (Ø) из трех независимых экспериментов. Все экстракты D. viscosa были способны полностью ингибировать прорастание M. canis при концентрации выше 1 мг/мл.Прорастание A. fumigatus полностью ингибировалось при концентрациях выше 10 мг/мл. Экстракты D. viscosa влияют как на вегетативный рост M. canis, так и на спороношение, будучи нетоксичными для M. canis CD 1279 и M. canis CD 1447 только при использовании этанольного и 80% этанольного экстрактов D. viscosa в концентрации 1 мг/мл ( Таблица 5). Все экстракты D. viscosa токсичны для A. fumigatus, кроме штаммов CD 1435 и CD 1441. В частности, все экстракты D. viscosa в концентрации 1 мг/мл нетоксичны для CD 1435, за исключением 80% спиртовой экстракт, не токсичный для A.fumigatus CD 1441 в этой концентрации. Настоящее исследование показывает, что все экстракты D. viscosa значительно снижают вегетативный рост, прорастание, продукцию конидий как M. canis, так и A. fumigatus, тем самым подтверждая предыдущие результаты против дерматофитов или других видов грибов (т.е. Cladosporium cucumerinum, Botrytis cinerea, Pseudoperonospora cubensis, Phytophthora infestans, Erysiphe graminis и Puccinia helianthi [5,22].Однако все экстракты проявляли ингибирующую активность, зависящую от концентрации, которая варьируется в зависимости от рода гриба.На самом деле, штаммы A. fumigatus, по-видимому, менее восприимчивы, чем M. canis, как ранее сообщалось об использовании ацетоновых экстрактов Arctotis arctotoides [22]. Кроме того, самая высокая противогрибковая активность наблюдалась у метанольных экстрактов обоих видов грибов, что свидетельствует об эффективности содержания как ТФХ, так и CQA в качестве противогрибковых препаратов [21,27]. Механизм действия фенольных соединений на грибы ранее был объяснен несколькими исследованиями и может быть связан с нарушением мембранных липидов.Sung and Lee (2010) [28] продемонстрировали, что фенольные кислоты могут вызывать нарушение транспорта ионов, тогда как Teodoro et al. (2015) [20] указали, что гидроксильная группа и карбоксильные группы феоновых соединений играют важную роль в дестабилизации цитоплазматической мембраны грибов. Даже если необходимо подтвердить низкие значения токсичности метанольного экстракта D. viscosa в одном штамме A. fumigatus, полученные здесь результаты предполагают, что для контроля A. следует использовать концентрации выше 1 мг/мл.штаммы фумигатус. Противогрибковая активность против дрожжей Malassezia, M. canis и A. fumigatus представляет интерес, поскольку борьба с этими инфекциями является предметом дискуссий в научном сообществе. В частности, дрожжевые инфекции Malassezia у животных, в основном у собак, могут не реагировать на противогрибковую терапию, и у животных обычно возникают рецидивы, что требует применения нескольких схем лечения [24]. Лечение инфекций, вызванных M. canis, у животных является обязательным из-за зоофильной природы этого гриба, но не всегда возможно у животных, используемых для производства продуктов питания [28].Наконец, явления высокой устойчивости к азолам, зарегистрированные у Aspergillus spp. штаммов также предполагает полезность исследований новых противогрибковых препаратов [30]. Все эти данные способствуют использованию препаратов растительного происхождения.

    Противогрибковые кремы и лекарства | Типы, использование и побочные эффекты | Пациент

    Что такое противогрибковые препараты и как они действуют?

    Существует несколько типов противогрибковых препаратов. Они выпускаются в виде кремов, спреев, растворов, таблеток, предназначенных для введения во влагалище (пессариев), шампуней, лекарств для приема внутрь и инъекций.Большинство из них работают, повреждая клеточную стенку грибка, что приводит к гибели грибковой клетки.

    Противогрибковые кремы, жидкости или спреи (также называемые местными противогрибковыми средствами)

    Они используются для лечения грибковых инфекций кожи, кожи головы и ногтей. К ним относятся клотримазол, эконазол, кетоконазол, миконазол, тиоконазол, тербинафин и аморолфин. Они бывают разных торговых марок.

    Иногда противогрибковый крем комбинируют с другими кремами, когда требуется два действия.Например, противогрибковый крем часто комбинируют с мягким стероидным кремом, таким как гидрокортизон, для лечения определенных видов сыпи. Противогрибковый крем устраняет инфекцию, а мягкий стероидный крем уменьшает воспаление, вызванное инфекцией.

    В этой серии также есть отдельные брошюры, посвященные кандидозной инфекции кожи (дрожжевой инфекции), грибковой инфекции кожи головы (стригущий лишай) и грибковой инфекции ногтей (Tinea Unguium).

    Противогрибковый шампунь

    Шампунь, содержащий кетоконазол, иногда используется для лечения грибковых инфекций кожи головы и некоторых кожных заболеваний.

    Противогрибковые пессарии

    Пессарии представляют собой таблетки, предназначенные для введения во влагалище. Некоторые противогрибковые препараты используются в качестве пессариев для лечения вагинального молочницы, особенно клотримазол, эконазол, миконазол и фентиконазол

    Противогрибковые препараты для приема внутрь

    Существуют различные типы. Например:

    Миконазол доступен в виде геля для перорального применения, а нистатин — в виде жидкости. Их наносят на рот. Они используются для лечения молочницы (кандидозной инфекции) рта и горла.

    Тербинафин, итраконазол, флуконазол, позаконазол и вориконазол выпускаются в виде таблеток, которые всасываются в организм. Они используются для лечения различных грибковых инфекций. Выбор зависит от того, какой тип инфекции у вас есть. Например:

    • Тербинафин обычно используется для лечения инфекций ногтей, которые обычно вызываются грибковым дерматомикозом.
    • Флуконазол обычно используется для лечения вагинального молочницы в качестве альтернативы использованию противогрибкового крема.Он также используется для лечения и профилактики некоторых грибковых инфекций в организме.

    В этой серии также есть отдельные брошюры, посвященные эпидермофитии, стригущему лишаю и грибковой инфекции паха.

    Противогрибковые инъекции

    Их можно использовать, если у вас серьезная грибковая инфекция в организме. Амфотерицин, флуцитозин, итраконазол, вориконазол, анидулафунгин, каспофунгин и микафунгин — это препараты, которые иногда используются таким образом. Выбор зависит от типа грибка, вызывающего инфекцию.Это специальные лекарства, которые используются для людей, которые обычно находятся в больнице в тяжелом состоянии.

    Примечание : противогрибковые препараты отличаются от антибиотиков, которые являются антибактериальными препаратами. Антибиотики не убивают грибки — они убивают другие виды микробов (называемые бактериями). На самом деле, вы более склонны к грибковой инфекции, если принимаете антибиотики. Например, у многих женщин молочница развивается после курса антибиотиков. Это связано с тем, что антибиотик может убить нормальные безвредные бактерии, которые живут на вашей коже или во влагалище, и облегчить размножение грибков.

    Существует несколько видов противогрибковых препаратов

    Каковы возможные побочные эффекты противогрибковых препаратов?

    Полный список предостережений и возможных побочных эффектов следует прочитать в информационной брошюре, прилагаемой к конкретному бренду. Как правило:

    • Противогрибковые кремы, спреи, жидкости и шампуни . Они обычно не вызывают побочных эффектов и просты в использовании. Иногда у некоторых людей возникает небольшой зуд, жжение или покраснение в месте применения противогрибкового препарата.Если это серьезно, вы должны прекратить его использовать. Иногда после применения вагинальных противогрибковых препаратов у некоторых женщин появляется раздражение вокруг влагалища.
    • Противогрибковые препараты для приема внутрь . Наиболее широко используются тербинафин при инфекциях ногтей, миконазол и нистатин при молочнице полости рта и флуконазол при вагинальной молочнице. Обычно они не вызывают побочных эффектов. Вы даже можете купить флуконазол без рецепта в аптеках, так как он считается лекарством, которое вряд ли вызовет проблемы.Некоторые противогрибковые препараты вызывают проблемы с печенью или более серьезные побочные эффекты у небольшого числа людей. Ниже приведены несколько общих возможных побочных эффектов некоторых наиболее широко используемых противогрибковых препаратов:
      • Тербинафин иногда вызывает боли в животе, потерю аппетита, плохое самочувствие (тошнота), расстройство желудка, диарею, головную боль, сыпь, нарушение вкуса. и боли в мышцах или суставах.
      • Флуконазол может вызывать тошноту, боль в животе, диарею, метеоризм, головную боль или сыпь.
      • Миконазол может вызывать тошноту или недомогание (рвоту) или сыпь.
      • Нистатин может вызывать болезненность во рту.
    • Противогрибковые инъекции . Они имеют больший риск возникновения побочных эффектов, а иногда и серьезных проблем. Тем не менее, они используются для лечения серьезных грибковых инфекций, и риск побочных эффектов должен быть сбалансирован с необходимостью лечения.

    Какова обычная продолжительность лечения противогрибковыми препаратами?

    • Грибковые инфекции кожи, такие как эпидермофития стопы или стригущий лишай: крем обычно используется в течение как минимум двух недель.Иногда требуется до шести недель лечения кремом.
    • Грибковые инфекции ногтей: при приеме противогрибковых таблеток, таких как тербинафин, лечение обычно длится два месяца.
    • Грибковые инфекции легких: это более серьезное заболевание, и продолжительность лечения определяется специалистом в этой области.

    Кто не может принимать или использовать противогрибковые препараты?

    • Как правило, противогрибковые кремы можно использовать без проблем: если есть сомнения, проконсультируйтесь с врачом.
    • Противогрибковые таблетки сильнее кремов и могут взаимодействовать с любыми другими таблетками, которые вы принимаете. Вы должны проконсультироваться с врачом, прежде чем принимать противогрибковые таблетки, если вы принимаете другие лекарства.
    • Как правило, маленькие дети не должны принимать противогрибковые таблетки, но могут использовать кремы.
    • Пожилые люди должны проконсультироваться со своим врачом, прежде чем принимать противогрибковые таблетки, но, как правило, они могут использовать противогрибковые кремы.

    Могу ли я купить противогрибковые препараты?

    Да, в аптеке можно купить ряд противогрибковых кремов (например, клотримазол и тербинафин).Кроме того, вы также можете купить пероральный флуконазол в аптеке для лечения вагинальной молочницы. Имейте в виду, однако, что если вы используете неправильный крем, это может усугубить грибковую инфекцию кожи. Например, при эпидермофитии стоп нельзя использовать стероиды: только крем с тербинафином. Если вы наносите стероидный крем на микоз, это обычно усугубляет его.

    Как пользоваться Программой желтой карты

    Если вы считаете, что у вас возник побочный эффект от одного из ваших лекарств, вы можете сообщить об этом в Программе желтой карты.Вы можете сделать это онлайн на сайте www.mhra.gov.uk/yellowcard.

    Схема желтой карточки используется для информирования фармацевтов, врачей и медсестер о любых новых побочных эффектах, которые могут быть вызваны лекарствами или любыми другими продуктами медицинского назначения. Если вы хотите сообщить о побочном эффекте, вам необходимо предоставить основную информацию о:

    • Побочный эффект.
    • Название лекарства, которое, по вашему мнению, вызвало это.
    • Человек, у которого был побочный эффект.
    • Ваши контактные данные в качестве репортера побочного эффекта.

    Если вы будете заполнять отчет, у вас будет с собой лекарство и/или листовка, прилагаемая к нему.

    Противогрибковый белок Aspergillus giganteus AFPNN5353 активирует путь целостности клеточной стенки и нарушает гомеостаз кальция | BMC Microbiology

    In silico анализ AFP

    NN5353

    CLUSTALW Анализ последовательности аминокислот (аа) AFP NN5353 с другими известными противогрибковыми белками показал, что AFP NN5353 из AFPgiganteus штамм A3274 является белком, гомологичным АФП из штамма A. giganteus MDH 18894 [8, 22]. AFP NN5353 демонстрирует > 90 % идентичности с AFP, но только 42 % идентичности с P. chrysogenum PAF и 27 % идентичности с A. niger ANAFP. На самом деле секретируемая зрелая форма AFP NN5353 состоит из 51 а.о. и отличается от AFP только 5 а.о. (рис. 1). Три замены аа относятся к структурно родственным аа, одна аа имеет слабое сходство и одна аа отличается (позиция 4).Эти обмены аа не влияют на теоретическую изоэлектрическую точку (pI) AFP NN5353 , которая такая же, как и у AFP (pI 9.3, http://expasy.org/tools/protparam.html). Что наиболее важно, AFP NN5353 все еще содержит предполагаемый хитин-связывающий домен CKYKAQ, присутствующий в AFP, но не в PAF или ANAFP, а также содержит все консервативные остатки цистеина, важные для стабилизации белка [10, 23].

    Рисунок 1

    Выравнивание последовательностей Clustalw http://www.ebi.ac.uk/Tools/msa/clustalw2/ противогрибковых белков AFP NN5353
    и AFP из A. giganteus , ANAFP из A. niger и PAF из 6 P. Идентичные аминокислоты (а.о.) отмечены (*), а.о. с сильным сходством отмечены (:), а а.о. со слабым сходством отмечены (.).

    Противогрибковая активность белка AFP

    NN5353

    Для изучения противогрибковой специфичности AFP NN5353 пятнадцать мицелиальных грибов были протестированы на их чувствительность к этому белку.Поскольку противогрибковые белки могут быть полезны для биотехнологических применений, мицелиальные патогенные грибы человека и растений были выбраны в качестве тестовых организмов (например, Fusarium oxysporum , Botrytis cinerea , Mucor sp. и A. fumigatus ) в дополнение к модели. организмы A. nidulans и A. niger . Как показано в Таблице 1, тринадцать из пятнадцати протестированных плесеней оказались чувствительными к AFP NN5353 . A. nidulans дикого типа, N.crassa дикого типа и A. niger дикого типа были наиболее чувствительными штаммами к АФП NN5353 . Минимальная ингибирующая концентрация (МИК) АФП (концентрация, при которой полностью подавляется прорастание конидиев в жидкостных анализах роста) составляла 0,2 мкг/мл для A. nidulans , 0,5 мкг/мл для N. crassa и 1 мкг/мл для А. нигер . Два штамма не были затронуты тестируемыми концентрациями белка: M. circenelloides и M. genevensis были нечувствительны к AFP NN5353 при использовании концентраций до 500 мкг/мл.

    Таблица 1 Минимальные ингибирующие концентрации (МПК; мкг/мл) AFP NN5353 против различных мицелиальных грибов.

    AFP

    NN5353 нарушает целостность клеточной стенки A. nidulans

    Известно, что противогрибковые соединения, такие как конго красный, кофеин, CFW или каспофунгин, мешают биосинтезу клеточной стенки и ослабляют клеточную стенку у грибов (обзоры по [24]). Ремоделирование клеточной стенки этими противогрибковыми соединениями опосредовано активацией CWIP.У грибов внеклеточные сигналы передаются через связанную с мембраной малую ГТФазу RhoA на центральные регуляторы Pkc и Mpk, которые регулируются фосфорилированием/дефосфорилированием. Каскад передачи сигнала, в конечном счете, обеспечивает транскрипцию генов синтеза клеточной стенки, частично через фактор транскрипции RlmA [16, 25]. Соответствующие мутанты с потерей функции или условные мутанты проявляют гиперчувствительные фенотипы в присутствии агентов, нарушающих клеточную стенку [9, 24-26]. Подобно веществам, ослабляющим клеточную стенку, A.giganteus противогрибковый белок AFP модулирует состав клеточной стенки, ингибируя синтез хитина у чувствительных грибов (например, A. niger , A. oryzae ) и индуцируя экспрессию agA , скорее всего, путем активации CWIP [10] .

    Чтобы изучить участие CWIP в токсичности AFP NN5353 , мы сначала проверили, противодействует ли осмотический стабилизатор сорбит токсичности AFP NN5353 . При отсутствии AFP NN5353 A.nidulans хуже размножался в присутствии 1 М сорбита и достигал только 30% роста по сравнению с ростом на стандартной среде (100%). Тем не менее, добавление 1 М сорбита к питательной среде сильно снижало активность AFP NN5353 на A. nidulans дикого типа. Осмотический стабилизатор улучшал рост в присутствии 0,05 мкг/мл AFP NN5353 на 80% по сравнению со скоростью роста 10% в отсутствие сорбита (таблица 2). Это еще более усилилось, когда 0.1 и 0,2 мкг/мл AFP NN5353 , что свидетельствует о том, что AFP NN5353 действительно ослабляет клеточную стенку A. nidulans .

    Таблица 2 Влияние 1 М сорбита на ингибирующую рост активность AFP NN5353 на A. nidulans .

    Чтобы выяснить, индуцирует ли AFP NN5353 транскрипцию гена agA , сходную с AFP, через сигнальный путь Pkc/Mpk, мы проверили влияние противогрибкового белка на трансгенный A.niger , штамм RD6.47, который экспрессирует нацеленный на ядро ​​белок GFP, слитый с промотором A. niger agA . Проростки RD6.47 обрабатывали AFP NN5353 (конц. от 10 до 100 мкг/мл) в течение 2 ч и анализировали под микроскопом. Как показано в дополнительном файле 1, у проростков RD6.47, обработанных ≥ 50 мкг/мл AFP NN5353 , был четко обнаружен ядерный сигнал, аналогичный сигналу при воздействии 10 мкг/мл каспофунгина. Однако у необработанных проростков сигнала не наблюдалось.Эти наблюдения полностью совпадают с данными, полученными для AFP [10]. Здесь следует отметить, что концентрации противогрибкового белка выше, чем MIC, определенная для конидий (> 10-50 раз), необходимы для подавления роста проростков или гиф чувствительных грибов [10, 27] (данные не представлены).

    Затем мы протестировали несколько мутантных штаммов A. nidulans , затронутых центральными игроками CWIP, на их восприимчивость к AFP NN5353 путем определения их радиального роста в присутствии или в отсутствие противогрибкового белка.Поскольку Rhoa является важным белком в A. Nidulans , две штаммы с эктопическими копиями конститутивно активных Rhoa G14V ALLELE и доминантные Rhoa E40I ALLELE [28] были проверены в сравнении к штамму дикого типа (GR5). Мутация rhoA G14V предотвращает гидролиз GTP и, следовательно, делает RhoA постоянно активным [28]. Сходным образом, гидролиз GTP ингибируется в штамме RhoA E40I , но эта мутация также нарушает связывание белка, активирующего GTPase (GAP), с RhoA и, возможно, нарушает эффекторы RhoA-GAP ниже по течению [28].Конститутивно активный штамм RhoA G14V и доминирующий штамм RhoA E40I проявляли такую ​​же чувствительность к AFP NN5353 , что и штамм дикого типа, при низких концентрациях белка (≤ 0,2 мкг/мл) (рис. 2А). Интересно, что доминирующий штамм RhoA E40I был более устойчив к AFP NN5353 , чем штамм дикого типа или штамм RhoA G14V при более высоких концентрациях белка (1 мкг/мл) (рис. 2А). Поэтому мы предполагаем, что токсичность AFP NN5353 передается мишенями RhoA-GAP, а не самим RhoA.Эти мутанты вели себя сходным образом при воздействии ортологичного противогрибкового белка PAF P. chrysogenum [9].

    Рисунок 2

    AFP NN5353
    восприимчивость A. nidulans мутанты RhoA G14V , RhoA E40I , Alca -PkcA и Δ mpkA по сравнению с соответствующими штаммами-реципиентами GR5 и R153 . (A) Всего 2 × 10 3 конидий точечно инокулировали на чашках с агаром (CM для GR5, RhoA G14V , RhoA E40I и Δ mpkA , репрессивная ММ, содержащая 1% 26] для R135 и alcA -PkcA), содержащих соответствующие добавки и 0, 0,2 и 1 мкг/мл AFP NN5353 для GR5, RhoA G14V , RhoA E40I
    -alcA , R10094, R115 и Мутант Δ mpkA и его эталонный штамм GR5 подвергались воздействию 0, 0.5 и 1 мкг/мл AFP NN5353 . Планшеты инкубировали при 37°С в течение 48 часов. (B) 1 × 10 4 конидий/мл мутанта Δ mpkA и GR5 обрабатывали 0,05 мкг/мл AFP NN5353 или без белка (контроль) в общем объеме 200 мкл соответственно дополненной СМ в 96-луночных планшетах.

    Кроме того, мутанты, дефектные по активности PkcA и MpkA, тестировали на чувствительность к AFP NN5353 . Поскольку pkcA является важным геном в A.nidulans использовали условный мутантный штамм alcA -PKC, в ​​котором ген pkcA был поставлен под контроль промотора alcA , который репрессируется глюкозой, но дерепрессируется глицерином [26]. Как условный мутант alcA -PKC (культивируемый в репрессивных условиях), так и мутант Δ mpkA были гиперчувствительны к AFP NN5353 по сравнению со штаммами-реципиентами R153 и GR5, соответственно, что указывает на то, что активность PkcA и MpkA придает определенная устойчивость к AFP NN5353 (рис. 2А).Гиперчувствительный фенотип мутанта Δ mpkA был также подтвержден с помощью анализов ингибирования роста в жидкости. В незараженном жидком состоянии GR5 и мутант Δ mpkA показали сопоставимую скорость пролиферации (рис. 2В). Однако в присутствии 0,05 мкг/мл AFP NN5353 штамм с делецией mpkA не прорастал, тогда как штамм GR5 по-прежнему демонстрировал 11% рост. Обратите внимание, что ингибирование роста в жидких условиях требует меньшего количества противогрибкового белка для мониторинга его токсичности, чем на твердых средах, вероятно, из-за меньшей диффузии в последнем случае (данные не показаны).

    Из этих данных мы делаем вывод, что AFP NN5353 вмешивается в гомеостаз клеточной стенки A. nidulans и что это взаимодействие опосредуется передачей сигналов PkcA/MpkA, хотя и независимо от RhoA.

    AFP

    NN5353 нарушает гомеостаз кальция у A. niger

    Добавки, отличные от осмотических стабилизаторов, также могут противодействовать активности противогрибковых белков растений и аскомицетов. Например, добавление катионов, таких как ионы Ca 2+ , к питательной среде обращало противогрибковую активность P.chrysogenum PAF [17], A. giganteus AFP [15, 21] и растительных дефенсинов [29, 30], которые обычно несут положительный заряд из-за их высокой pI. Катионочувствительный противогрибковый механизм действия может, например, быть связан с нарушением внутриклеточного гомеостаза Ca 2+ противогрибковыми пептидами [17, 18], но также может быть результатом интерференции катионов с противогрибковым взаимодействием (взаимодействиями) с мишенью. .

    Поэтому мы проверили, в какой степени эти эффекты также объясняют противогрибковую активность AFP NN5353 .С этой целью мы выбрали A. niger в качестве модельного организма, потому что эта плесень была высокочувствительна к AFP NN5353 , и был доступен трансгенный штамм, который экспрессировал рекомбинантный кодон-оптимизированный Ca 2+ -чувствительный фотопротеин экворин для измерения [ Ca 2+ ] c уровень покоя в ответ на AFP NN5353 [31]. Сначала мы протестировали активность AFP NN5353 в среде Vogels* с добавлением 5-20 мМ CaCl 2 или без CaCl 2 в качестве контроля (данные не показаны).Добавление CaCl 2 не влияло на рост A. niger до концентрации 20 мМ. Однако рост A. niger , подвергшихся воздействию AFP NN5353 , улучшался в присутствии возрастающих концентраций CaCl 2 . 20 мМ CaCl 2 нейтрализовали токсичность 0,5-1,0 мкг/мл AFP NN5353 , и обработанные образцы возобновили рост до 100% (таблица 3).

    Таблица 3 Влияние 20 мМ внешнего CaCl 2 (в среде Фогельса*) на ингибирующую рост активность AFP NN5353 на A.niger , штамм A533.

    Затем мы определили влияние AFP NN5353 на внутриклеточную сигнатуру Ca 2+ . Перед добавлением AFP NN5353 уровень покоя внутриклеточного Ca 2+ составлял 0,08 мкМ. Однако мы смогли показать, что уровень [Ca 2+ ] c в состоянии покоя был значительно повышен в двенадцатичасовых культурах A. niger , которые обрабатывали 20 мкг/мл AFP NN5353 . Уровень покоя [Ca 2+ ] c поднялся до максимума 0.19 мкМ в течение первых 8 минут и оставался повышенным в течение всего времени измерения (60 минут), тогда как уровень Ca 2+ в необработанном контроле оставался на уровне 0,08 мкМ (рис. 3). Это указывает на то, что AFP NN5353 действительно нарушает гомеостаз Ca 2+ в A. niger .

    Рисунок 3

    Увеличение в состоянии покоя [Ca 2+ ] c
    двенадцатичасового возраста А.niger проростки, обработанные AFP NN5353
    или без белка (контроль) . Измерения проводились каждые 1,4 минуты. Значения представляют собой среднее значение шести образцов.

    Чтобы исключить возможность того, что AFP NN5353 вызывает повышение уровня [Ca 2+ ] c в состоянии покоя из-за проницаемости мембраны и/или образования пор, мы изучили влияние AFP NN5353 на проростков. в присутствии CMFDA, проникающего через мембрану красителя, который метаболизируется жизнеспособными клетками, и непроникающего через мембрану красителя йодида пропидия (PI).Дополнительный файл 2 показывает, что образцы, обработанные 20 мкг/мл AFP NN5353 в течение 10 минут, метаболизировали CMFDA, но не поглощали PI, что приводило к зеленой, но не красной флуоресценции, подобно необработанным контролям. Это указывало на то, что плазматическая мембрана оставалась интактной после 10 мин обработки белком. Образцы, подвергшиеся воздействию этанола, не метаболизировали CMFDA, но приобрели ярко-красный цвет из-за интернализации PI, что указывает на пермеабилизацию мембраны. Поэтому мы заключаем, что быстрое увеличение [Ca 2+ ] c в течение первых 10 минут обработки белком не является результатом неконтролируемого притока Ca 2+ из-за пермеабилизации плазматической мембраны.

    Хелатор кальция BAPTA отменяет AFP

    NN5353 индуцированную кальциевую сигнатуру

    Увеличение [Ca 2+ ] c в ответ на AFP NN5353 лечение может быть вызвано внутриклеточным или 3 введением Ca/ + хранилища, такие как митохондрии, вакуоли, эндоплазматический ретикулум или аппарат Гольджи. Чтобы различать внеклеточный и внутриклеточный источник увеличения [Ca 2+ ] c , мы протестировали влияние Ca 2+ -селективного непроницаемого для мембран хелатора BAPTA.Сам по себе BAPTA не влиял на уровень покоя [Ca 2+ ] c в двенадцатичасовых культурах A. niger (рис. 4). Однако предварительная обработка образцов 10 мМ BAPTA перед добавлением AFP NN5353 ингибировала специфичное для белка увеличение [Ca 2+ ] c в состоянии покоя (рис. 4). Интересно, что повышенный уровень [Ca 2+ ] c в ответ на 40-минутную обработку AFP NN5353 снизился до уровня покоя сразу после добавления 10 мМ BAPTA (рис. 4), что указывает на то, что AFP NN5353 -индуцированное повышение уровня [Ca 2+ ] c в покое требует постоянного притока внеклеточного Ca 2+ и в конечном итоге приводит к потере [Ca 2+ ] c гомеостаза.

    Рисунок 4

    Влияние внеклеточного хелатора BAPTA на АФП NN5353
    индуцированный [Ca 2+ ] c
    уровень покоя . 10 мМ BAPTA (конечная концентрация) применяли за 40 минут до или через 40 минут после обработки 20 мкг/мл AFP NN5353 . Образцы без добавок использовали в качестве контроля. Стандартное отклонение (n = 6) составляло менее 10% представленных значений.

    Внеклеточный кальций улучшает АФП

    NN5353 -индуцированное повышение [Ca 2+ ] c

    отслеживали влияние добавленного извне Ca 2+ на сигнатуру Ca 2+ , индуцированную AFP NN5353 . С этой целью проростков A. niger предварительно инкубировали с 20 мМ CaCl 2 в течение 10 мин перед добавлением 20 мкг/мл AFP NN5353 и изменениями уровня [Ca 2+ ] 1 c в состоянии покоя. наблюдали в течение 60 мин.Эта обработка привела к менее выраженному повышению уровня [Ca 2+ ] c в состоянии покоя по сравнению с образцами без предварительной инкубации с CaCl 2 . Напротив, присутствие только 20 мМ CaCl 2 не оказывало существенного влияния на внутриклеточный уровень покоя [Ca 2+ ] c , который напоминал контроль без AFP NN5353 (данные не показаны). Значения уровней [Ca 2+ ] c в покое за последние 10 минут (от 50 до 60 минут) измерения лечения AFP NN5353 в присутствии или в отсутствие высокой концентрации Ca 2+ (20 мМ против 0.7 мМ) приведены в таблице 4. Среднее значение [Ca 2+ ] c в контрольных группах, не подвергавшихся воздействию АФП NN5353 , составляло 0,039 мкМ в присутствии 0,7 мкМ CaCl 2 (стандартный условие) и 0,062 мкМ в присутствии 20 мМ CaCl 2 . Когда был добавлен AFP NN5353 , не было значительного повышения [Ca 2+ ] c в среде с высоким содержанием Ca 2+ (20 мМ) (0,057 мкМ), тогда как [Ca 2+ ] c вырос до 0.146 мкМ при стандартной концентрации CaCl 2 (0,7 мМ). Эти результаты свидетельствуют о том, что Ca 2+ , добавленный извне перед добавлением AFP NN5353 , противодействует вызываемому AFP NN5353 возмущению [Ca 2+ ] c и эффекту ингибирования роста, по крайней мере частично, за счет контроль уровня покоя [Ca 2+ ] c .

    Таблица 4 Влияние высоких внешних концентраций CaCl 2 на AFP NN5353 , индуцированное сигнатурой Ca 2+ в ответ на AFP NN5353 .

    AFP

    NN5353 уменьшает амплитуду ответа [Ca 2+ ] c на механическое воздействие у A. niger

    Известно, что диапазон внешних раздражителей временно увеличивается [Ca 90 ] c уровни у Aspergilli и других грибов [31, 32]. Одним из таких физиологических раздражителей является механическое возмущение, которое достигается быстрым введением в тест-систему изотонической среды. Этот стимул приводит к уникальной сигнатуре Ca 2+ , вероятно, вовлекающей различные компоненты Ca 2+ -передачи сигналов и Ca 2+ гомеостатического механизма.Изменения в этой специфической сигнатуре Ca 2+ в присутствии соединений, таких как AFP NN5353 , могут дать представление о механизме действия этих соединений. В нашем исследовании двенадцать выдержанных культур A. niger предварительно инкубировали с AFP NN5353 в течение 60 мин, а затем подвергали механическому воздействию (быстрое введение 100 мкл среды Фогельса). Полученные характеристики Ca 2+ , включая [Ca 2+ ] c в состоянии покоя, кинетику и амплитуду, определяли и сравнивали с контролями, которые не подвергались воздействию белка, но также подвергались механическим воздействиям.Как показано на рисунке 5, AFP NN5353 вызывал менее выраженную амплитуду [Ca 2+ ] c ; однако уровень [Ca 2+ ] c оставался повышенным даже после прекращения стимул-специфического ответа.

    Рисунок 5

    Эффекты ОВП NN5353
    на [Ca 2+ ] c
    реакция на механическое возмущение .Двенадцать культур A. niger обрабатывали 20 мкг/мл АФП NN5353 в течение 60 мин перед стимуляцией механическим воздействием (добавление 100 мкл среды Фогельса). Сигнатуру [Ca 2+ ] c отслеживали в течение 5 мин. Значения представляют собой среднее значение шести образцов.

    AFP

    NN5353 Связывание и поглощение необходимы для токсичности белков в A. nidulans

    Для понимания функции противогрибковых белков крайне важно определить место действия в организмах-мишенях.До сих пор существуют противоречивые сообщения о локализации гомологичного белка AFP A. giganteus . Было обнаружено, что АФП связывается с внешними слоями, т.е. клеточная стенка или плазматическая мембрана чувствительных грибов [20, 21] и внутриклеточная локализация, зависящая от времени и концентрации [20]. В другом исследовании было показано, что Alexa-меченый АФП интернализуется грибковой клеткой и локализуется в ядре [33].

    Чтобы проанализировать поглощение и локализацию AFP NN5353 , мы провели непрямое иммунофлуоресцентное окрашивание с помощью A.nidulans дикого типа, подвергнутого воздействию сублетальной концентрации АФП NN5353 (0,2 мкг/мл). Мы применяли количество белка ниже токсичной концентрации для гиф, чтобы сохранить клеточную структуру и избежать апоптотического разрушения клеток [34]. Наше исследование показало, что белок интернализуется через 90 минут инкубации, в основном в кончиках гиф, но также и в сегментах гиф (рис. 6А, В). Белок, по-видимому, не локализуется в клеточных компартментах, а распределяется в цитоплазме. Аналогичные результаты были получены с А.niger дикого типа (данные не показаны). Контрольные эксперименты подтвердили специфичность внутриклеточных иммунофлуоресцентных сигналов: никаких внутриклеточных флуоресцентных сигналов не было обнаружено в образцах, где либо AFP NN5353 (рис. 6C, D), либо первичное антитело, либо вторичное антитело было опущено (данные не показаны). Рисунок 6
    антитело .Грибы инкубировали с 0,2 мкг/мл AFP NN5353 (A, E, G) или без противогрибкового белка (C) . 20 мкг/мл латрункулина B (E) и 10 мМ Ca 2+ (G) значительно снижали поглощение белка. (B, D, F, H) являются соответствующими световыми микроскопическими изображениями (A, C, E, G) . Масштабная линейка 10 мкм.

    Для более детального анализа локализации АФП NN5353 A. nidulans инкубировали с АФП NN5353 в присутствии латрункулина В, мощного ингибитора полимеризации актина и эндоцитоза [35–37].При низких концентрациях ларункулина В (5 мкг/мл) поглощение белка было значительно снижено по сравнению с положительным контролем без ларункулина В (данные не представлены), тогда как 20 мкг ларункулина В/мл полностью ингибировали поглощение 0,2 мкг/мл АФП NN5353. . Растворитель латрункулина В, ДМСО, не оказывал отрицательного влияния на поглощение белка (данные не представлены). Это указывает на то, что AFP NN5353 проникает в клетки A. nidulans по эндоцитотическому механизму (рис. 6E, F).

    Основываясь на нашем наблюдении, что ионы Ca 2+ противодействуют ингибирующей рост активности AFP NN5353 , мы задались вопросом, предотвращает ли Ca 2+ опосредованную актином интернализацию противогрибкового белка.

    Добавить комментарий

    Ваш адрес email не будет опубликован.

    *

    *

    *